Protocol
1. البلازميد تحول الهدف [كدنا]
الجزء الأول : التحول من البلازميد
(الوقت المطلوب : 3 ساعات بالإضافة إلى حضانة بين عشية وضحاها)
- SOC المرق الحار المغذيات في حمام المياه رقم 42 C (500 ميكرولتر في رد فعل)
- ذوبان الجليد على الخلايا المختصة
- إضافة 1 ميكرولتر البلازميد على الخلايا المختصة 25 ميكرولتر
- مكان على الجليد لمدة 20 دقيقة
- خلايا الصدمة الحرارية في درجة حرارة 42 درجة مئوية حمام ماء لمدة 45 ثانية
- المكان على الفور الخلايا على الجليد لمدة 2 دقيقة
- إضافة 500 ميكرولتر من 42 درجة مئوية مرق المغذيات إلى كل قارورة من الخلايا
- هزة بلغت 37 درجة مئوية لمدة 2 ساعة في 255 التناوب في الدقيقة الواحدة (دورة في الدقيقة)
- 75 لوحة مزيج التحول ميكرولتر Bertani على لوحات لوريا آجار (LB)
- لوحات احتضان مقلوب على 37 درجة مئوية خلال الليل
الجزء الثاني : E. القولونية الثقافة
(الوقت المطلوب : 15 دقيقة بالاضافة الى حضانة بين عشية وضحاها)
- لكل رد الفعل ، قسامة LB مل مرق 3 و 3 ميكرولتر من الأمبيسيلين ملغ / مل 50 في أنبوب الثقافة
- كشط 1 مستعمرة البكتيريا من لوحة آغار وإضافة إلى كل أنبوب الثقافة
- هزة أنابيب الثقافة في 37 في 255 دورة في الدقيقة درجة مئوية خلال الليل
الجزء الثالث : الإعدادية البلازميد
(الوقت المطلوب : 1.5 ساعة)
- عزل البلازميد من الثقافات بين عشية وضحاها باستخدام 5 رئيس مجموعة صغيرة FastPlasmid (كتالوج # 2300000)
- للتحقق من وجود البلازميد أعد تشغيل eluted الحمض النووي من عدة على هلام 1 ٪ تريس - خلات - EDTA (تاي) ملطخة بروميد إيثيديوم
2. DIG في الموقع المسمى التجميعي دقق RNA
الجزء الأول : الخطية من البلازميد
(الوقت المطلوب : 2.5 ساعة)
- في أنبوب 1.5 مل microfuge ، والجمع :
أعد البلازميد 20 مل * تقييد أنزيم 2 مل ** العازلة 10 مل 10X الزلال المصل البقري (BSA) 10 مل إثيل Pyrocarbonate (DEPC) المياه 58 مل 100 مل - احتضان عند 37 درجة مئوية لمدة 2 ساعة
* يختلف مع البلازميد
** يختلف مع انزيم التقييد
الجزء الثاني : النسخ
(الوقت المطلوب : 3 ساعات)
- في أنبوب 1.5 مل microfuge ، والجمع :
الخطي البلازميد 4 مل 10X النسخ الاحتياطي ** 4 مل Digoxigenin تسمية ميكس 4 مل * بوليميريز 2 مل ريبونوكلياز المانع 2 مل DEPC المياه 24 مل 40 مل - في احتضان 37 درجة مئوية لمدة 1 ساعة
- إضافة 2 ميكرولتر من بوليميريز *
- في احتضان 37 درجة مئوية لمدة 1 ساعة
- إضافة 2 ميكرولتر من الدناز
- احتضان في 37 لمدة 20 دقيقة درجة مئوية
* يختلف مع البلازميد
** يختلف مع بوليميريز
الجزء الثالث : الأمطار
(الوقت المطلوب : 5 دقائق زائد ساعة 2 إلى الحضانة بين عشية وضحاها ، 1 ساعة لأجهزة الطرد المركزي وإعادة تعليق)
- إضافة 4 ميكرولتر من EDTA 0.2M
- إضافة 5 ميكرولتر من كلوريد الليثيوم 4M
- إضافة 150 ميليلتر من الإيثانول الباردة الجليد 100 ٪
- في احتضان -80 درجة مئوية لمدة 2 ساعة ليلة وضحاها
