Ipersensibilità di tipo ritardato (DTH) è una reazione infiammatoria mediata dai linfociti memoria CCR7-T effettrici. Qui mostriamo come per indurre DTH attivo nei ratti Lewis e monitorare la risposta infiammatoria.
Abstract
Ipersensibilità di tipo ritardato (DTH) è una reazione infiammatoria mediata dai linfociti memoria CCR7-T effettrici che si infiltrano nel sito di iniezione di un antigene contro il quale il sistema immunitario è stato innescato. La reazione infiammatoria è caratterizzata da arrossamento e gonfiore nel sito di uno stimolo antigenico. Si tratta di un modello pratico per determinare l'efficacia in vivo di immunosoppressori. DTH cutanea può essere indotta in seguito a trasferimenti adottivo di antigene-specifica dei linfociti T o per l'immunizzazione attiva con un antigene, e la successiva sfida intradermica con l'antigene per indurre la reazione infiammatoria della pelle in una zona determinata. Risposte DTH può essere indotto a vari antigeni, per esempio ovalbumina, tubercolina, tossoide tetanico, o buco della serratura patelle hemocyanin (KLH).
Qui mostriamo come per indurre una reazione attiva DTH nei ratti Lewis. Per prima cosa preparare un acqua in emulsione di olio KLH, antigene di nostro interesse, in adiuvante completo di Freund e questa emulsione iniettare per via sottocutanea nei ratti. Questo sarà il primo sistema immunitario di sviluppare cellule T di memoria diretta a KLH. Sette giorni dopo ci sarà una sfida per i ratti intradermica sul retro con KLH da un lato e con ovalbumina, un antigene irrilevante, sul lato opposto. La reazione infiammatoria sarà visibile 16-72 ore più tardi e la zona rossa e gonfia sarà misurata come indice di gravità DTH.
Protocol
1. Preparazione della emulsione L'emulsione è una miscela 1:1 di antigene (DTH può essere indotto a vari antigeni: ovoalbumina, tossoide tetanico, buco della serratura patelle hemocyanin ….) in soluzione acquosa aggiunto per completare adiuvante di Freund. E 'molto importante aggiungere l'antigene per l'adiuvante e non viceversa! Ci sono un sacco di rifiuti al momento e iniettando una emulsione, in modo sempre preparare 1,5 o 2 volte più di quello che vi serve. …
Discussion
Per una misurazione più precisa della reazione DTH si consiglia sfida i topi con l'antigene nel padiglione dell'orecchio. La reazione può essere misurata come differenza all'orecchio gonfiore tra le pertinenti antigene-sfidato l'orecchio e l'orecchio sfidato sia con soluzione salina da solo o con l'antigene irrilevante. Una dimostrazione della sfida a livello dell'orecchio mostrato in 1.
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Materials
Material Name
Type
Company
Catalogue Number
Comment
Complete Freund’s adjuvant H37Ra
Reagent
Difco
231131
Distributed by Fisher under catalog # DF 311-360-5
Keyhole Limpet hemocyanin
Reagent
Sigma
H-5654
Ovalbumin
Reagent
Sigma
A-5503
5 ml glass syringes
Tool
Fisher
14-823-10 B
Need two 5 ml syringes for each batch of 5 ml of emulsion
18G metal bridge
Tool
Fisher
14-825-17L
Lewis rats
Animal
Harlan Sprague Dawley
Female rats 7-9 weeks old
23G 1″ needles
Tool
Fisher
14-826 AA
It is best to change needles between rats
3 ml Luer Lock syringes
Tool
Fisher
05-561-63
DPBS
Reagent
Gibco/Invitrogen
14040-182
1 ml regular tip syringes
Tool
Fisher
22-257-154
27G 1/2″ needles
Tool
Fisher
14-826-48
Electric cordless trimmer
Tool
Braintree Scientific
CLP-32130
To shave the rats before antigen challenge in the back.
Use sterile solutions reagents and syringes. The glass syringes and 18G bridges can be autoclaved.
Read material data sheet before handling a reagent for the first time and wear appropriate protective equipment.
Beeton, C., Chandy, K. G. Induction and Monitoring of Active Delayed Type Hypersensitivity (DTH) in Rats. J. Vis. Exp. (6), e237, doi:10.3791/237 (2007).