Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove

Neuroscience

Atılan İnsan Fetal Kortikal Doku Sinir Kök Hücre Üretimi

doi: 10.3791/2681 Published: May 25, 2011

Summary

Atılır insan fetal kortikal doku sinir kök hücrelerin izolasyonu ve kültürü üzerinde basit ve güvenilir bir yöntem açıklanmıştır. Bilinen insan nörolojik bozukluklar türetilen Kültürler farmakolojik etkinliğini değerlendirmek için bir platform sağlamak gibi, hücresel ve moleküler patolojik süreçleri karakterizasyonu için kullanılabilir.

Abstract

Nöral kök hücreler (NSC'lerde) kortikal plak gelişimi sırasında ventriküler zon neuroepithelium boyunca bulunur. Bu ilk atalarıdır sonuçta ara atalarıdır yol açan ve daha sonra, serebral korteks oluşturan çeşitli nöronal ve glial hücre alt tipleri. Atılır, normal fetal doku, insan NSC'lerde (böylece neurospheres denir) oluşturmak ve genişletmek için kapasite doğrudan normal insan MGK geliştirme 1-5 fonksiyonel yönlerini incelemek için bir araç sağlar. Bu yaklaşım aynı zamanda, böylece progenitör proliferasyon, göç ve farklılaşma 6-9 değiştiren hastalık süreçleri tanımlamak için fırsat karşılayabilme bilinen nörolojik bozukluklar NSC'lerde nesil doğru olabilir . Biz hızlandırılmış Alzheimer hastalığı fenotip 10,11 katkıda bulunabilecek insan Down sendromu NSC'lerde patolojik mekanizmaların belirlenmesi üzerine odaklanmıştır. Ne, in vivo, ne in vitro fare modellerinde 21 insan kromozomu üzerinde bulunan genlerin aynı repertuar çoğaltabilirsiniz .

Burada iptal insan fetal korteks Down sendromu NSC'lerde kültür izole etmek ve onları büyümeye basit ve güvenilir bir yöntemi kullanabilirsiniz. Metodolojisi sınırlı anatomik işaretleri, hücre sıralama, kaplama ve insan NSC'lerde Pasajlanması doku diseksiyonu hasat belirli yönlerine sağlar. Biz de daha seçici hücre alt tiplere insan NSC'lerde farklılaşma inducing için bazı temel protokolleri sağlar.

Protocol

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

1. Diseksiyon ve sinir kök hücre kültürü bakımı için çözümler ve malzemelerin hazırlanması

  1. 100ml diseksiyonu orta (nakavt DMEM/F12, Invitogen) vaktinden önce hazırlayın ve buzdolabına kaldırın.
  2. Prepare100 ml kültür ortamı (Stem Pro MGK SFM, Invitrogen) ve 37 tutmak ° C su banyosu.
  3. Uzun süreli hücre dondurulması için hücre dondurma orta (nakavt DMEM/F12 10% FBS +% 5 DMSO) hazırlayın.
  4. İsterseniz, doku fiksasyonu için% 4 paraformaldehid (PFA) hazırlamak.
  5. Kulplu Steril, otoklavlanmış forseps ve bisturi ağızları diseksiyon için kullanılır.
  6. Bir pipet tabancası, 10 ml transferi pipetler, ve 40 mcM hücre disosiasyon süzgeç (BD Falcon 352.340) bir kenara koyun.
  7. 10 cm diseksiyon için çeşitli kültür kaplarına (BD), disosiasyon için 50 ml santrifüj tüplerine (BD), donma hücrelerin doku saklama ve donmuş şişeleri (BD) için 1,5 ml santrifüj tüplerine kenara koyun.