- الطرد المركزي في 14000 دورة في الدقيقة لمدة 30 دقيقة على 4 درجات مئوية ، بعيدا صب طاف
- بيليه جافة لمدة 7 دقائق
- في 20 ميكرولتر المياه DEPC إعادة تعليق ،
- احتضان في 37 لمدة 5 دقائق درجة مئوية
الجزء الرابع : التقطير -- إجراء التحقيق إلا إذا كان حجم أكبر من 0.6 كيلو بايت
(الوقت المطلوب : يختلف بناء على حجم التحقيق ، لا عادة أكثر من 20 دقيقة)
- في أنبوب 1.5 مل microfuge ، والجمع :
دقق RNA 20 مل DEPC المياه 12 مل بيكربونات الصوديوم 4 مل كربونات الصوديوم 4 مل 40 مل - احتضان في حمام الماء 60 ° C. قاعدة فترة حضانة على المعادلة التالية :
الوقت (مقدار) = (بدءا كيلوبايت -- المطلوب كيلوبايت) / (0.11 س س المطلوب بدءا كيلو بايت)
متوسط الحجم المطلوب = 0.6 كيلوبايت
الجزء الخامس : الأمطار النهائي
(الوقت المطلوب : 5 دقائقutes زائد ساعة 2 إلى الحضانة بين عشية وضحاها ، 1 ساعة لأجهزة الطرد المركزي واعادة تعليق ، 1 ساعة الكهربائي للهلام)
- إضافة الماء DEPC 40 ميكرولتر
- إضافة خلات الصوديوم 8 ميكرولتر
- إضافة 1.04 ميكرولتر الجليدية حمض الخليك
- إضافة 240 الجليد الباردة ميكرولتر الإيثانول بنسبة 100 ٪
- في احتضان -80 درجة مئوية لمدة 2 ساعة ليلة وضحاها
- الطرد المركزي في 14000 دورة في الدقيقة لمدة 30 دقيقة على 4 درجات مئوية ، بعيدا صب طاف
- بيليه جافة لمدة 7 دقائق
- في 20 ميكرولتر المياه DEPC إعادة تعليق ،
- الدوامة لمزج
- للتحقق من وجود riboprobe ، تشغيل حل إعادة علقت على 1 ٪ هلام ملون تاي مع بروميد إيثيديوم
3. جبل بأكمله في الموقع التهجين
الجزء الأول : التثبيت من الأجنة وبروتين الهضم K
(الوقت المطلوب : إصلاح بين عشية وضحاها بالإضافة إلى 4 ساعات في اليوم التالي للتخزين ، و 2.5 ساعات من التخزين إلى الجزء الثاني)
- نظم جمع الأجنة الزرد والإصلاح في بارافورمالدهيد 4 ٪ (PFA) بين عشية وضحاها في 4 درجات مئوية
- غسل الأجنة ثابتة في الفوسفات مخزنة المالحة التي تحتوي على 0.1 ٪ توين - 20 (PBSt) 3 مرات لمدة 10 دقيقة كل
- لضمان تعرض الأجنة للكواشف التجريبية والأجنة dechorionate يدويا (إذا لزم الأمر) باستخدام غرامة ذات الرؤوس ملقط
- يذوى الأجنة عن طريق الغسيل في سلسلة متدرجة من 25 ٪ والميثانول بنسبة 50 ٪ في PBSt لمدة ساعة كل الغسيل ، ثم تخزن في الميثانول بنسبة 100 ٪ عند -20 درجة مئوية
- عندما تصبح جاهزة للاستخدام ، ترطيب الأجنة في PBSt عن طريق الغسيل في 50 ٪ (2 مرة) و 25 ٪ (1 مرة) الميثانول في PBSt لمدة 10 دقيقة لكل منهما. أخيرا يغسل 2 مرات لمدة 10 دقيقة في كل PBSt 100 ٪. التوقيت الدقيق ليست مهمة لPBSt / الميثانول يغسل
- الأجنة في محلول التبييض بيروكسيد الهيدروجين بنسبة 10 ٪ في PBSt ، إذا لزم الأمر ، لإزالة الصبغات الداكنة. وينبغي أن الأجنة في احتضان حل بيروكسيد الهيدروجين لمدة 10-20 دقيقة ، اعتمادا على عمر الجنين ، وغطاء للأنبوب microfuge ينبغي أن يظل مفتوحا لمنع تراكم الضغط الجوي
