Summary
Cholestasis הוא מצב קליני נתקל בדרך כלל על ידי שני מנתחים גסטרואנטרולוגים. יצירה של מודל cholestatic הפיך עכברוש יכול להיות מאתגר לאור גודל קטן האנטומיה hepatopancreatobiliary ייחודי בחולדות. מאמר זה מדגים וידאו ויצירת מודל cholestatic הפיך.
Abstract
Cholestasis הוא מצב קליני נתקל בדרך כלל על ידי שני מנתחים גסטרואנטרולוגים. Cholestasis יכול לגרום לשינויים פיזיולוגיים שונים משפיעים על מצב תזונתי ותוצאות הניתוח. חקר השינויים המתרחשים pathophysiological הכבד ואיברים אחרים הוא בעל חשיבות. מחקרים שונים שנעשו במודלים של חולדה cholestatic.
השתמשנו במודל הפיך עכברוש cholestatic במחקר האחרונות שלנו מסתכל התפקיד של methylprednisolone לפציעתם reperfusion איסכמיה. טכניקות שונות ליצירת מודל cholestatic הפיך תוארו. יצירה של מודל cholestatic הפיך עכברוש יכול להיות מאתגר לאור גודל קטן האנטומיה hepatopancreatobiliary ייחודי בחולדות. מאמר זה מדגים וידאו ויצירת מודל cholestatic הפיך.
מודל זה יכול לשמש במחקרים שונים, כמו להסתכל על שינויים תזונתיים, פיזיולוגיים, שינויים פתולוגיים היסטולוגית ו החיסונית במערכת העיכול. מודל זה יכול לשמש גם כדי לראות את ההשפעות של cholestasis ו התערבויות טיפוליות שונות על ניתוחים הכבד הגדולות.
Protocol
1. עכברוש המרה אנטומיה
הקוטר הממוצע אורך צינור המרה והיה 1 מ"מ ו 29 מ"מ בהתאמה. המרחק הממוצע בין השוער לבין פטמית התריסריון היה 28 מ"מ. ישנם שני צינורות הלבלב העיקרית אשר פתוח לתוך צינור המרה - צינור הקדמי פותח בצד שמאל את צינור האחורי נפתח בצד ימין. נוסף על אלה צינוריות גדולות, מספר צינורות ניקוז קטין כי כל שלושת החלקים של הלבלב לפתוח ישירות בצינור המרה. 6
2. טכניקה
כל הניסויים בבעלי חיים בוצעו בהסכם עם המכון הלאומי לחקר הבריאות הנחיות אתיות אושרו על ידי ועדת המחקר של המוסד טיפוח ועדת בעלי חיים. זכר Sprague-Dawley חולדות בגילאי 8 שבועות שימשו הפגנה זו. חולדות התקבלו צ'ארלס ריבר מעבדות בווילמינגטון, מסצ'וסטס וכולם היו מעל 300 גרם. החולדות היתה גישה דיאטה מעבדה סטנדרטיים שוכנו יחד בתנאי מעבדה סטנדרטיים.
החולדות היו בתחילה הרדים עם isofluorane ושמר תחת הרדמה במהלך הניתוח עם isofluorane דרך מסכה. חתך קו האמצע של 2 ס"מ נעשתה החל xiphisternum. לאחר fascia נפתחה, האונות בכבד בוטלו cranially עם מפשק של סן, ואת התריסריון בוטלה caudally באמצעות Q-טיפים. בצינור המרה זוהה מבנה צינורי הזנת התריסריון. בצינור המרה הושם תחת מתח לחתוך חלקית. סטרילי 5 ס"מ צינור פוליאתילן ארוך בקוטר פנימי של 0.6 מ"מ ו קוטר חיצוני של 0.9 מ"מ היה בשימוש. קצה אחד של הצינור הזה היה חום אטום, ואת הקצה השני היה משופעים בעדינות. סוף משופעים הועבר מכן לתוך צינור המרה. זה היה במקום מאובטח באמצעות 8-0 תפרים ניילון הן הפרוקסימלית ומ דיסטלי לפתיחת בצינור המרה. צינור הנותרים יחד עם סוף חתום הוצב חלל הצפק. האתר היה פעיל מושקים עם מלח רגיל. הבטן נסגר אז 2 שכבות, עם תפר Polyglactin 4-0. Linea alba נסגר עם התפרים רציפה ואת התפרים עורי קטע הונחו. דבק עור הוחל אז על העור. החולדות הורשו לשחזר בתנאי מעבדה רגילים, ניטור יומיומי משקל הגוף על מנת להבטיח הידרציה תקין.
