Summary

Hareketi tarafından Modülasyonlu Nöronlar Fizyolojik, Morfolojik ve nörokimyasal Karakterizasyonu

Published: April 21, 2011
doi:

Summary

Hareketi sırasında memeli nöronlar in vivo fizyolojik tepki ölçmek ve nöronal morfoloji, nörokimyasal fenotip ve sinaptik mikrodevreler nöron fizyoloji ilişkilendirmek için bir teknik tarif edilir.

Abstract

Bireysel nöronlarda ve nöron devreleri fonksiyonu rol duyusal ve motor fonksiyonların nöronal mekanizmaları anlamak için esastır. Bir hayvan hareketi sırasında statik 1,2 veya kayıt ekstrasellüler nöronal aktivitenin ise sensorimotor mekanizmaları çoğu soruşturma nöron veya inceleme güveniyor. 3,4 sensorimotor fonksiyonu için temel bir arka plan bu çalışmalar varken, onlar da işlevsel bilgi değerlendirmek yok bir hareket sırasında ortaya çıkan ya da nöronun tam anatomi, fizyoloji ve nörokimyasal fenotip karakterize yeteneği sınırlıdır. Bir in vivo hareketi sırasında bireysel nöronların geniş karakterizasyonu olanak veren bir teknik burada gösterilir. Bu teknik, primer afferent nöronların çalışma değil, aynı zamanda motor nöronlar ve sensorimotor internöronlar karakterize etmek için kullanılabilir. Başlangıçta tek bir nöronun yanıt nöron için açık alanın belirlenmesi takip mandibula çeşitli hareketler sırasında elektrofizyolojik yöntemler kullanılarak kaydedilir. Nöronal tracer sonra intraselüler nöron içine enjekte edilir ve beynin nöron, ışık, elektron veya konfokal mikroskobu (Şekil 1) ile görülebilmesi şekilde işlenir. Nöronal morfoloji, nöron (Şekil 2,3) fizyolojik yanıt ile ilişkili olduğu ve böylece karakterize nöron ayrıntılı morfoloji sonra yeniden. Bu iletişimde, bu tekniğin başarılı bir şekilde uygulanması için önemli anahtar detaylar ve ipuçları verilmektedir. Bu yöntem diğer tekniklerle birleştirerek değerli ek bilgiler altında çalışma nöron tespit edilebilir. Retrograd nöronal etiketleme nöronlar belirlemek için kullanılabilir etiketli nöron sinaps; nöron devresi böylece ayrıntılı olarak belirlenmesi. İmmünositokimya etiketli nöron içinde nörotransmitterlerin incelemek ve etiketli nöron sinaps nöronların kimyasal fenotipleri belirlemek için bu yöntem ile kombine edilebilir. Etiketli nöron da etiketli nöron ultrastrüktürel özellikleri ve mikrodevreler belirlemek için elektron mikroskobu için işlenebilir. Genel olarak bu tekniği iyice böylece sensorimotor fonksiyonu nöron rolünü içine önemli fikir izin in vivo hareket sırasında nöronlar karakterize etmek için güçlü bir yöntemdir.

Protocol

1. Hayvan Hazırlık Pentobarbital sodyum (50mg/kg 'dan IP) ve bir ısıtma yastığı yer sıçan anestezisi. Hayvan kesme makineleri ile arka kafatası örten deri Tıraş. Hayvan ayak parmakları palpebral refleks yokluğu gibi sıkışmak yanı sıra zaman, bir geri çekilme refleksi ve seslendirme olmaması için cerrahi anestezi düzeyi seviyesi testi ile elde edilmiş olduğunu sağlamak için kontrol edin. Anestezi düzeyi her 15 dakikada bir kontrol edin ve sodyum pentobarbital 15mg/kg her 45 dak…

Discussion

Burada gösterilen yöntem tek nöron fonksiyonu ile ilgili önemli bilgi sağlar ve nasıl bireysel nöronların yanıt nöronal devreleri katkıda güçlü bir tekniktir. 9 Bu bilgi sensorimotor fonksiyon anlamak için esastır. Bu tekniğin en büyük gücü, çok sayıda fizyoloji, morfoloji ve sinaptik morfolojisi ve dağıtım da dahil olmak üzere bir nöron ile ilgili parametrelerin belirlenmesi sağlar. Retrograd nöronal etiketleme nöronal devreleri gibi ek bilgi gibi diğer teknikleri ile kombine …

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Anthony Taş, in vivo hücre içi kayıt ve hücre içi boyama tekniği ilk geliştirme ile ilgili yardım için Brown ve David Maxwell yılında ilk eğitim için teşekkür ederim . M. Gümüş Ben collocalization makro yardım için teşekkür ederim. Birçok bilim adamı kiminle, R. Donga, M. Moritani, P. Luo, R. Ambalavanar dahil olmak üzere, bu tekniğin gelişimi sağlanan anlayış işbirliği var. Bu teknik, NIH hibe DE10132 DE15386 ve RR017971 önemli desteği ile geliştirildi.