- المخفف الأجنة هضم مع 50 ملغ / مل K بروتيناز 1:5000 في PBSt ل3-15 دقائق ، اعتمادا على عمر الجنين
- إعادة إصلاح الأجنة في PFA 4 ٪ لمدة 30 دقيقة ، ثم يغسل 3 مرات في PBSt لمدة 5 دقائق كل
الجزء الثاني : من التهجين Riboprobes
(الوقت المطلوب : زائد 3 ساعات بين عشية وضحاها لتهجين ، و 1.5 ساعة في اليوم التالي إلى الجزء الثالث)
- Prehybridize الأجنة مع الحل prehybridization (PHS) في 70 مسخن مياه حمام ° مئوية لمدة 2-3 ساعات
- إزالة PHS ، إضافة 0.5 مل من محلول التهجين و 1.5 توليفها من قبل Digoxigenin ميكرولتر riboprobes المسمى ، احتضان عند 70 درجة مئوية خلال الليل. درجة الحرارة يمكن أن تتقلب في غضون بضع درجات اعتمادا على الهدف riboprobe
- في اليوم التالي ، وغسل الأجنة عند 70 درجة مئوية في حلول متدرجة من 75 ٪ ، 50 ٪ ، و 25 ٪ في PHS 2X سيترات الصوديوم المالحة (SSC) لمدة 10 دقيقة لكل منهما ، ثم يغسل في SSC 0.2X لمدة 30 دقيقة في 68 ° C
- يغسل في مخزن حمض المالئيك (ماب) 2 مرات لمدة 10 دقيقة كل في درجة حرارة الغرفة
الجزء الثالث : مكافحة Digoxigenin (α - DIG) الحضانة جسم
(الوقت المطلوب : زائد 3 ساعات بين عشية وضحاها إلى كتلة ، و 2.5 ساعة في اليوم التالي إلى الجزء الرابع)
- نقل الأجنة إلى جانب لوحة 12
- قبل كتلة الأجنة في حل مل 1-2 حظر ما لا يقل عن 3 ساعات في درجة حرارة الغرفة
- في وقت واحد ، قبل كتلة الجسم المضاد من خلال إعداد المجلد الثاني من الحل الحجب وتمييع لمكافحة digoxigenin 1:2000 الأضداد في هذا الحل
- قبل إزالة كتلة وإضافة 1-2 مل قبل حظر α - DIG الحل ، بين عشية وضحاها في احتضان 4 درجات مئوية
- في اليوم التالي ، وغسل الأجنة في ماب. السماح للأجنة لاحتضان في ماب لمدة 5 دقائق الأولى ، ثم تنفيذ التغييرات العازلة واحتضان لمدة دقيقة 10 الاثنين ، 30 دقيقة واحدة واحدة الفاصل الزمني 60 دقيقة. التوقيت الدقيق ليست ضرورية
- غسل الأجنة 3 مرات لمدة 5 دقائق في كل من القلوية العازلة (ا ف ب) الفوسفاتيز
الجزء الرابع : تلطيخ والتجهيز النهائي
(الوقت المطلوب : 1 ساعة ليلة وضحاها لتلطيخ ، اعتمادا على riboprobe المستخدمة ، يمكن تخزين 4 ساعات لبداية يغسل الجلسرين ، 6-10 ساعة في غسل الجلسرين ، والجلسرين)
- إضافة 1-2 مل تلطيخ حل للأجنة ، والتفاف لوحة في احباط ، والتحقق من تلطيخ على فترات منتظمة (كل 20 دقيقة) حتى تلطيخ غير كافية
- غسل الأجنة مع أوقات PBSt 2 لمدة 5 دقائق لكل لوقف تفاعل تلطيخ
- يذوى أجنة باستخدام 10 دقيقة يغسل في 25 ٪ (1 مرة) ، و 50 ٪ (2 مرات) الميثانول في PBSt ، ثم في الميثانول بنسبة 100 ٪ ، لإزالة تلوين الخلفية
- السماح لاحتضان الأجنة في الميثانول بنسبة 100 ٪ على الأقل 2 ساعة في درجة حرارة الغرفة
- في ترطيب PBSt يغسل به 10 دقيقة في 50 ٪ (2 مرة) و 25 ٪ (1 مرة) الميثانول في PBSt ، ثم تغسل في 100 ٪ PBSt 2 مرات
- نقل البريد الملونmbryos إلى حل الجلسرين 80 ٪ في PBSt ، وذلك باستخدام سلسلة متدرجة من يغسل ، وتخزينها في 4 درجات مئوية.
