बेकार मानव भ्रूण cortical ऊतक से तंत्रिका स्टेम सेल की पीढ़ी
Summary
अलगाव और त्याग मानव भ्रूण cortical ऊतक से तंत्रिका स्टेम कोशिकाओं के संस्कृति पर एक सरल और विश्वसनीय पद्धति में वर्णित है. ज्ञात मानव स्नायविक विकारों से व्युत्पन्न संस्कृतियों रोग सेलुलर और आणविक प्रक्रियाओं के लक्षण वर्णन के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है, के रूप में अच्छी तरह के रूप में औषधीय प्रभावकारिता का मूल्यांकन करने के लिए एक मंच प्रदान.
Abstract
तंत्रिका स्टेम सेल (एनएससी) cortical थाली के विकास के दौरान निलय क्षेत्र neuroepithelium साथ रहते हैं. ये जल्दी progenitors अंततः मध्यवर्ती progenitors को जन्म दे और बाद में, विभिन्न neuronal और glial सेल उपप्रकारों कि प्रमस्तिष्क प्रांतस्था के रूप में. क्षमता उत्पन्न करने के लिए और त्याग सामान्य भ्रूण ऊतक से मानव एनएससी (तथाकथित neurospheres) का विस्तार एक साधन है, जिसके साथ सीधे सामान्य मानव एनएससी 1-5 विकास के कार्यात्मक पहलुओं का अध्ययन करने के लिए प्रदान करता है. यह दृष्टिकोण भी जाना जाता है स्नायविक विकारों से एनएससी की पीढ़ी की ओर निर्देशित किया जा सकता है, जिससे रोग प्रक्रियाओं है कि पूर्वज प्रसार, प्रवास और 6-9 भेदभाव बदल की पहचान करने का अवसर affording. हम मानव डाउन सिंड्रोम एनएससी है कि त्वरित अल्जाइमर रोग 10,11 phenotype करने के लिए योगदान हो सकता है में रोग तंत्र की पहचान करने पर ध्यान केंद्रित किया है. न तो vivo में और न ही इन विट्रो माउस मॉडल में मानव 21 गुणसूत्र पर स्थित जीन के समान प्रदर्शनों की सूची को दोहराने कर सकते हैं .
यहाँ हम एक सरल और विश्वसनीय पद्धति का उपयोग करने के लिए डाउन सिंड्रोम एनएससी निरस्त मानव भ्रूण cortices से अलग और उन्हें संस्कृति में विकसित. पद्धति सीमित संरचनात्मक स्थलों, सेल छँटाई, चढ़ाना और मानव एनएससी के passaging के साथ ऊतक, विच्छेदन, संचयन के विशिष्ट पहलुओं प्रदान करता है. हम भी अधिक चयनात्मक सेल उपप्रकारों में मानव एनएससी के भेदभाव उत्प्रेरण के लिए कुछ बुनियादी प्रोटोकॉल प्रदान करते हैं.
Protocol
Discussion
संस्कृति ताजा ऊतक और मानव कोशिका लाइनों के उत्पादन की ओर विभिन्न दृष्टिकोण हैं. ऐतिहासिक, ताजा ऊतक काटा गया है और केंद्रीय तंत्रिका तंत्र में विभिन्न प्रकार की कोशिकाओं को उत्पन्न तुरंत सुसंस्कृत. ले…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
HD054347 और VLS NS063997-01: इस काम के हिस्से में राष्ट्रीय स्वास्थ्य संस्थान के द्वारा समर्थित किया गया था. साम्राज्य राज्य स्टेम सेल फंड द्वारा नई स्वास्थ्य अनुबंध # C024324 VLS के न्यूयॉर्क राज्य विभाग के माध्यम से यह काम भी भाग में समर्थित किया गया था. यहाँ व्यक्त राय से पूरी तरह से कर रहे हैं उन लेखक की और एम्पायर स्टेट स्टेम सेल बोर्ड, नई स्वास्थ्य के न्यूयॉर्क राज्य विभाग, या न्यूयॉर्क के राज्य के उन लोगों को प्रतिबिंबित जरूरी नहीं. VLS एक डोरिस ड्यूक नैदानिक वैज्ञानिक विकास पुरस्कार प्राप्तकर्ता है. हम भी प्रोफेसर तीमुथियुस Vartanian विरोधी O1, विरोधी O4 एंटीबॉडी के अपने उपहार के लिए धन्यवाद.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
|---|---|---|---|
| KNOCKOUT DMEM/F12 | Invitrogen | 12660-012 | Dissociation medium |
| Stem Pro NSC SFM | Invitrogen | A10509-01 | Culture medium |
| Fetal Bovine Serum | Invitrogen | 10091-148 | Frozen medium |
| Hanks solution (-Ca2+, -Mg2+) | Invitrogen | 14175-095 | Dissociation medium |
| DMSO | Sigma-Aldrich | D2650 | Frozen medium |
| EDTA | Sigma-Aldrich | 431788 | Dissociation medium |
| Paraformaldehyde | Sigma-Aldrich | 158127 | Fixation solution |
| bFGF | R&D | 234-FSE | Differentiation medium |
| SHH | R&D | 1845-SH | Differentiation medium |
| PDGF-AA | R&D | 221-AA | Differentiation medium |
| B27 | Invitrogen | 17504-044 | Differentiation medium |
| Mouse Anti-MAP2 | Sigma-Aldrich | M2320 | 1:200 |
| Rabbit Anti-DCX | Cell signaling | 4604s | 1:200 |
| Rabbit Anti-GFAP | DAKO | Z0334 | 1:200 |
| Rabbit Anti-S100B | DAKO | Z0311 | 1:200 |
| Rabbit Anti-O1 | gifts of Professor Timothy Vartanian* | 1:50 | |
| Rabbit Anti-O4 | Gifts of Professor Timothy Vartanian* | 1:50 | |
| 40μm cell strainer | BD Falcon | 352340 |
* Timothy Vartanian, MD, PhD, Department of Neurology and Neuroscience, Weill Cornell Medical College, New York, USA
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