2. Insan fetal beyin insan sinir kök hücreleri Yalıtımlı

  1. Fetus sona ermesinden hemen sonra canlı doku Hasat prosedürün başarısı için hayati önem taşımaktadır. Seçmeli prosedürleri için, numune almaya zamanlama fetal ölümünden sonra zamanı en aza indirmek amacıyla önceden düzenlenmiş olabilir. 2 saat prosedürü içinde anlayışının ürünleri hasat edilir, ancak ideal bir dakika içinde seçmeli prosedürleri elde edilebilir. Fetal dokularda genellikle parçalanmış. Ancak, genel olarak beynin önemli bir bölümünü görsel kimlik için sağlam kalır. Gebelik yaşı (GA) Sınırlamalar yasal hukuk tarafından belirlenir ancak GA 18-22 hafta arasında bu protokol kullanılarak yapılmıştır.
  2. Fetal beyin buz nakavt DMEM/F12 çözüm içeren 10 ml Petri kabı yerleştirilir. Anatomik işaretleri korteksin farklı parçalarını tanımak. Frontal ve parieto-oksipital korteks Sınırları merkezi sulkus ve sylvian fissür ekstrapole kesiştiği odaklı. Ventrikül sağlam ve hasarsız tutmak için emin olun, merkezi sulkus ön frontal korteks ve cerrahi bıçaklar ile sylvian fissür sınırındaki doku parçalara ayır.
  3. Frontal korteks ayrılan blok herhangi bir kalıntı kan ve meninks çıkarın. Örnek yeterli kalitede ise, çeşitli amaçlar için birkaç küçük örnekleri içine blok incelemek için idealdir: bölümler (PFA,% 4 paraformaldehid sabit) ve protein / mRNA testleri (hızlı -80 ° C donmuş).
  4. Seçilen beyin blok 50 ml santrifüj tüpüne aktarın ve hakkında 3 kez doku hacmi az buz nakavt DMEM/F12 çözüm eklemek. 10 ml transfer pipetle yavaşça mekanik pipetleme doku ayrıştırmaları tüm dokulara kadar (genellikle 20-30 kez) parçalanmış olur ve daha sonra tek ya da yakın tek bir hücre elde etmek için 40 mcM hücre süzgeç (BD Falcon 352.340) ile hücrelerin filtre süspansiyon.
  5. Hücre süspansiyonu 2000 rpm ve oda sıcaklığında 5 dakika süreyle santrifüj, 10 ml taze sıcak bir kültür ortamı (Stem Pro MGK SFM) hücre pelletini tekrar süspansiyon ve hemasitometre ile hücre sayısını.
  6. 5 ml sıcak bir kültür ortamı, her biri 25 cm 2 kültür şişeler içine ekleyin ve her balona 2x10 6 hücre transferi. Kültürler 37 korunur ° C /% 5 CO 2 inkübatör analizden önce 1 hafta boyunca. Daha fazla kültür ve deneyler için haftada bir kez yarım orta değiştirin.

3. Nöral kök hücreler daha fazla karakterizasyonu veya deneylerine için Manipulaton

  1. Neurospheres genellikle MGK çapı 200 ve 400 mikron arasında değişen, önerilen kültür koşulları altında 1 ila 2 hafta form. Neurospheres bu aşamada tek hücre elde etmek için 15 dakika süreyle 37 kalsiyum ve magnezyum ücretsiz Hanks orta (Tom Hanks) 0.2 g / L EDTA ° C ile ayrıştırıldı olabilir. Hücreler süspansiyonu, taze Hanks durulanır 2000 rpm döndü ve altkültürün sıcak kültür ortamı replated.
  2. Farklılaşma başlatmak için, ayrışmış hücreleri lamel başına 1x10 5 hücreleri (24mmX24mm) yoğunluğu poly-D-lysine/laminin 1 kaplı lamelleri kaplanmıştır. Oligodendrosit farklılaşması için nakavt DMEM/F12 (Invitrogen, Ana, MD) +2% B27 (50X, Invitrogen, Ana, MD) 10 ng / ml bFGF 100 ng / ml SSH + 10 ng PDGF-AA hücreleri koruyarak elde edilir 2 gün sonra 5 gün süreyle büyüme faktörleri olmadan aynı ortama geçiş. 7 gün boyunca nöronal farklılaşma nakavt muhafaza hücreleri tarafından DMEM/F12 +2% B27 (50X) elde edilir. Astrosit farklılaşma, bir hafta boyunca nakavt DMEM/F12% 1 FBS kültür hücreleri tarafından yapılır.
  3. Genleri ile nöral kök hücreler Transfeksiyon preformed neurospheres ayrı hücreleri ile yapılabilir. Burada, nöral kök hücreler elektroporasyon EGFP-C1 ile transfekte gösterdi. EGFP-C1 inşa elektroporasyon (Fare Nöral Kök Hücreler AMAXA Nucleofector Kitleri kullanılarak yapıldı VPGŞirketin talimat aşağıdaki AMAXA Nucleofector Device (Lonza AAD-1001), 1004). Kısacası, 1 X 10 6 hücreleri ile 5 mg DNA 100 ul transfeksiyon orta ile karışık, ve darbe elektroporasyon sonra, hücreleri, sinir kök hücreleri daha fazla kültür ortamı sürdürmek yeniden süspanse edildi. Transfekte hücrelerin farklılaşması adım 3.2 'de açıklanan aynı prosedürler izlenerek, neurospheres elektroporasyon sonra 3-4 gün ayrışma ile işlendi.

