Summary

廃棄されたヒト胎児脳組織から神経幹細胞の生成

Published: May 25, 2011
doi:

Summary

捨てられた人間の胎児皮質組織から神経幹細胞の単離および培養上シンプルで信頼性の高い方法が記載されている。既知のヒト神経疾患から派生した培養物は、病理学、細胞及び分子過程の特性だけでなく、薬理学的有効性を評価するためのプラットフォームを提供するために使用することができます。

Abstract

神経幹細胞(NSC)は、皮質板の開発中に脳室帯の神経上皮に沿って存在する。これらの初期の前駆細胞は、最終的に、中間前駆細胞を生じさせると後で、大脳皮質を形成する様々な神経細胞およびグリア細胞のサブタイプ。廃棄された正常な胎児組織からヒトNSCを(そのニューロスフェアと呼ばれる)を生成し、拡大する能力は、直接ヒトの正常なNSC開発1-5の機能的側面 ​​を研究するために使用する手段を提供します。このアプローチはまた、それによって前駆細胞増殖、遊走および分化6-9を変更する病気のプロセスを識別する機会を得た、既知の神経疾患からのNSCの世代に向けて送ることができます。我々は、高速化、アルツハイマー病の表現型10,11に貢献するかもしれない人間のダウン症候群のNSCでの病理学的メカニズムを識別するに焦点を当てている。 生体内で、in vitroでのマウスモデルどちらのヒト21番染色体上に位置する遺伝子の同一のレパートリーを複製することができます。

ここでは、中止された人間の胎児皮質から症候群のNSCをダウン分離し、文化の中で、それらを成長させる、シンプルで信頼性の高いメソッドを使用します。方法論は、ヒトNSCのめっき及び継代、限られた解剖学的ランドマーク、細胞ソーティングと解剖、組織の収穫の特定の側面を提供します。また、より選択的な細胞のサブタイプにヒトNSCの分化を誘導するためのいくつかの基本的なプロトコルを提供します。

Protocol

1。解剖および神経幹細胞培養の維持のためのソリューションと材料の準備事前に100mlの解剖媒体(KNOCKOUT DMEM/F12、Invitogen)を準備して冷蔵庫に。 Prepare100 mlの培地(ステムプロNSC SFM、Invitrogen社)と37℃保管℃の水浴でC。 細胞の長期凍結保存のための細胞凍結培地を(KNOCKOUT DMEM/F12 +10%FBS + 5%DMSO)の準備。 必要に応じて、組織固定のために4%パラホルムアルデ?…

Discussion

文化新鮮な組織と生ヒト細胞株に向けたさまざまなアプローチがある。歴史的に、新鮮な組織を採取され、中枢神経系における種々の細胞型を生成するために直ちに培養。このアプローチは、しかしはっきりと得られたヒトサンプルの場合には、通常非常に小さいことができるサンプルの数によって制限されます。操作の最小限の度合いを考えると、新鮮な培養神経細胞では、拡張培養から?…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

HD054347とVLSへNS063997 – 01:この作品は、国立衛生研究所によって部分的にサポートされていました。この作品はまた、保健契約#C024324 VLSへのニューヨーク国務省を通じて、エンパイアステート幹細胞の基金によって部分的にサポートされていました。ご意見は、ここに表明し、執筆者の個人的な見解であり、必ずしもエンパイアステート幹細胞委員会、ニューヨーク州保健局、または、ニューヨーク州の見解を反映するものではありません。 VLSはドリスデューク臨床科学発達受賞者です。我々はまた、抗O1、抗O4抗体の彼の贈り物のために教授ティモシーVartanianに感謝。

Materials

Name of the reagent Company Catalogue number Comments (optional)
KNOCKOUT DMEM/F12 Invitrogen 12660-012 Dissociation medium
Stem Pro NSC SFM Invitrogen A10509-01 Culture medium
Fetal Bovine Serum Invitrogen 10091-148 Frozen medium
Hanks solution (-Ca2+, -Mg2+) Invitrogen 14175-095 Dissociation medium
DMSO Sigma-Aldrich D2650 Frozen medium
EDTA Sigma-Aldrich 431788 Dissociation medium
Paraformaldehyde Sigma-Aldrich 158127 Fixation solution
bFGF R&D 234-FSE Differentiation medium
SHH R&D 1845-SH Differentiation medium
PDGF-AA R&D 221-AA Differentiation medium
B27 Invitrogen 17504-044 Differentiation medium
Mouse Anti-MAP2 Sigma-Aldrich M2320 1:200
Rabbit Anti-DCX Cell signaling 4604s 1:200
Rabbit Anti-GFAP DAKO Z0334 1:200
Rabbit Anti-S100B DAKO Z0311 1:200
Rabbit Anti-O1 gifts of Professor Timothy Vartanian*   1:50
Rabbit Anti-O4 Gifts of Professor Timothy Vartanian*   1:50
40μm cell strainer BD Falcon 352340  

* Timothy Vartanian, MD, PhD, Department of Neurology and Neuroscience, Weill Cornell Medical College, New York, USA

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Cite This Article
Lu, J., Delli-Bovi, L. C., Hecht, J., Folkerth, R., Sheen, V. L. Generation of Neural Stem Cells from Discarded Human Fetal Cortical Tissue. J. Vis. Exp. (51), e2681, doi:10.3791/2681 (2011).

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