Summary
En este video, se describe un método para obtener imágenes de células vivas de la división asimétrica sensorial células progenitoras de órganos y células de la epidermis intacta en
Abstract
Desde el descubrimiento de la proteína verde fluorescente (GFP), se ha producido un cambio revolucionario en el uso de células vivas imágenes como una herramienta para comprender los mecanismos biológicos fundamentales. Progreso notable ha sido particularmente evidente en Drosophila, cuyo extenso conjunto de herramientas de mutantes y líneas transgénicas proporciona un modelo práctico para estudiar evolutivamente conservado los mecanismos biológicos del desarrollo y celular. Estamos interesados en entender los mecanismos que la célula de control de la especificación del destino en el adulto el sistema nervioso periférico (SNP) en Drosophila. Cerdas que cubren la cabeza, tórax, abdomen, piernas y las alas de la mosca adulta son individuales órganos mechanosensory, y han sido estudiados como un sistema modelo para entender los mecanismos de Notch-dependiente de las decisiones de la celda destino. Órganos sensoriales precursor (SOP) a las células de la microchaetes (o pequeñas cerdas), se distribuyen por todo el epitelio del tórax de pupa, y se especifican en las primeras 12 horas después del inicio de pupariation. Después de las especificaciones, las células comienzan a dividirse SOP, segregando el determinante el destino de células insensibles a una célula hija durante la mitosis. Funciones insensible como un inhibidor de células autónomas de la vía de señalización Notch.
Aquí, se muestra un método para seguir la dinámica de proteínas en células SOP y su progenie en el tórax pupal intactas mediante una combinación de tejidos específicos Gal4 conductores y GFP-etiquetados 1,2 proteínas de fusión. Esta técnica tiene la ventaja sobre tejido fijado o cultivadas explantes, ya que nos permite seguir todo el desarrollo de un órgano de la especificación de los precursores neuronales para el crecimiento y la diferenciación terminal del órgano. Por lo tanto, puede directamente correlacionar los cambios en el comportamiento celular a los cambios en la diferenciación terminal. Además, podemos combinar la técnica de imagen en vivo con el análisis de mosaico con un marcador de células reprimible (MARCM) del sistema para evaluar la dinámica de las proteínas marcadas en los SOP mitótico en condiciones de mutantes o de tipo salvaje. Usando esta técnica, nosotros y otros han revelado nuevos conocimientos sobre la regulación de la división celular asimétrica y el control de la activación de señalización Notch en las células SOP (los ejemplos incluyen referencias 1-6,7, 8).
Protocol
Discussion
Disclosures
No hay conflictos de interés declarado.
Acknowledgments
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Scotch double stick tape | |||
| Glass slide | |||
| 18mmX18mm coverslip | |||
| Forceps | |||
| Whatman paper | |||
| Silicone vacuum grease | Dow Corning | ||
| 5 ml syringe | |||
| Pipetter | |||
| Confocal or epifluorescence microscope |
References
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