4. Donma sinir kök hücreleri ve altkültürlerin

  1. Grubuyla aynı hücre süspansiyonları 1x10 7 hücre / flakon / ml 'lik bir konsantrasyon ile santrifüj ve donma ortamda yeniden süspanse. -20 ° C, -80 hücrelerin yavaş yavaş dondurma ° C için sıvı nitrojen aktarmak sonra da uzun süre depolama.
  2. Hücreler hızlı 37 ile çözülmüş ° C su banyosu ve yeniden süspanse +10% serum DMEM/F12 bir yıkama için ısındı, donma orta kaldırmak için santrifüj ve ısıtılmış bir kültür ortamı yeniden bekletildi.

5. Temsilcisi Sonuçlar:

Sinir kök hücreleri normal bir fetus gebelik yaşı 18 hafta açıklanan yöntem ve neurospheres, yuvarlak, düzgün sınırları ve oldukça homojen bir boyutu (Fig.2A) ile bir hafta sonra görülebilir kültüre edildi. Bu neurospheres EGFP-C1 veya diğer yapıları ile transfekte ve floresan mikroskobu (Fig.2B) altında takip edilebilir. Daha sonra kurulan neurospheres EDTA ile kaplı lamelleri üzerinde dağınık hücreler olarak ayrışmış ve kaplama. % 4 parafamaldehyde ile ilgili protokol çerçevesinde farklılaşmış hücreler sabit ve farklı hücre tipi özel işaretleri ile boyandı. Multipotentiality (Fig2E, F, rodamin) astrositler (Fig2C, D, rodamin) nöronların gösterge işaretleri ve oligodendrosit (Fig2G, H, rodamin) ifadesi ile görülmektedir. EGFP, elektroporasyon geçirmiş hücrelerin farklı hücre türlerine de farklılaşmış ve farklı hücre özel işaretleri ile boyandı. Multipotentiality (Fig3C, rodamin ve Fig3D, fluoroscein) astrositler (Fig3A, B, fluoroscein) nöronların gösterge işaretleri ve oligodendrosit (Fig3E, F, rodamin) ifadesi ile görülmektedir.

Şekil 1
Şekil 1 atılır insan fetal beyin sinir kök hücreleri izole etmek için deneysel işlemin şematik

Şekil 2
Şekil 2, in vitro propogated ayrım yapılmamış ve farklı insan sinir hücrelerinin . (A) Neurospheres pürüzsüz, yuvarlak sınırları ve kültür üzerinden 1 hafta sonra hızlı bir büyüme gösteren faz kontrast mikroskobu altında gösterilmiştir. (B) çeşitli plazmid ve yapıları Giriş transfeksiyon ile elde edilebilir. EGFP-C1 transfeksiyon izleyen üç gün, birden fazla hücre fluoroscein immün floresan mikroskobu altında görülebilen yeşil flüoresan protein ekspresyonu göstermektedir. EGFP-C1 transfekte neurospheres nöronları (C, D), astrositler (E, F) ve oligodendrosit (G, H) içine farklı koşullar altında, ayrışmış ve farklılaştırılmış ve rodamin floresan altında görülmektedir. Aynı zamanda, transfekte EGFP pozitif hücrelerin fluoroscein floresan altında gösterilmiştir. Transfekte hücreleri (beyaz ok uçları) untransfected hücreleri (beyaz oklar) ayırt edilemez. Hücre çekirdekleri Hoechst33342 ile boyandı. Ölçeği çubuklar 200 mikron A, B için 100 mikron ve 25 mikron CH için.

