이 문서에 설명<em> 체외에서</em내피 세포의 단일 층을 통해 침입 감시 암 세포> 기술. 데이터가 잘 하단에 전극의 표면 임피던스의 변화의 함수로 실시간으로 획득됩니다.
악성 세포의 전이성 확산은 호스트에서 먼 사이트에 교통 수단으로 혈류를 입력 할 내피 층을 지하 막, 혈관 내피 세포에 종양 세포의 부착, 혈관 접합의 철회 및 종양 세포의 마지막 침략과 이동의 저하를 필요로 1-3. 일단 순환 시스템, 암 세포 벽을 모세와 전이성 종양 4,5 형성하는 주변 조직에 extravasate을 준수합니다. 종양 세포 – 내피 세포 상호 작용의 다양한 구성 요소는 암 세포와 인간 제대 정맥 내피 세포 (HUVEC)의 단층에 도전하여 체외에서 복제 할 수 있습니다. 전자 및 위상 대비 현미경으로 수행 연구의 이벤트 체외 순서에서 상당히 생체 전이성 과정 6을 대표하는 것이 좋습니다. 여기, 우리는 모니터링 및 실시간 invas의 정량화 전기 임피던스 기반 기술을 설명악성 종양 세포에 의해 내피 세포의 이온.
Giaever 및 Keese 먼저 세포의 인구는 전극 7,8의 표면에서 자랄 때 임피던스의 변동을 측정하는 방법을 설명합니다. 로슈에 의해 제조 xCELLigence 악기, 세포가 잘 하단에있는 면적의 약 80 %를 커버 골드 미세 전극 배열로 덮여 문화 접시에 부착 확산으로 전기 임피던스 변화를 측정하기 위해 유사한 기술을 사용합니다. 세포 부착 및 전극 표면에 확산으로, 그것은 9-12 전기 임피던스의 증가로 연결됩니다. 임피던스는 세포에 의해 덮여 잘 조직 문화의 총 면적에 비례 차원 매개 변수 되나 세포 인덱스로 표시됩니다. 따라서, 세포 지수는 세포 부착, 확산, 형태학 및 세포 밀도를 모니터링하는 데 사용할 수 있습니다.
이 문서에서 설명 침공 분석은 변화에 근거전극 / 세포 계면에서의 전기 임피던스, 악성 세포의 인구로 HUVEC 단층 (그림 1)를 통해 침입. 내피 분기점의 장애, 종양 세포에 의해 내피 세포의 단층 및 교체의 철회는 임피던스 큰 변화로 이어집니다. 이러한 변화는 직접적으로 종양 세포의 침입 용량 상관 관계, 즉, 매우 공격적인 세포에 의해 침략 세포 임피던스와 그 반대의 큰 변화로 이어집니다. 내피 세포 종양 세포의 상호 작용이 더 밀접하게 생체 과정에서 모방, 2) 데이터의 실시간 얻을 수있다 : 1)이 기술은 보이든 챔버와 마트 리젤의 분석으로 침략을 측정하는 기존의 방법에 비해 두 가지 이점을 제공합니다 시간과 같은 다른 방법에 대한 엔드 포인트 분석이 아닌, 더 쉽게 정량화 할 수있다.
실시간 HUVEC의 침공 분석은 모니터링 침략을위한 간단하면서도 강력한 방법입니다. 그것은 엔드 포인트 분석에 의존하는 기존의 다른 기술에 비해 상당한 장점입니다 실시간으로 결과를 제공합니다. 분석은 시험 약물, 항체, 리간드와 전이 억제제 또는 촉진제로 단백질을 수정할 수 있습니다. 암 / 내피 세포 간 이야기에 다른 에이전트의 효과뿐만 아니라 평가 될 수있다. 이러한 문화 미디어의 성장 요인과 약물 등 외인성 에이전트를 도입 할 때, 그것은 그들이 HUVEC 단층의 무결성에 영향을주지 않도록하는 것이 중요합니다. HUVEC 단층의 파괴는 세포를 침입의 부재에서 외생 에이전트를 소개하고, 세포 지수의 변화가없는 것을 확인하여 테스트 할 수 있습니다. 따라서, 적절한 제어는 실험 설계의 일부로 포함되어야한다.
