Imagerie des cellules vivantes des cellules sensorielles de précurseurs d'organes en Intact Drosophile Les chrysalides

Summary

Dans cette vidéo, nous décrivons une méthode pour l'imagerie de cellules vivantes de façon asymétrique divisant sensorielles des cellules progénitrices d'organes et les cellules épidermiques intacts

Abstract

Depuis la découverte de Green Fluorescent Protein (GFP), il ya eu un changement révolutionnaire dans l'utilisation de l'imagerie des cellules vivantes comme un outil pour la compréhension fondamentale des mécanismes biologiques. Des progrès remarquables ont été particulièrement évident chez la drosophile, dont la vaste boîte à outils de mutants et de lignées transgéniques fournit un modèle pratique à l'étude évolutivement conservée développement et cellulaire des mécanismes biologiques. Nous sommes intéressés par la compréhension des mécanismes de contrôle que la spécification destin cellulaire dans le système nerveux adulte périphérique (SNP) chez la drosophile. Poils qui couvrent la tête, le thorax, l'abdomen, les jambes et les ailes de la mouche adulte sont individuelles organes mécano, et ont été étudiés comme un système modèle pour comprendre les mécanismes de Notch-dépendante des décisions du destin cellulaire. Sensory organe précurseur (POS) des cellules de la microchaetes (ou petits poils), sont distribués à travers l'épithélium du thorax nymphe, et sont précisés au cours des 12 premières heures après le début de la nymphose. Après la spécification, les cellules commencent à se diviser SOP, séparant le déterminant du destin cellulaire Numb à une cellule fille lors de la mitose. Numb fonctions comme un inhibiteur de la cellule-autonome de la voie de signalisation Notch.

Ici, nous montrons une méthode à suivre la dynamique des protéines dans la cellule SOP et de sa descendance dans le thorax intacte nymphe utilisant une combinaison de tissu-spécifique Gal4 pilotes et GFP-marqués de fusion ^1,2 protéines. Cette technique a l'avantage sur tissus fixés ou de culture explants, car elle nous permet de suivre l'ensemble du développement d'un organe de la spécification de l'précurseurs neuraux à la croissance et la différenciation terminale de l'organe. Nous pouvons donc directement en corrélation des changements dans le comportement des cellules à des changements dans la différenciation terminale. Par ailleurs, nous pouvons combiner la technique d'imagerie vivre avec l'analyse de mosaïque avec un marqueur de cellule répressible (MARCM) système pour évaluer la dynamique des protéines marquées dans les IPO mitotique dans des conditions mutant ou de type sauvage. En utilisant cette technique, nous et d'autres ont révélé de nouvelles connaissances sur la régulation de la division cellulaire asymétrique et le contrôle de l'activation de signalisation Notch dans les cellules de SOP (exemples incluent des références ^{1-6,7, 8).}

Protocol

Discussion