Atılır insan fetal kortikal doku sinir kök hücrelerin izolasyonu ve kültürü üzerinde basit ve güvenilir bir yöntem açıklanmıştır. Bilinen insan nörolojik bozukluklar türetilen Kültürler farmakolojik etkinliğini değerlendirmek için bir platform sağlamak gibi, hücresel ve moleküler patolojik süreçleri karakterizasyonu için kullanılabilir.
Nöral kök hücreler (NSC'lerde) kortikal plak gelişimi sırasında ventriküler zon neuroepithelium boyunca bulunur. Bu ilk atalarıdır sonuçta ara atalarıdır yol açan ve daha sonra, serebral korteks oluşturan çeşitli nöronal ve glial hücre alt tipleri. Atılır, normal fetal doku, insan NSC'lerde (böylece neurospheres denir) oluşturmak ve genişletmek için kapasite doğrudan normal insan MGK geliştirme 1-5 fonksiyonel yönlerini incelemek için bir araç sağlar. Bu yaklaşım aynı zamanda, böylece progenitör proliferasyon, göç ve farklılaşma 6-9 değiştiren hastalık süreçleri tanımlamak için fırsat karşılayabilme bilinen nörolojik bozukluklar NSC'lerde nesil doğru olabilir . Biz hızlandırılmış Alzheimer hastalığı fenotip 10,11 katkıda bulunabilecek insan Down sendromu NSC'lerde patolojik mekanizmaların belirlenmesi üzerine odaklanmıştır. Ne, in vivo, ne in vitro fare modellerinde 21 insan kromozomu üzerinde bulunan genlerin aynı repertuar çoğaltabilirsiniz .
Burada iptal insan fetal korteks Down sendromu NSC'lerde kültür izole etmek ve onları büyümeye basit ve güvenilir bir yöntemi kullanabilirsiniz. Metodolojisi sınırlı anatomik işaretleri, hücre sıralama, kaplama ve insan NSC'lerde Pasajlanması doku diseksiyonu hasat belirli yönlerine sağlar. Biz de daha seçici hücre alt tiplere insan NSC'lerde farklılaşma inducing için bazı temel protokolleri sağlar.
Kültür taze doku ve üreten insan hücre hatları yönelik çeşitli yaklaşımlar vardır. Tarihsel olarak, taze doku hasat ve merkezi sinir sisteminde çeşitli hücre tipleri oluşturmak için hemen kültür. Bu yaklaşım, ancak net bir şekilde elde durumda insan örnekleri için, genellikle oldukça küçük olabilir örneklerinin sayısı ile sınırlıdır. Minimal manipülasyon derecesi göz önüne alındığında, taze kültür sinir hücreleri uzun kültür potansiyel eserler sınırlayarak en güvenilir d…
The authors have nothing to disclose.
HD054347 ve NS063997-01 VLS için: Bu çalışma Ulusal Sağlık Enstitüleri tarafından desteklenmektedir. Bu çalışma aynı zamanda New York Dışişleri Bakanlığı aracılığıyla Sağlık Sözleşme # C024324 VLS Empire State Kök Hücre Fonu tarafından desteklenmiştir. Burada ifade edilen görüşler yalnızca yazarın aittir ve ille de Empire State Kök Hücre Kurulu, New York Eyaleti Sağlık Departmanı, ya da New York Devlet yansıtmamaktadır. VLS Doris Duke Klinik Scientist Gelişim Ödülü Alıcı. Ayrıca Profesör Timothy Vartanian Anti-O1, Anti-O4 antikorlar onun hediye için teşekkür ederim.
Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
---|---|---|---|
KNOCKOUT DMEM/F12 | Invitrogen | 12660-012 | Dissociation medium |
Stem Pro NSC SFM | Invitrogen | A10509-01 | Culture medium |
Fetal Bovine Serum | Invitrogen | 10091-148 | Frozen medium |
Hanks solution (-Ca2+, -Mg2+) | Invitrogen | 14175-095 | Dissociation medium |
DMSO | Sigma-Aldrich | D2650 | Frozen medium |
EDTA | Sigma-Aldrich | 431788 | Dissociation medium |
Paraformaldehyde | Sigma-Aldrich | 158127 | Fixation solution |
bFGF | R&D | 234-FSE | Differentiation medium |
SHH | R&D | 1845-SH | Differentiation medium |
PDGF-AA | R&D | 221-AA | Differentiation medium |
B27 | Invitrogen | 17504-044 | Differentiation medium |
Mouse Anti-MAP2 | Sigma-Aldrich | M2320 | 1:200 |
Rabbit Anti-DCX | Cell signaling | 4604s | 1:200 |
Rabbit Anti-GFAP | DAKO | Z0334 | 1:200 |
Rabbit Anti-S100B | DAKO | Z0311 | 1:200 |
Rabbit Anti-O1 | gifts of Professor Timothy Vartanian* | 1:50 | |
Rabbit Anti-O4 | Gifts of Professor Timothy Vartanian* | 1:50 | |
40μm cell strainer | BD Falcon | 352340 |
* Timothy Vartanian, MD, PhD, Department of Neurology and Neuroscience, Weill Cornell Medical College, New York, USA