Skapande av Vändbar Kolestatisk Rat Model

Summary

Kolestas är ett kliniska tillstånd vanligast förekommande av både kirurger och gastroenterologer. Skapande av en reversibel kolestatisk råttmodell kan vara svårt med tanke på mindre storlek och unika hepatopancreatobiliary anatomi hos råttor. Denna video artikeln visar skapandet av en reversibel kolestatisk modell.

Abstract

Kolestas är ett kliniska tillstånd vanligast förekommande av både kirurger och gastroenterologer. Kolestas kan orsaka olika fysiologiska förändringar och påverkar nutritionsstatus och kirurgiska resultat. Studie av patofysiologiska förändringar som sker i levern och andra organ är av betydelse. Olika undersökningar har gjorts i kolestatisk råtta modeller.

Vi använde en vändbar modell kolestatisk råtta i vår senaste studie som undersöker rollen av metylprednisolon i ischemia reperfusionsskada. Olika tekniker för att skapa en reversibel kolestatisk modell har beskrivits. Skapande av en reversibel kolestatisk råttmodell kan vara svårt med tanke på mindre storlek och unika hepatopancreatobiliary anatomi hos råttor. Denna video artikeln visar skapandet av en reversibel kolestatisk modell.

Denna modell kan användas i olika studier, till exempel att titta på förändringar i näringsmässiga, fysiologiska, patologiska, histologiska och immunologiska förändringar i mag-tarmkanalen. Denna modell kan också användas för att se effekterna av kolestas och olika terapeutiska insatser på stora nedsatt operationer.

Protocol

1. Rat galla anatomi

Den genomsnittliga gallgången diameter och längd var 1 mm och 29 mm, respektive. Det genomsnittliga avståndet mellan pylorus och duodenal papilla var 28 mm. Det finns två huvudsakliga bukspottkörteln kanaler som öppnar i gallgången - den främre kanalen öppnar på vänster sida och den bakre kanalen öppnas på höger sida. Utöver dessa viktiga kanaler, ett antal mindre ledningar som avloppet alla tre delar av bukspottkörteln öppna direkt till gallgången. ⁶

2. Teknik

Alla djurförsök har utförts i samförstånd med National Institutes of Health riktlinjer för etisk forskning och godkändes av institutionens forskning och Animal Care kommittén. Man Sprague-Dawley råttor från 8 veckors användes för denna demonstration. Råttorna har erhållits från Charles River Laboratories i Wilmington, Massachusetts och alla var över 300 gram. Råttor hade tillgång till standard laboratorie-kost och var inhyst tillsammans i vanliga laboratorium.

Råttor ursprungligen bedövas med isofluorane och hållas under anestesi under kirurgi med isofluorane genom en mask. En mittlinjen snitt på 2 cm gjordes från och med xiphisternum. När fascia öppnades, lever loberna var indragen cranially med Sens upprullningsdon och tolvfingertarmen blev indragen caudally använder Q-tips. Gallgången identifierades som en tubulär struktur in i tolvfingertarmen. Gallgången var spänns och klipps av delvis öppen. En steril 5 cm långt rör i polyetylen med en inre diameter på 0,6 mm och en ytterdiameter på 0,9 mm har använts. Ena änden av detta rör var värmeförseglas och den andra änden var svagt avfasade. Det avfasade slut var sedan vidare in i gallgången. Detta var säkrade på plats med 8-0 Nylon suturer både proximal och distal till öppningen i gallgången. De återstående röret tillsammans med den förseglade änden placerades i bukhålan. Operationsområdet var bevattnas med normal saltlösning. Buken var då stängdes i två lager, med 4-0 Polyglactin sutur. Linea alba avslutades med kontinuerlig suturer och avbröt huden suturer placerades. Hud lim sedan appliceras på huden. Råttorna fick återhämta sig under normala laboratorieförhållanden med dagliga kroppsvikt övervakning för att säkerställa korrekt hydrering.

För kolestas återföring operationen var råttor sövda med isofluorane som beskrivits tidigare. Buken öppnades under föregående snitt webbplatsen. Röret var identifieras och tas ut från bukhålan. Omental sammanväxningar runt röret frigörs med trubbiga och vassa dissekering. En plats i tolvfingertarmen var då identifierades för bekväm positionering av duodenostomy röret. En väska sträng suturer och 2-3 mm i diameter, var då placerad med 8-0 Nylon. Tolvfingertarmen var då öppnas inuti väskan strängen sutur. Den slutna änden av röret var då kapas till lämplig längd. Fria flödet av galla var säkerställd. Denna änden av röret var då placeras i tolvfingertarmen och handväska strängen suturen skärptes. Buken var bevattnade och stängdes i lager.

I en tidigare studie där choledochoduodenostomy utförs med hjälp av en annan teknik, råttorna överlevde i 12 veckor och råttorna friska under den perioden. Även denna studie bekräftade återföring av biokemiska och histologiska förändringar efter choledochoduodenostomy hos råttor utsätts för hinder i gallgången under en period av 2 veckor. ⁷

Discussion

Kolestas leder till en myriad av förändringar i mag-tarmkanalen. Studier har gjorts efter de förändringar i immunsystemet och nutritionsstatus. Kan påverka utfallet av nedsatt operationer ^1-3 kolestas. Studier har gjorts för att förbättra resultaten av levern operationer i närvaro av kolestas. ^4-5 med förbättringar inom medicin och forskning, kommer ytterligare studier göras på kolestas. Därför är det nödvändigt att ha en bra kolestatisk modell. Råttan är att föredra som ett försöksdjur för att det är lättillgänglig, lätt att hantera, billig och en robust modell för att studera hepatopancreatobiliary systemet. ⁶ Genom denna video artikeln visar vi att skapa en reversibel kolestatisk modell som kan användas i framtida studier.