Summary
In questo video, si descrive un metodo per l'imaging cellulare dal vivo di dividere asimmetricamente sensoriale cellule progenitrici organo e cellule epidermiche in intatte
Abstract
Dal momento che la scoperta di una proteina fluorescente verde (GFP), c'è stato un cambiamento rivoluzionario nell'uso di live-cell imaging come uno strumento fondamentale per la comprensione dei meccanismi biologici. Progresso clamoroso è stato particolarmente evidente in Drosophila, il cui vasto kit di strumenti di mutanti e linee transgeniche fornisce un modello utile per lo studio evolutivamente conservato meccanismi di sviluppo e delle cellule biologiche. Siamo interessati a capire i meccanismi che la cellula specifica di controllo destino nell'adulto sistema nervoso periferico (SNP) in Drosophila. Setole che coprono la testa, torace, addome, gambe e le ali della mosca adulti sono singoli organi mechanosensory, e sono stati studiati come sistema modello per la comprensione dei meccanismi delle decisioni cellulare Notch-dipendente destino. Organo sensoriale precursore (SOP), le cellule del microchaetes (o piccole setole), sono distribuiti in tutto l'epitelio del torace pupa, e sono specificati nelle prime 12 ore dopo l'insorgenza della pupariation. Dopo le specifiche, le cellule cominciano a dividersi SOP, segregare il determinante il destino della cellula Numb ad una cellula figlia durante la mitosi. Numb funzioni come una cellula autonoma-inibitore della via di segnalazione Notch.
Qui mostriamo un metodo per seguire la dinamica delle proteine in cellule SOP e la sua progenie all'interno del torace intatto pupa utilizzando una combinazione di tessuto-specifici GAL4 driver e GFP-tagged 1,2 fusione proteine. Questa tecnica ha il vantaggio rispetto tessuto fisso o coltivate espianti perché ci permette di seguire l'intero sviluppo di un organo da specifica del precursore neurale alla crescita e differenziazione terminale dell'organo. Possiamo quindi direttamente correlare i cambiamenti nel comportamento delle cellule ai cambiamenti nella differenziazione terminale. Inoltre, siamo in grado di combinare la tecnica di imaging dal vivo con l'analisi di mosaico con un marker delle cellule reprimibile (MARCM) sistema per valutare la dinamica delle proteine taggato in SOP mitotico in condizioni mutante o di tipo selvatico. Utilizzando questa tecnica, noi e altri hanno messo in luce intuizioni romanzo in regolazione della divisione cellulare asimmetrica e il controllo di attivazione del segnale di Notch nelle cellule SOP (esempi includono riferimenti 1-6,7, 8).
Protocol
Discussion
Disclosures
Nessun conflitto di interessi dichiarati.
Acknowledgments
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Scotch double stick tape | |||
| Glass slide | |||
| 18mmX18mm coverslip | |||
| Forceps | |||
| Whatman paper | |||
| Silicone vacuum grease | Dow Corning | ||
| 5 ml syringe | |||
| Pipetter | |||
| Confocal or epifluorescence microscope |
References
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