במשך המבצע היפוך cholestasis, החולדות היו מורדמים באמצעות isofluorane כפי שתואר לעיל. הבטן נפתחה על האתר החתך הקודם. הצינור היה מזוהה ונלקח מתוך חלל הצפק. Omental הידבקויות סביב הצינור משוחררים באמצעות לנתיחה בוטה וחד. אתר תריסריון זוהה לאחר מכן על מיקום נוח של הצינור duodenostomy. מחרוזת ארנק תפר, 2-3 מ"מ קוטר, הוצב מכן באמצעות ניילון 8-0. התריסריון נפתח ואז בתוך תפר זה מחרוזת בארנק. סוף חתום של הצינור נחתך אז אורך מתאים. זרימה חופשית של מיצי מרה היתה מובטחת. סיום זה של הצינור הונח אז אל התריסריון ואת תפר מחרוזת הארנק היה התהדקו. הבטן היתה מושקים וסגר בשכבות.
במחקר קודם, שבו choledochoduodenostomy בוצעה בטכניקה שונה, החולדות היו שרד במשך 12 שבועות וחולדות היו בריאים באותה תקופה. כמו כן, מחקר זה אישר את היפוך של שינויים ביוכימיים היסטולוגית לאחר choledochoduodenostomy בחולדות נתון חסימה של צינור המרה לתקופה של 2 שבועות. 7
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Cholestasis מוביל מספר עצום של שינויים במערכת העיכול. מחקרים שנעשו מחפש את השינויים במערכת החיסונית ואת מצב תזונתי. Cholestasis 1-3 יכולים להשפיע על תוצאות של ניתוחים בכבד. מחקרים בוצעו כדי לשפר את התוצאות של ניתוחי הכבד בנוכחות cholestasis. 4-5 עם שיפור הרפואה והמחקר, מחקרים נוספים ייעשה על cholestasis. לפיכך יש צורך יש מודל cholestatic טוב. החולדה היא המועדפת כחיה ניסיוני כי הוא זמין, טיפל בקלות, זול מודל יציב לחקר מערכת hepatopancreatobiliary. 6 באמצעות מאמר זה וידאו אנחנו מדגימים את יצירתו של מודל cholestatic הפיך אשר יכול לשמש במחקרים עתידיים.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
אין ניגודי אינטרסים הכריז.
References
- Gouma, D. J., Roughneen, P. T., Kumar, S., Moody, F. G., Rowlands, B. J. Changes in nutritional status associated with obstructive jaundice and biliary drainage in rats. Am J Clin Nutr. 44, 362-369 (1986).
- Ohtsuka, M., Miyazaki, M., Kondo, Y., Nakajima, N. Neutrophil-mediated sinusoidal endothelial cell injury after extensive hepatectomy in cholestatic rats. Hepatology. 25, 636-641 (1997).
- Abe, T. Kupffer cell-derived interleukin 10 is responsible for impaired bacterial clearance in bile duct-ligated mice. Hepatology. 40, 414-423 (2004).
- Saiki, S. Preoperative internal biliary drainage is superior to external biliary drainage in liver regeneration and function after hepatectomy in obstructive jaundiced rats. Ann Surg. 230, 655-662 (1999).
- Subhas, G. Protective effect of methylprednisolone on warm ischemia-reperfusion injury in a cholestatic rat liver. Am J Surg. 199, 377-380 (2010).
- Kara, M. E. The anatomical study on the rat pancreas and its ducts with emphasis on the surgical approach. Ann Anat. 187, 105-112 (2005).
- Ryan, C. J., Than, T., Blumgart, L. H. Choledochoduodenostomy in the rat with obstructive jaundice. J Surg Res. 23, 321-331 (1977).