وصفات :
- لوحات - 10 أغار أغار LB LB ز + 250 مل من الماء المقطر ، الأوتوكلاف ، عندما تبرد إلى إضافة لمسة أمبيسلين 250 ميكرولتر ، صب 15-20 مل حل الدافئة في كل طبق بتري ، والسماح لترسيخ آغار
- حساء مرق - LB LB 12.5 غرام + 200 مل من الماء المقطر ، الأوتوكلاف ، والسماح لتبرد قبل الاستعمال
- 1 ٪ تاي هلام agarose 0.4 ز ، 40 مل 1X TAE ، 2 بروميد إيثيديوم ميكرولتر ؛ تحميل 7 ميكرولتر البلازميد (البلازميد تحول الهدف [كدنا]) أو 3 و 4 riboprobe ميكرولتر المياه DEPC ميكرولتر (في الموقع المسمى DIG التجميعي دقق RNA) + 1 صبغة تحميل ميكرولتر ، 5 ميكرولتر سلم DNA
- Prehybridization حل - 50 ٪ formamide ، SSC 5X ، 9.2mM حمض الليمون ، 1 ٪ توين - 20
- التهجين الحلول prehybridization حل زائد 500 ميكروغرام / مل الحمض الريبي النووي النقال و 50 ميكروغرام / مل هيبارين
- MAB - 100mM حمض المالئيك ، 150mM كلوريد الصوديوم ، هيدروكسيد الصوديوم 0.2M ، 0.1 ٪ توين - 20 ، ودرجة الحموضة إلى 7.5
- حجب الحل - 3 أجزاء MAB ، 1 جزء كاشف بورنغير 10 ٪ حظر في MAB ، 1 حرارة الجزء المعطل الضأن المصل
- AP - 60mM تريس العازلة ، إلى 9.5 درجة الحموضة حمض الهيدروكلوريك ، 60mM كلوريد الصوديوم ، 30mM MgCl 2 ، 0.1 ٪ توين - 20
- تلطيخ الحل - 5 - برومو كلورو - 4 - - 3 - indolyl الفوسفات (BCIP) ونيترو الزرقاء tetrazolium (NBT) في AP العازلة
4. الممثل النتائج
عندما يقوم بشكل صحيح ، فإن التفاعل بين NBT ، BCIP ، والفوسفاتيز القلوية تشكيل يعجل الأرجواني التي يجب أن تظهر على الجنين والزرد وصمة الأرجواني. وينبغي توليفها Riboprobes سابقا من [كدنا] المقابلة لهذا الجين من الفائدة. لذا ، يمكن الاستنتاج أن أي تصور يمثل وصمة عار مناطق الزرد التي تم نسخها الجين الاهتمام في هذه المرحلة التنموية التي وجه الخصوص. لأغراض هذه الدورة التدريبية ، تم توليفها من riboprobes aldh1a2 (raldh2 سابقا ؛ Begemann وآخرون ، 2001 ؛. الشكل 1) ؛ fgf8a (Reifers وآخرون ، 1998 ؛. الشكل 2) ؛ deltaC (أوتس وآخرون ، 2005) ؛ myod1 (واينبرغ وآخرون ، 1996) ؛ shha (كراوس وآخرون ، 1993) ، pax2a (الماركة وآخرون ، 1996 ؛. الشكل 3) وmyl7 (cmlc2 سابقا ؛. Yelon وآخرون ، 1999) [كدنا]. وكان من المتوقع تلطيخ في خط الوسط والهياكل التشريحية بما في ذلك somites ، tailbud ، myotome والدماغ والقلب. وكان من المتوقع أن يكون المسوخ Ace/fgf8a عيوب في كثير من هذه الهياكل. وكان من السهل تصور التلوين باستخدام مجهر تشريح القياسية. مصادر إضافية تحتوي على مزيد من المعلومات وحلول للمشاكل على رغبة تقنيات مشابهة لتلك الموصوفة هنا (كلارك ، 2003 ؛. دكوستا وآخرون ، 2009 ؛ Schmoldt وآخرون ، 2009 ؛. Schoenwolf ، 2009).
