यह लेख एक कक्ष 8 अच्छी तरह स्लाइड के भीतर हो एक जीवाणु biofilm गठन और दृश्य के लिए प्रक्रिया का वर्णन
कई रोगों के जीर्ण प्रकृति बैक्टीरिया biofilms जो पारंपरिक एंटीबायोटिक उपचार के लिए अड़ियल हैं के गठन के लिए जिम्मेदार ठहराया है. Biofilms समुदाय जुड़े एक सतह से जुड़ी है और एक मैट्रिक्स में encased जीवाणु रहे हैं. बाह्य मैट्रिक्स की भूमिका बहुमुखी है, पोषक तत्वों की अधिग्रहण की सुविधा सहित, और पर्यावरण तनाव (जैसे मेजबान प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया) के खिलाफ महत्वपूर्ण सुरक्षा प्रदान करता है. कैसे एक biofilm के भीतर बैक्टीरिया पर्यावरण तनाव हम एक प्रोटोकॉल का इस्तेमाल किया है जिसमें हम बैक्टीरिया biofilms है जो एक कक्ष 8 अच्छी तरह से स्लाइड में का गठन किया है कल्पना का जवाब के रूप में एक बेहतर समझ हासिल करने के प्रयास में. biofilms लाइव / मृत दाग BacLight के साथ दाग थे और एक confocal खुर्दबीन का उपयोग करने के लिए ऊष्मायन शर्तों के अलग तहत रिश्तेदार biofilm, आकार और संरचना विशेषताएँ जांच. Z ढेर छवियों confocal माइक्रोस्कोपी के माध्यम से एकत्र किए गए थे और COMSTAT से विश्लेषण किया है. इस प्रोटोकॉल मदद करने के लिए तंत्र और जिसके द्वारा biofilms रूप कैनेटीक्स, घटक है कि biofilm संरचना और स्थिरता के लिए महत्वपूर्ण हैं की पहचान के रूप में के रूप में अच्छी तरह से स्पष्ट करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है.
व्यवस्था है जिसके द्वारा biofilms फार्म के रूप में उनके मैट्रिक्स घटक निस्र्पक के रूप में अच्छी तरह से समझना गहन रुचि का एक क्षेत्र है. इस प्रोटोकॉल प्रोटीन या अन्य घटक है कि biofilm के संरचनात्मक अखंडता, के रूप में के रूप में अच्छी तरह से पहचान करने और प्रोटीन जो खुद को एक चिकित्सकीय आवेदन के लिए उधार दे सकता है को लक्षित करने में मदद करने के लिए योगदान की पहचान में मदद करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है.
ऊपर वर्णित प्रोटोकॉल में ऊष्मायन बार और dilutions nontypeable Haemophilus influenzae (NTHI) द्वारा इष्टतम biofilm गठन के लिए स्थापित किया गया है . कुछ प्रारंभिक काम करने के लिए अन्य बैक्टीरियल प्रजातियों के लिए इन चरणों का अनुकूलन की जरूरत हो सकता है (यानी प्रारंभिक कमजोर पड़ने और ऊष्मायन मध्य लॉग चरण विकास प्राप्त करने की आवश्यकता समय ). कक्षों के प्रारंभिक बोने के लिए 1:2500 कमजोर पड़ने के लिए सुनिश्चित करें कि एक मजबूत biofilm चैम्बर स्लाइड के रूप में इस जीव से प्रेरित और ऊष्मायन बार कहा के भीतर विकसित होगा biofilm चैम्बर overgrowing और / या थकाऊ उपलब्ध पोषक तत्वों के बिना स्थापित किया गया था, . तदनुसार, प्रारंभिक कमजोर पड़ने और या ऊष्मायन बार अन्य बैक्टीरियल प्रजातियों के लिए समायोजित किया जा आवश्यकता हो सकती है.
The authors have nothing to disclose.
काम NIDCD / एनआईएच R01DC003915 द्वारा LO Bakaletz वित्त पोषित किया गया था.
Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
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Chocolate II agar | Fisher | B21267X | ||
8-well chamber slides | Fisher | 12-656-18 | ||
BacLight Live/Dead bacterial viability kit | Fisher | NC9439023 | ||
BHI | Fisher | 211059 | ||
Hemin | Sigma | H5533 | ||
β-NAD | Sigma | N7004 | ||
Permaslip mounting media | Fisher | NC9693613 |