Şekil 3
Şekil 3 transfeksiyon olmadan Neurospheres ayrışmış ve farklı nöronların (A, B, fluoroscein), astrositler (C rodamin, D, fluoroscein) ve oligodendrosit (E, F, rodamin) içine farklı koşullar altında. Hücre çekirdekleri Hoechst33342 ile boyandı. Ölçeği bar AF için 25 mikron.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Kültür taze doku ve üreten insan hücre hatları yönelik çeşitli yaklaşımlar vardır. Tarihsel olarak, taze doku hasat ve merkezi sinir sisteminde çeşitli hücre tipleri oluşturmak için hemen kültür. Bu yaklaşım, ancak net bir şekilde elde durumda insan örnekleri için, genellikle oldukça küçük olabilir örneklerinin sayısı ile sınırlıdır. Minimal manipülasyon derecesi göz önüne alındığında, taze kültür sinir hücreleri uzun kültür potansiyel eserler sınırlayarak en güvenilir deneysel sistemi sağlar. Sınırlı kaynağı çeşitli onkogenler 12, 13 ekleme ile ölümsüzleştirdi olmuştu insan hücre hatları üreten ikinci bir yaklaşım olmuştur. Bu yaklaşım için endişe onkojenik manipülasyon bu hücrelerin hücre özelliklerini değiştirecek ihtimali yatıyordu. Ayrıca, çeşitli insan bozuklukları nakli ve tedavi için potansiyeli, insan hücre hatları üretmek için gerekçe parçası oldu. Ölümsüzleştirilmiştir hücre hatları kanser büyüme riskine zemin hazırlayabilir. Bu hücre hatları avantajı hatların tekdüzelik, beyinde bir bölge doğasında çeşitli nöronal ve glial fenotipleri kabul yeteneklerini, ve kültürleri çok sayıda üretme kolaylığı. Onkojenik potansiyel sınırlamaları aşmak için, çeşitli yaklaşımlar kültür birincil insan sinir kök hücreleri kullanılmaktadır. Çoğu yöntemler yapışma veya askıya alma kültürü teknikleri, EGF ve hücrelerin bFGF manipülasyon dayanmaktadır. Bu farklı yaklaşımlar, MGK'nın 14 farklı saflık sonuçlanır . Svendsen ve ark. MGK kültür, MGK kısa bir süre içinde zengin bir üretim verebilir tutulan hücre-hücre rehber (15) ile oluşan neurospheres bölümü tarafından bir yöntem bildirdi. Ancak, daha sonra geçişleri oligodendrosit bu neurospheres ile elde edilebilir değildir. EGF ve bFGF ile zenginleştirmek neurospheres in vitro 14 transkripsiyonel ve hücresel fenotipleri de değiştirebilir. Erken geçit kültürlerin Kullanım kültürlerin çok sayıda ihtiyaç ve kültürünün artifakı tanıtımı için en endişe arasında makul bir uzlaşma sağlar. En son gelişmeler, kök hücre özelliklerini korumak için gerekli olan genlerin bir alt kümesi zorla ifadeye göre bağlı pluripotent kök hücreleri üretimi yapılmıştır. IPS hücreleri büyük miktarlarda insan hücrelerinin yanı sıra insan vücudu oluşturan tüm hücrelerin farklı türleri oluşturmak için potansiyel sağlama avantajına sahiptir. Şu anda, bu son avantajı da belirli bir hücre tipi (yani ön beyin nöronları) hücreleri dönüştürmek için sinyal mekanizmasını bilinen olmadığını Bu model sistemi daha cazip hale getiriyor.

Insan NSC'lerde nesil için açıklanan geçerli yöntemler yayınlanan diğer yaklaşımlardan bazı küçük farklılıklar sağlar. En Önceki yöntemler, fetal korteks MGK ayırmak hücre disosiasyon (tripsin veya Papain) çeşitli enzimatik ya da kimyasal yollarla kullanabilirsiniz. Genel olarak, büyük miktarda doku verilen, ince hücre filtrasyon ile minimal manipülasyon geçiren tek canlı hücreleri elde etmek için yumuşak mekanik öğütme. Ayrıca, bu yaklaşım insan örnekleri için kritik doku kültür / depolama, doku hasat zamanı en aza indirir.