الشكل 1. جنين الزرد آخر 24 ساعة الإخصاب ، والتي تم تهجينها مع riboprobes محددة لaldh1a2. ويمكن رؤية محددة في تلوين العينين والدماغ المؤخر ، الزعانف الصدرية primordia برعم ، وsomites. الأمامي هو أعلى ، هو الخلفية إلى الأسفل.
الشكل 2. الزرد جنين في المرحلة 13 من الجسيدة التنمية التي تم تهجينها مع محددة لتحقيق fgf8a. وينظر الى تلطيخ محددة في telencephalon ، الدماغ البيني الظهرية ، الدماغ المتوسط ، الدماغ المؤخر الحدود ، somites وtailbud. بطني وإلى اليسار ، والظهرية وإلى اليمين.
الشكل 3. وآخر 22 ساعة التسميد الجنين الزرد التي تم تهجينها مع riboprobe محددة لpax2a ، علامة قوية مفيدة لتصور النظام العصبي. ويمكن رؤية محددة في تلطيخ شق المشيمية ، الدماغ المتوسط ، الدماغ المؤخر الحدود ، الحويصلة الأذنية ، والخلايا العصبية في النخاع الشوكي. عرض مع الظهرية الأمامية إلى اليسار.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 5 Prime Fast Plasmid Mini Kit (100 preps) | Fisher Scientific | 2300000 | |
| One Shot TOP10 Chemically Competent E. coli with SOC Medium | Invitrogen | C404003 | |
| LB Agar | Fisher Scientific | BP1425-500 | |
| LB Broth | Fisher Scientific | BP1426-500 | |
| Ampicillin Sodium Salt | Fisher Scientific | BP1760-5 | |
| Isopropanol | Acros Organics | 42383-0010 | |
| Petri Dish 100 x 20 mm non treated | Laboratory Products Sales | 430591 | |
| 14 ml Culture Tube, Snap Top | Fisher Scientific | 1495911B | |
| Restriction Enzymes & Buffers & 10xBSA | New England Biolabs | varies | |
| Diethyl Pyrocarbonate (DEPC) 25 ml | Sigma-Aldrich | D5758-25mL | |
| Sodium Acetate Trihydrate USP/FCC 500g | Fisher Scientific | s608500 | |
| Gal 200 proof Ethyl alcohol | Fisher Scientific | 04-355-451 | |
| Tris-Acetate-EDTA (TAE) 50x Sol 1L | Fisher Scientific | bp13321 | |
| Agarose Low EEO 100 g | Fisher Scientific | BP160-100 | |
| Ethidium Bromide 10 ml | Sigma-Aldrich | 45-E1510 | |
| Sucrose Gel Loading Dye 40% Sucrose | Fisher Scientific | BP655-1 | |
| 1 kb Full Scale DNA Ladder | Fisher Scientific | BP2582200 | |
| DIG RNA Labeling Mix | Roche Group | 11277073910 | |
| T3 RNA Polymerase | Roche Group | 1031163 | |
| T7 RNA Polymerase | Roche Group | 10881767001 | |
| SP6 RNA Polymerase | Roche Group | 810274 | |
| Protector Rnase Inhibitor | Roche Group | 3335399001 | |
| Dnase I, Rnase Free 10,000 units | Roche Group | 4716728001 | |
| EDTA molecular biology reagent | Sigma-Aldrich | e5134-500G | |
| Lithium Chloride 100 g | Fisher Scientific | L121100 | |
