Мы опишем способ получения органотипической срезах гиппокампа, которые могут быть легко адаптированы для других областей мозга. Мозг ломтики укладываются на пористые мембраны и культура СМИ позволили сформировать интерфейс. Этот метод сохраняет валового архитектуры гиппокампа на срок до 2-х недель в культуре.
Гиппокампе, компонент лимбической системы, играет важную роль в долговременной памяти и пространственной навигации 1. Нейронов гиппокампа может изменять силу своих связей после коротких периодов сильной активации. Это явление, известное как долгосрочные потенцирования (LTP) может длиться в течение нескольких часов или дней и стал лучшим кандидатом механизм обучения и памяти 2. Кроме того, четко определены анатомии и связи гиппокампа 3 сделал классической модельной системой для изучения синаптической передачи и синаптической пластичности 4.
Как наше понимание физиологии гиппокампа синапсов вырос и молекулярных игроков стал отождествляться, должны манипулировать синаптические белки стало императивом. Органотипической гиппокампа культур дают возможность для облегчения работы генов и точное фармакологического вмешательства, но сохранить синаптических организация, которая имеет решающее значение для понимания синапсов функционировать в более натуралистическом контексте, чем обычный культуре диссоциированных методы нейронов.
Здесь мы представляем метод для подготовки и культуры срезах гиппокампа, которые могут быть легко адаптированы для других областей мозга. Этот метод позволяет легко добраться до срезы для генетических манипуляций, используя различные подходы, такие как вирусная инфекция или 5,6 biolistics 7. Кроме того, ломтики может быть легко восстановлено для биохимических анализов 8, или переведены на микроскопы для работы с изображениями 9 или электрофизиологических экспериментов 10.
Этот метод основан на методе, впервые описанный Stoppini и соавт. 11 и предлагает быстрый способ к культуре срезах гиппокампа. Наиболее важным аспектом этого протокола заключается в поддержании ломтиками стерильной, поэтому очень важно использовать соответствующие методы и сте?…
The authors have nothing to disclose.
Эта работа финансировалась NINDS – NIH R01NS060756
Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
---|---|---|---|---|
Cell culture inserts | Millipore | PICM03050 | ||
6 well plates | BD Falcon | 353046 | ||
Tissue Slicer | Stoelting | 51425/51415 | ||
Microscope | Olympus | SZX7-ILLD2-100 | ||
Hippocampus dissecting tool | F.S.T | 10099-15 | ||
Large utility scissors. Perfection | F.S.T | 37500-00/37000-00 Right/ Left handed | ||
Iris Spatula | F.S.T | 10093-13 | ||
Straight spatula | F.S.T | 10094-13 | ||
Rounded spoon micro spatula | VWR | 57949-039 | ||
Dissecting single cutting edge needle | Electron Microscopy Science | 72946 | ||
Dissecting tweezers | Dummont | #2 | ||
Small dissecting scissors | F.S.T | 14060-10 | ||
MEM Eagle medium | Cellgro | 50-019 PB | ||
Horse serum heat inactivated | Invitrogen | 26050-88 | ||
L-Glutamine (200 mM) | Invitrogen | 25030081 | ||
CaCl2 (1 M) | Sigma | C3881 | ||
MgSO4 (1 M) | Sigma | M2773 | ||
Insulin (1 mg/ml), dissolved in HCl 0.01 N | Sigma | I0516 | ||
Ascorbic Acid, solution (25%) | Sigma | A4544 | ||
D-Glucose | Sigma | G5767 | ||
NaHCO3 | Sigma | S6014 | ||
Hepes | Sigma | H7523 | ||
Sucrose | Sigma | S5016 | ||
Phenol Red Solution 0.5% in DPBS | Sigma | P0290 | ||
KCl | Sigma | P3911 | ||
MgCl2 (1 M) | Sigma | M9272 |