Bu protokol, insan sinir kök hücreleri izole etmek için nasıl atılır frontal kortikal doku 7,9,10,11 açıklamaktadır . Neurospheres izole metodolojisi insan doku örnekleri tek hücreli süspansiyonlar edinme optimum burada açıklanan yaklaşım ile insani ve fareler arasında biraz farklılık göstermektedir. Insan doku kullanımı bazı noktalar vardır. Birincisi ve en önemlisi, hücre ayrılma ve hasat başlangıcı öncesinde fetal ölümünden sonra süresinin kısaltılması. Bu sorun, 4 seçmeli kürtaj ve muhafaza örnekleri önceden zamanlama ile hafifletilebilir ° C. İkinci olarak, kortikal doku disosiasyon için simge tanımlamak için denemek için önemlidir. Bu amaçla, prematüre işlemi gerçekleştirmeden doktor beyin bütünlüğünü korumak için mümkün olduğunda denemek için bilgilendirmek için yararlıdır. Üçüncü olarak, 18-22 hafta bile insan fetal beyin ölçeği çok aştığı gerçekleştirmek için önemli, bu nedenle yetişkin bir fare veya sıçan ve ayrılma, filtrasyon, ve daha büyük bir verim sistemi ile yıkama gerçekleştirmek için ihtiyaç (yani büyük plastik eşya, 10 ml plastik pipetler vs cam cilalı pipetler, paralel olarak işlenen birden fazla numune). Dördüncüsü, hücrelerin mekanik olarak ayrışmış ve tüm doku parçaları gitti emin olmak için gerekli değildir. Aksine, filtrasyon, kültür için büyük bir örneklem istenmeyen büyük doku parçaları ve ayrı yeterli bireysel NSC'lerde kaldırmak anlayışı ezerek toz haline getirme, mümkün olduğunca en aza indirmek için tercih. Dördüncüsü, seçilen reaktifler insan neurospheres için optimize edilmiştir. Son olarak, one agregasyonu en aza indirmek amacıyla, kaplama sonra tek tek hücrelerin rahatsız etmemek için çalışmalısınız.

Insan sinir kök hücreleri klonal küreler oluşturmuşlardır sonra, yukarıda açıklandığı gibi, tek bir hücre içine ayrılamaz ve tespit kendini yenileme yetenekleri geçişli veya büyüme faktörleri ve / veya protein farklı kombinasyonları kullanarak farklı hücre türlerine ayrılabilir.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Çıkar çatışması ilan etti.

Acknowledgments

HD054347 ve NS063997-01 VLS için: Bu çalışma Ulusal Sağlık Enstitüleri tarafından desteklenmektedir. Bu çalışma aynı zamanda New York Dışişleri Bakanlığı aracılığıyla Sağlık Sözleşme # C024324 VLS Empire State Kök Hücre Fonu tarafından desteklenmiştir. Burada ifade edilen görüşler yalnızca yazarın aittir ve ille de Empire State Kök Hücre Kurulu, New York Eyaleti Sağlık Departmanı, ya da New York Devlet yansıtmamaktadır. VLS Doris Duke Klinik Scientist Gelişim Ödülü Alıcı. Ayrıca Profesör Timothy Vartanian Anti-O1, Anti-O4 antikorlar onun hediye için teşekkür ederim.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
KNOCKOUT DMEM/F12 Invitrogen 12660-012 Dissociation medium
Stem Pro NSC SFM Invitrogen A10509-01 Culture medium
Fetal Bovine Serum Invitrogen 10091-148 Frozen medium
Hanks solution (-Ca2+, -Mg2+) Invitrogen 14175-095 Dissociation medium
DMSO Sigma-Aldrich D2650 Frozen medium
EDTA Sigma-Aldrich 431788 Dissociation medium
Paraformaldehyde Sigma-Aldrich 158127 Fixation solution
bFGF R&D Systems 234-FSE Differentiation medium
SHH R&D Systems 1845-SH Differentiation medium
PDGF-AA R&D Systems 221-AA Differentiation medium
B27 Invitrogen 17504-044 Differentiation medium
Mouse Anti-MAP2 Sigma-Aldrich M2320 1:200
Rabbit Anti-DCX Cell Signaling Technology 4604s 1:200
Rabbit Anti-GFAP Dako Z0334 1:200
Rabbit Anti-S100B Dako Z0311 1:200
Rabbit Anti-O1 gifts of Professor Timothy Vartanian* 1:50
Rabbit Anti-O4 Gifts of Professor Timothy Vartanian* 1:50
40μm cell strainer BD Biosciences 352340
* Timothy Vartanian, MD, PhD, Department of Neurology and Neuroscience, Weill Cornell Medical College, New York, USA

