Summary
בסרטון הזה, אנו מתארים שיטת הדמיה של תא חי להתחלק סימטרית חושי אבי איברים ותאי אפידרמיס ב שלם
Abstract
מאז גילויו של חלבון פלואורסצנטי ירוק (GFP), חל שינוי מהפכני השימוש הדמיה לחיות תאים ככלי להבנת המנגנונים הביולוגיים הבסיסיים. התקדמות מרשימה כבר בולט במיוחד תסיסנית, אשר נרחב ערכת כלים של מוטנטים קווי מהונדס מספק מודל נוח ללמוד מבחינה אבולוציונית, שימור מנגנונים ביולוגיים התפתחותיים התא. אנחנו מעוניינים להבין את מנגנוני התא לשלוט בגורל מפרט במערכת למבוגרים העצבים ההיקפית (PNS) ב תסיסנית. זיפים כי כיסוי ראש, חזה, בטן, רגליים וכנפיים של הזבוב הבוגר הם איברים mechanosensory הפרט, נחקרו כמערכת מודל להבנת המנגנונים של Notch תלויי החלטות גורל התא. חושי מבשר איבר (SOP) תאים של microchaetes (או זיפים קטנים), מופצים ברחבי האפיתל של בית החזה גלמי, והם שצוין במהלך 12 השעות הראשונות לאחר תחילת pupariation. לאחר מפרט, התאים מתחילים להתחלק SOP, מבודד את גורל התא הקובע Numb לתא בת אחת במהלך מיטוזה. פונקציות כמו Numb מעכב תאים אוטונומיים של מסלול איתות Notch.
כאן, אנו מציגים שיטה לעקוב אחר הדינמיקה חלבון בתא SOP והצאצאים שלה בתוך בית החזה גלמי שלמים באמצעות שילוב של רקמות ספציפיות Gal4 נהגים GFP-tagged חלבונים 1,2 היתוך. טכניקה זו יש יתרון על פני רקמת קבוע או תרבותי explants משום שהיא מאפשרת לנו לעקוב אחר התפתחות שלם של איבר מן המפרט של מבשר העצבית לצמיחה בידול הטרמינל של האיבר. מכאן ניתן לתאם ישירות לשינויים בהתנהגות התאים לשינויים בידול סופנית. יתר על כן, אנו יכולים לשלב את טכניקת דימות לחיות עם ניתוח פסיפס עם סמן תא מערכת repressible (MARCM) כדי להעריך את הדינמיקה של החלבונים המתויגים ב SOPs mitotic בתנאים מוטציה או wildtype. באמצעות טכניקה זו, אנו ואחרים חשפו תובנות הרומן לתוך ויסות חלוקת התא אסימטרי הבקרה של הפעלת Notch איתות בתאי SOP (דוגמאות כוללות הפניות 1-6,7, 8).
Protocol
Discussion
Disclosures
אין ניגודי אינטרסים הכריז.
Acknowledgments
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Scotch double stick tape | |||
| Glass slide | |||
| 18mmX18mm coverslip | |||
| Forceps | |||
| Whatman paper | |||
| Silicone vacuum grease | Dow Corning | ||
| 5 ml syringe | |||
| Pipetter | |||
| Confocal or epifluorescence microscope |
References
- Gho, M., Bellaiche, Y., Schweisguth, F. Revisiting the Drosophila microchaete lineage: a novel intrinsically asymmetric cell division generates a glial cell. Development. 126, 3573-3584 (1999).
- Roegiers, F., Younger-Shepherd, S., Jan, L. Y., Jan, Y. N. Two types of asymmetric divisions in the Drosophila sensory organ precursor cell lineage. Nat Cell Biol. 3, 58-67 (2001).
- Bellaiche, Y., Gho, M., Kaltschmidt, J. A., Brand, A. H., Schweisguth, F. Frizzled regulates localization of cell-fate determinants and mitotic spindle rotation during asymmetric cell division. Nat Cell Biol. 3, 50-57 (2001).
- Emery, G., Knoblich, J. A. Endosome dynamics during development. Curr Opin Cell Biol. 18, 407-415 (2006).
- Roegiers, F., Younger-Shepherd, S., Jan, L. Y., Jan, Y. N. Bazooka is required for localization of determinants and controlling proliferation in the sensory organ precursor cell lineage in Drosophila. Proc Natl Acad Sci U S A. 98, 14469-14474 (2001).
- Roegiers, F. Frequent unanticipated alleles of lethal giant larvae in Drosophila second chromosome stocks. Genetics. 182, 407-410 (2009).
- Tong, X. Numb independently antagonizes Sanpodo membrane targeting and Notch signaling in Drosophila sensory organ precursor cells. Mol Biol Cell. 21, 802-810 (2010).
- Jafar-Nejad, H. Sec15, a Component of the Exocyst, Promotes Notch Signaling during the Asymmetric Division of Drosophila Sensory Organ Precursors. Dev Cell. 9, 351-363 (2005).
- Karbowniczek, M. The evolutionarily conserved TSC/Rheb pathway activates Notch in tuberous sclerosis complex and Drosophila external sensory organ development. J Clin Invest. 120, 93-102 (2010).
- Coumailleau, F., Furthauer, M., Knoblich, J. A., Gonzalez-Gaitan, M. Directional Delta and Notch trafficking in Sara endosomes during asymmetric cell division. Nature. 458, 1051-1055 (2009).
- Emery, G. Asymmetric rab11 endosomes regulate delta recycling and specify cell fate in the Drosophila nervous system. Cell. 122, 763-773 (2005).
- Justice, N., Roegiers, F., Jan, L. Y., Jan, Y. N. Lethal giant larvae acts together with numb in notch inhibition and cell fate specification in the Drosophila adult sensory organ precursor lineage. Curr Biol. 13, 778-783 (2003).
