Type de l'hypersensibilité retardée (DTH) est une réaction inflammatoire médiée par CCR7-lymphocytes T effecteurs mémoire. Ici nous démontrons comment provoquer SRD actifs chez le rat Lewis et de surveiller la réponse inflammatoire.
Abstract
Type de l'hypersensibilité retardée (DTH) est une réaction inflammatoire médiée par CCR7-lymphocytes T effecteurs mémoire qui infiltrent le site de l'injection d'un antigène contre lequel le système immunitaire a été amorcée. La réaction inflammatoire est caractérisée par une rougeur et une enflure du site de stimulation antigénique. C'est un modèle pratique pour déterminer l'efficacité in vivo d'immunosuppresseurs. SRD cutanée peut être induite soit par transfert adoptif de lymphocytes T spécifiques d'antigènes ou par l'immunisation active avec un antigène, et les suivantes défi intradermique avec l'antigène pour induire la réaction inflammatoire dans une zone de peau donnés. Réponses DTH peuvent être induites à des antigènes différents, par exemple l'ovalbumine, la tuberculine, anatoxine tétanique, ou hémocyanine de patelle (KLH).
Ici nous démontrons comment provoquer une réaction active SRD chez le rat Lewis. Nous allons d'abord préparer une émulsion eau dans huile de KLH, notre antigène d'intérêt, dans l'adjuvant complet de Freund et injecter cette émulsion sous-cutanée à des rats. Ce sera le système immunitaire pour développer des cellules T mémoires dirigés à la KLH. Sept jours plus tard, nous mettra au défi les rats par voie intradermique sur le dos avec KLH d'un côté et avec de l'ovalbumine, un antigène non pertinents, de l'autre côté. La réaction inflammatoire sera visible de 16 à 72 heures plus tard et la zone rouge et enflée sera mesuré comme une indication de la gravité de SRD.
Protocol
1. Préparation de l'émulsion L'émulsion est un mélange 1:1 de l'antigène (SRD peut être induite à des antigènes différents: l'ovalbumine, l'anatoxine tétanique, serrure patelle hémocyanine ….) en solution aqueuse ajoutée à l'adjuvant complet de Freund. Il est très important d'ajouter l'antigène à l'adjuvant et non l'inverse! Il ya beaucoup de déchets lors de l'injection et une émulsion, il faut donc toujours se préparer 1,5 …
Discussion
Pour une mesure plus précise de la réaction de DTH, nous recommandons contester le rat avec l'antigène dans le pavillon de l'oreille. La réaction peut alors être mesurée comme une différence dans l'oreille de l'enflure entre les antigènes concernés a contesté l'oreille et l'oreille a contesté avec une solution saline seule ou avec l'antigène pertinent. Une démonstration de relever le défi de l'oreille est montré dans 1.
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Materials
Material Name
Type
Company
Catalogue Number
Comment
Complete Freund’s adjuvant H37Ra
Reagent
Difco
231131
Distributed by Fisher under catalog # DF 311-360-5
Keyhole Limpet hemocyanin
Reagent
Sigma
H-5654
Ovalbumin
Reagent
Sigma
A-5503
5 ml glass syringes
Tool
Fisher
14-823-10 B
Need two 5 ml syringes for each batch of 5 ml of emulsion
18G metal bridge
Tool
Fisher
14-825-17L
Lewis rats
Animal
Harlan Sprague Dawley
Female rats 7-9 weeks old
23G 1″ needles
Tool
Fisher
14-826 AA
It is best to change needles between rats
3 ml Luer Lock syringes
Tool
Fisher
05-561-63
DPBS
Reagent
Gibco/Invitrogen
14040-182
1 ml regular tip syringes
Tool
Fisher
22-257-154
27G 1/2″ needles
Tool
Fisher
14-826-48
Electric cordless trimmer
Tool
Braintree Scientific
CLP-32130
To shave the rats before antigen challenge in the back.
Use sterile solutions reagents and syringes. The glass syringes and 18G bridges can be autoclaved.
Read material data sheet before handling a reagent for the first time and wear appropriate protective equipment.
Beeton, C., Chandy, K. G. Induction and Monitoring of Active Delayed Type Hypersensitivity (DTH) in Rats. J. Vis. Exp. (6), e237, doi:10.3791/237 (2007).