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Gage, F. H., Ray, J., Fisher, L. J. Isolation, characterization, and use of stem cells from the CNS. Annu. Rev. Neurosci. 18, 159-192 (1995).
  2. Vescovi, A. L., Snyder, E. Y. Establishment and properties of neural stem cell clones: plasticity in vitro and in vivo. Brain Pathol. 9, 569-598 (1999).
  3. Schwartz, P., Bryant, P., Fuja, T., Su, H., O'Dowd, D., Klassen, H. Isolation and characterization of neural progenitor cells from post-mortem human cortex. J Neurosci Res. 74, 838-851 (2003).
  4. Martinez-Serrano, A., Rubio, F. J., Navarro, B., Bueno, C., Villa, A. Human neural stem and progenitor cells: in vitro and in vivo properties, and potential for gene therapy and cell replacement in the CNS. Curr Gene Ther. 1, 279-299 (2001).
  5. Rajan, P., Snyder, E. Neural stem cells and their manipulation. Methods Enzymol. 419, 23-52 (2006).
  6. Ruiz-Lozano, P., Rajan, P. Stem cells as in vitro models of disease. Curr Stem Cell Res Ther. 2, 280-292 (2007).
  7. Sheen, V., Ferland, R., Harney, M., Hill, R., Neal, J., Banham, A., Brown, P., Chenn, A., Corbo, J., Hecht, J., Folkerth, R., Walsh, C. Impaired proliferation and migration in human Miller-Dieker neural precursors. Ann Neurol. 60, 137-144 (2006).
  8. Bahn, S., Mimmack, M., Ryan, M., Caldwell, M., Jauniaux, E., Starkey, M., Svendsen, C., Emson, P. Neuronal target genes of the neuron-restrictive silencer factor in neurospheres derived from fetuses with Down's syndrome: a gene expression study. Lancet. 359, 310-315 (2002).
  9. Ferland, R. J., Batiz, L. F., Neal, J., Lian, G., Bundock, E., Lu, J., Hsiao, Y. C., Diamond, R., Mei, D., Banham, A. H. Disruption of neural progenitors along the ventricular and subventricular zones in periventricular heterotopia. Hum Mol Genet. 18, 497-516 (2009).
  10. Esposito, G., Imitola, J., Lu, J., De Filippis, D., Scuderi, C., Ganesh, V. S., Folkerth, R., Hecht, J., Shin, S., Iuvone, T., Chesnut, J., Steardo, L., Sheen, V. Genomic and functional profiling of human Down syndrome neural progenitors implicates S100B and aquaporin 4 in cell injury. Hum Mol Genet. 17, 440-457 (2008).
  11. Esposito, G., Scuderi, C., Lu, J., Savani, C., De Filippis, D., Iuvone, T., Steardo, L. J. r, Sheen, V., Steardo, L. S100B induces tau protein hyperphosphorylation via Dickopff-1 up-regulation and disrupts the Wnt pathway in human neural stem cells. J Cell Mol Med. 12, 914-927 (2008).
  12. Flax, J. D., Aurora, S., Yang, C., Simonin, C., Wills, A. M., Billinghurst, L. L., Jendoubi, M., Sidman, R. L., Wolfe, J. H., Kim, S. U., Snyder, E. Y. Engraftable human neural stem cells respond to developmental cues, replace neurons, and express foreign genes. Nat Biotechnol. 16, 1033-1039 (1998).
  13. Fults, D., Pedone, C. A., Morse, H. G., Rose, J. W., McKay, R. D. Establishment and characterization of a human primitive neuroectodermal tumor cell line from the cerebral hemisphere. J Neuropathol Exp Neurol. 51, 272-280 (1992).
  14. Conti, L., Cattaneo, E. Neural stem cell systems: physiological players or in vitro entities? Nat Rev Neurosci. 11, 176-187 (2010).
  15. Svendsen, C. N., ter Borg, M. G., Armstrong, R. J., Rosser, A. E., Chandran, S., Ostenfeld, T., Caldwell, M. A. A new method for the rapid and long term growth of human neural precursor cells. J Neurosci Methods. 85, 141-152 (1998).
Atılan İnsan Fetal Kortikal Doku Sinir Kök Hücre Üretimi
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Lu, J., Delli-Bovi, L. C., Hecht, J., Folkerth, R., Sheen, V. L. Generation of Neural Stem Cells from Discarded Human Fetal Cortical Tissue. J. Vis. Exp. (51), e2681, doi:10.3791/2681 (2011).More

Lu, J., Delli-Bovi, L. C., Hecht, J., Folkerth, R., Sheen, V. L. Generation of Neural Stem Cells from Discarded Human Fetal Cortical Tissue. J. Vis. Exp. (51), e2681, doi:10.3791/2681 (2011).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
simple hit counter