| Sodium Carbonate 1 kg | Fisher Scientific | BP357-1 | |
| Sodium Bicarbonate, 500 g | Fisher Scientific | BP328-500 | |
| Acetic Acid glacial ACS 500 ml | Fisher Scientific | a38500 | |
| Paraformaldehyde R 500 g | Fisher Scientific | o4042500 | |
| PBS Phosphate Buffer Saline 10X | Fisher Scientific | bp3991 | |
| Tween 20 500 ml | Fisher Scientific | bp337500 | |
| Methanol 5 L | Fisher Scientific | A4124 | |
| Proteinase K 50 mg | Fisher Scientific | bp170050 | |
| Formamide 1 L | Fisher Scientific | F841 | |
| 20x SSC 1 L | Fisher Scientific | bp13251 | |
| Citric Acid Anhydrous ACS 500 g | Fisher Scientific | a940500 | |
| Ribonucleic acid transfer type V | Sigma-Aldrich | r7876-2.5KU | |
| Heparin Sodium salt 50 mg | Fisher Scientific | bp252450 | |
| Maleic acid R 500 g | Fisher Scientific | o3417500 | |
| Sodium Chloride 500 g | Fisher Scientific | s271500 | |
| Sodium Hydroxide 500 g | Fisher Scientific | s318500 | |
| Blocking Reagent | Roche Group | 11096176001 | |
| Lamb Serum 500 ml | Invitrogen | 16070096 | |
| Anti DIG AP fragments | Roche Group | 11093274910 | |
| 2M Tris Solution 500 ml | Fisher Scientific | bp1759500 | |
| Magnesium Chloride 500 g | Fisher Scientific | m33500 | |
| BCIP 3 ml | Roche Group | 11383221001 | |
| NBT 3 ml | Roche Group | 11383213001 | |
| Glycerol 99% 2.5 L | Fisher Scientific | AC158920025 | |
| Plate 12 well PS ST w/Lid | VWR international | 62406-165 | |
| Tube 15 ml screw cap 50/rack 500/cs | Laboratory Products Sales | L262861 | |
| Tube 50 ml screw cap 25/rack 500/cs | Laboratory Products Sales | L262890 | |
| 1.6 ml microfuge tube | Laboratory Products Sales | L234401 | |
| 2 Parafilm 2" x 250 ft | Fisher Scientific | s37441 | |
| Transfer Pipet 7 ml | USA Scientific, Inc. | 1020-2520 | |
| .1-10 μl Pipet Tip, Bulk | USA Scientific, Inc. | 1111-3000 | |
| 1-200 μl Pipet Tip, Bulk | USA Scientific, Inc. | 1111-0006 | |
| 101-1000 μl Pipet Tip, Bulk | USA Scientific, Inc. | 1111-2021 | |
| Aluminum Foil | Grocery Store | ||
|
|||
References
- Albertson, R. C., Yelick, P. C. Roles for fgf8 signaling in left-right patterning of the visceral organs and craniofacial skeleton. Dev. Biol. 283, 310-321 (2005).
- Aramaki, M., Kimura, T., Udaka, T., Kosaki, R., Mitsuhashi, T., Okada, Y., Takahashi, T., Kosaki, K. Embryonic expression profile of chicken CHD7, the ortholog of the causative gene for CHARGE syndrome. Birth Defects Res A Clin Mol Teratol. 79, 50-57 (2007).
