本文介绍了一个微米尺度上的贴壁细胞,细胞与细胞之间的相互作用的动态监管的实验方法。肝细胞和基质细胞之间的连接通讯的操纵表现。开发的平台,使细胞间的相互作用在多种生物学过程,包括开发和发病机制的调查。
细胞微环境的作用是公认的在确定在几乎所有的哺乳动物组织中,从开发到恶变细胞的命运和功能至关重要。在众多的生物现象,特别是与邻国间质的相互作用被牵连,但是,传统技术的能力受到限制,询问这种相互作用的空间和动态元素。
在微机械可重构文化(RC),我们采用运动部件,以动态控制细胞间的相互作用,通过机械的重新定位一个微加工硅衬底此前,该方法已应用于调查在联合培养的肝细胞和非实质细胞间的沟通,表现出随时间变化的相互作用和有限的范围内为1可溶性信号。
在这里,我们详细描述了RC系统的编制和使用。我们首先证明处理使用镊子,包括之间的差距和触点配置驱动装置的零件(细胞群相隔一条狭窄的80微米的差距,或直接的亲密接触)。接下来,我们详细基板准备文化的过程,多步的细胞种植过程中获得融合细胞单层。使用实时显微镜,我们再说明实时操纵细胞之间的不同可能的实验配置。最后,我们展示了,需要重新重用的设备表面的步骤:甲苯和食人鱼清洁,聚苯乙烯涂层,氧等离子体处理。
这个系统是独一无二的,它使组织的空间组织,在细胞水平上进行动态操纵。因此,该设备已启用新型生物实验,跨间信令动态,介导的接触与可溶性信号,细胞命运的决定,毒理学,和蜂窝串扰等主题。此装置应在广泛普及,因为文化基板,是标准的组织培养塑料,并与标准培养方法和检测系统是兼容的。因此,我们相信,这个平台将作为一个在许多不同的细胞和组织细胞 – 细胞相互作用研究的工具的广泛兴?…
The authors have nothing to disclose.
作者感谢在此设备的设计过程中的有益的讨论萨尔曼Khetani,贾里德 – 阿伦,克里斯Flaim和奥斯汀Derfus。这项工作是由美国国家科学基金会教师早期职业发展计划,国家卫生/国立糖尿病,消化道和肾脏疾病研究所研究院,大卫和露西尔帕卡德基金会的支持。英皇酒店是由一个露丝属Kirschstein国家研究服务奖的支持。