Amaxa Nucleofector के साथ मानव तंत्रिका स्टेम सेल Transfecting
Summary
एक सेल में ब्याज की एक जीन का परिचय vivo में अपनी समारोह elucidating के लिए एक शक्तिशाली विधि है. इस प्रोटोकॉल मानव तंत्रिका स्टेम / अग्रदूत (hNSPCs) कोशिकाओं Nucleofector electroporation Amaxa द्वारा बनाया तंत्र का उपयोग कर के एक संस्कृति transfecting का एक कारगर तरीका बताता है.
Abstract
प्राथमिक मानव तंत्रिका स्टेम / अग्रदूत (hNSPCs) आमतौर पर इस्तेमाल किया धनायनित लिपिड अभिकर्मक अभिकर्मकों के साथ कोशिकाओं, जैसे स्तनधारी तंत्रिका कोशिकाओं, के अभिकर्मक अक्सर गरीब सेल व्यवहार्यता और कम अभिकर्मक दक्षता में हुई है. ब्याज की एक जीन, जैसे, एक जीन बंदूक या microinjection शुरू करने के अन्य यांत्रिक तरीकों को भी गरीब सेल व्यवहार्यता और ट्रांसफ़ेक्ट कोशिकाओं की कम संख्या के द्वारा सीमित हैं. वायरल constructs का उपयोग करने के लिए प्राथमिक कोशिकाओं में एक exogenous जीन परिचय की रणनीति दोनों समय और श्रम की राशि वायरल vectors और संभावित सुरक्षा चिंताओं को बनाने के लिए आवश्यक द्वारा विवश है. हम यहाँ बिजली के वर्तमान मापदंडों और बफर समाधान विशेष रूप से तंत्रिका स्टेम कोशिकाओं transfecting के लिए अनुकूलित के साथ Amaxa Nucleofector डिवाइस और प्रौद्योगिकी का उपयोग करने hNSPCs transfecting के लिए एक कदम दर कदम प्रोटोकॉल का वर्णन. इस प्रोटोकॉल का उपयोग करना, हम ~ 35% के प्रारंभिक अभिकर्मक क्षमता हासिल किया है और स्थिर अभिकर्मक के बाद 70% ~. प्रोटोकॉल के लिए उपयुक्त Nucleofector डिवाइस के साथ electroporation द्वारा पीछा बफर में ट्रांसफ़ेक्ट हो डीएनए के साथ hNSPCs के एक उच्च संख्या के संयोजन जरूरत पर जोर देता है.
Protocol
Discussion
इस प्रोटोकॉल hNSPCs के लिए एक अपेक्षाकृत तेजी से और कुशल अभिकर्मक प्रक्रिया का वर्णन करता है. इस प्रक्रिया का उपयोग करना, हम ~ 35% के प्रारंभिक अभिकर्मक क्षमता प्राप्त की है. इस प्रक्रिया द्वारा ट्रांसफ़ेक्ट कक्ष अल?…
Acknowledgements
लेखकों के लिए बच्चों के अस्पताल, ऑरेंज काउंटी hNSPC संस्कृतियों प्रदान करने के लिए अनुसंधान संस्थान में राष्ट्रीय मानव तंत्रिका स्टेम सेल संसाधन के डॉ. फिलिप एच. Schwartz स्वीकार करते हैं करना चाहते हैं.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| The Nucleofector Device | Tool | Amaxa | AAD-1001 | |
| Mouse neural stem cell nucleofector kit | Reagent | Amaxa | VPG-1004 |
References
- Gresch, O., Engel, F. B., Nesic, D., Tran, T. T., England, H. M., Hickman, E. S., Krner, I., Gan, L., Chen, S., Castro-Obregon, S., Hammermann, R., Wolf, J., M ller-Hartmann, H., Nix, M., Siebenkotten, G., Kraus, G., Lun, K. New non-viral method for gene transfer into primary cells. Methods. 33, 151-163 (2004).
- Marchenko, S., Flanagan, L. A. Passaging Human Neural Stem Cells. Journal of Visualized Experiments. 7, (2007).
- Marchenko, S., Flanagan, L. A. Counting Human Neural Stem Cells. Journal of Visualized Experiments. 7, (2007).