- Begemann, G., Schilling, T. F., Rauch, G. J., Geisler, R., Ingham, P. W. The zebrafish neckless mutation reveals a requirement for raldh2 in mesodermal signals that pattern the hindbrain. Development. 128, 3081-3094 (2001).
- Brand, M., Heisenberg, C. P., Jiang, Y. J., Beuchle, D., Lun, K., Furutani-Seiki, M., Granato, M., Haffter, P., Hammerschmidt, M., Kane, D. A., Kelsh, R. N., Mullins, M. C., Odenthal, J., van Eeden, F. J., Kane, D. A., Nüsslein-Volhard, C. Mutations in zebrafish genes affecting the formation of the boundary between midbrain and hindbrain. Development. 123, 179-190 (1996).
- Clark, M. In situ Hybridization: Laboratory Companion. , Wiley-VCH. (2003).
- D'Costa, A., Shepherd, I. T. Zebrafish development and genetics: Introducing undergraduates to developmental biology and genetics in a large introductory laboratory class. Zebrafish. 6, 169-177 (2009).
- Emerging Model Organisms: A Laboratory Manual, Volume 1. , Cold Spring Harbor Laboratory Press. Cold Spring Harbor, NY. (2008).
- Emerging Model Organisms: A Laboratory Manual, Volume 2. , Cold Spring Harbor Laboratory Press. Cold Spring Harbor, NY. (2010).
- Geetha-Loganathan, P., Nimmagadda, S., Scaal, M. Wnt signaling in limb organogenesis. Organogenesis. 4, 109-115 Forthcoming.
- Geetha-Loganathan, P., Nimmagadda, S., Scaal, M., Huang, R., Christ, B. Wnt signaling in somite development. Ann Anat. 190, 208-222 Forthcoming.
- Huelsken, J., Behrens, J. The Wnt signaling pathway. J Cell Sci. 15, 3977-3978 (2002).
- Krauss, S., Concordet, J. P., Ingham, P. W. A functionally conserved homolog of the Drosophila segment polarity gene hh is expressed in tissues with polarizing activity in zebrafish embryos. Cell. 75, 1431-1444 (1993).
- Oates, A. C., Mueller, C., Ho, R. K. Cooperative function of deltaC and her7 in anterior segment formation. Dev. Biol. 280, 133-149 (2005).
- Pizard, A., Haramis, A., Carrasco, A. E., Franco, P., López, S., Paganelli, A. Whole-mount in situ hybridization and detection of RNAs in vertebrate embryos and isolated organs. Curr Protoc Mol Biol. Chapter 14, (2004).
- Reifers, F., Bohli, H., Walsh, E. C., Crossley, P. H., Stainier, D. Y., Brand, M. Fgf8 is mutated in zebrafish acerebellar (ace) mutants and is required for maintenance of midbrain-hindbrain boundary development and somitogenesis. Development. 125, 2381-2395 (1998).
- Schmoldt, A., Forecki, J., Hammond, D. R., Udvadia, A. J. Exploring differential gene expression in zebrafish to teach basic molecular biology skills. Zebrafish. 6, 187-199 (2009).
- Schoenwolf, G. C. Laboratory Studies of Vertebrate and Invertebrate Embryos: Guide and Atlas of Descriptive and Experimental Development. , 9th Edition, Pearson Education- Benjamin Cummings. Upper Saddle River, NJ. (2008).
- Stickney, H. L., Barresi, M. J., Devoto, S. H. Somite development in zebrafish. Dev Dyn. 219, 287-303 (2000).
- Weinberg, E. S., Allende, M. L., Kelly, C. S., Abdelhamid, A., Murakami, T., Andermann, P., Doerre, O. G., Grunwald, D. J., Riggleman, B. Developmental regulation of zebrafish MyoD in wild-type, no tail and spadetail embryos. Development. 122, 271-280 (1996).
- Yelon, D., Horne, S. A., Stainier, D. Y. Restricted expression of cardiac myosin genes reveals regulated aspects of heart tube assembly in zebrafish. Dev. Biol. 214, 23-37 (1999).