Materials

Name of reagent or equipment Company Catalogue number Comments
electromagnetic vibrator Ling Dynamic Systems V101  
signal generator Feedback Systems PFG605 capable of producing trapezoidal output signal
electrode glass Sutter Instruments AF100-68-10 with filament
electrode puller Sutter Instruments Model P-2000 or P-80  
biotinamide Vector Laboratories SP-1120 stored at 4°C
Texas Red avidin DCS Vector Laboratories A-2016  
tetramethlyrhodamine Molecular Probes D-3308 3000 molecular weight, lysine fixable
mouse anti-synaptophysin antibody Chemicon MAB5258  
fluorescent Nissl stain Neurotrace, Molecular Probes N-21480  
electrode tester Winston Electronics BL-1000-B to measure electrode impedance
electrometer Axon Instruments Axoprobe 1A, Axoclamp 2B  

References

  1. Cuellar, C. A., Tapia, J. A., Juarez, V., Quevedo, J., Linares, P., Marinez, L., Manjarrez, E. Propagation of sinusoidal electrical waves along the spinal cord during a fictive motor task. J. Neurosci. 29, 798-810 (2010).
  2. Frigon, A., Gossard, J. Evidence for specialized rhythm-generating mechanisms in the adult mammalian spinal cord. J. Neurosci. 30, 7061-7071 (2010).
  3. Wang, W., Chan, S. S., Heldman, D. A., Moran, D. W. Motor cortical representation of hand translation and rotation during reaching. J. Neurosci. 30, 958-962 (2010).
  4. Ma, C., He, J. A method for investigating cortical control of stand and squat in conscious behavioral monkeys. J. Neurosci. Meth. 192, 1-6 (2010).
  5. Dessem, D., Donga, R., Luo, P. Primary- and secondary-like jaw-muscle spindle afferents have characteristic topographic distributions. J. Neurophysiol. 77, 2925-2944 (1997).
  6. Dessem, D., Moritaini, A., Ambalavanar, R. Nociceptive craniofacial muscle primary afferent neurons synapse in both the rostral and caudal brain stem. J. Neurophysiol. 98, 214-223 (2007).
  7. Luo, P., Dessem, D. Inputs from identified jaw-muscle spindle afferents to trigeminothalamic neurons in the rat: a double-labeling study using retrograde HRP and intracellular. J. Comp. Neurol. 353, 50-66 (1995).
  8. Dessem, D., Luo, P. Jaw-muscle spindle afferent feedback to the cervical spinal cord in the rat. J. Comp. Neurol. 128, 451-459 (1999).
  9. Luo, P., Wong, R., Dessem, D. Projection of jaw-muscle spindle afferents to the caudal brainstem in rats demonstrated using intracellular biotinamide. J. Comp. Neurol. 358, 63-78 (1995).
  10. Luo, P., Dessem, D. Ultrastructural anatomy of physiologically identified jaw-muscle spindle afferent terminations onto retrogradely labeled jaw-elevator motoneurons in the rat. J. Comp. Neurol. 406, 384-401 (1999).
  11. Hassani, O. K., Henny, P., Lee, M. G., Jones, B. E. GABAergic neurons intermingled with orexin and MCH neurons in the lateral hypothalamus discharge maximally during sleep. Eur. J. Neurosci. 32, 448-457 (2010).
  12. Inokawa, H., Yamada, H., Matsumoto, N., Muranishi, M., Kimura, M. Juxtacellular labeling of tonically active neurons and phasically active neurons in the rat striatum. Neuroscience. 168, 395-404 (2010).

Play Video

Cite This Article
Dessem, D. Physiological, Morphological and Neurochemical Characterization of Neurons Modulated by Movement. J. Vis. Exp. (50), e2650, doi:10.3791/2650 (2011).

View Video