그들은 conf의 형태로 다른 세포 라인에서 여러 가지 셀 인덱스 곡선을 보여luent 단층. 곡선뿐만 아니라, 최대 셀 인덱스 달성의 형태는 셀 타입 별입니다. HUVEC 세포의 16-18 시간 후 이상 세포의 인덱스에 다른 안정화 한 다음, 4-6시간 파종 한 후 세포 색인의 평 평화 특성 과도을 보여줍니다. 따라서, 세포가 종양 세포의 추가 전에 적어도 18 시간 동안 합류 단층을 형성하게하는 것이 중요합니다.
세포 지수는 전극 / 세포 계면에서 이온 환경에 의존하기 때문에, 이러한 세포 형태와 세포 간 유착의 품질 등 다양한 요소가 적용 잘 하단의 영역뿐만 아니라, 세포 인덱스에 영향을 미친다. 따라서, 종양 세포의 침략에 발생하는 셀 인덱스의 감소, 내피 세포 접합 및 후속 종양 세포 침공의 철회를 포함 여러 가지 요인의 함수이다.
xCELLigence 악기는 세 가지 다른 구성으로 제작되어 실시간으로 세포 분석기(RTCA) SP, RTCA MP 및 RTCA DP. RTCA MP 악기는 96 – 웰 E-플레이트를 동시에 여섯까지 저장할 수있는 반면 RTCA SP 악기 하나 96 – 웰 E-플레이트를 보유하고 있습니다. 이 마약과 화합물의 높은 처리량 검사 할 수 있습니다. 이 문서에 나와있는 실험은 3 개의 16도 E-접시를 보유 할 수 있습니다 RTCA DP 악기를 사용하여 수행됩니다. 각 E-플레이트 보유 스테이션은 독립적으로 여러 사용자가 동시에 실험을 실행할 수있는 운영 할 수있다. RTCA DP 악기는 또한 CIM 플레이트를 사용하여 마이그레이션을 연구하는 데 사용할 수 있습니다. 이들은 8um의 평균 기공 크기와 폴리에틸렌 테레 프탈레이트 (PET) 막으로 구분 상단 및 하단 챔버 16 – 웰 플레이트입니다. 전자 센서는 상부 챔버의 다공성 멤브레인의 아래쪽에 있습니다. 하부 챔버의 상부 챔버의 세포에 대한 화학 주성을위한 저수지 역할을합니다. 그러나 CIM 플레이트에 HUVEC 침공 분석의 주요 장점은 이전에 종양 세포 침공 전내피 세포의 침공은 종양과 내피 세포 사이의 크로스 토크에 달려들, 기공 크기에 의해 제한되지 않습니다.
HUVEC 침공 분석도 응용 생물 물리학 (트로이, NY)에 의해 제조 ECIS Z 기기에서 수행 할 수 있습니다. ECIS Z 악기 배열 전극 구성의 차이, xCELLigence 악기와 유사한 기술을 사용합니다. 우리는 성공적으로 8 잘 ECIS 배열을 사용하여 HUVEC 침공 분석을 수행했습니다. 2.5 × 10 5 1 X 10 5 세포를 각각 : 그것은 잘 바닥 면적 도금으로 내피와 종양 세포의 큰 숫자를 요구하는 ECIS 배열에있는 큰 점에 유의하는 것이 중요합니다.
The authors have nothing to disclose.
이 작품은 넉넉한 어린이 암 재단 (볼티모어, MD), 브랜든 리 캐링턴 재단 (실버 스프링, MD), DOD (W81XWH-10-1-0137)와 NIH (R01CA108641)에서 기금에 의해 지원되었다.
우리는 박사 안톤 Wellstein과 경험을 공유하고 제시된 방법을 최적화하기 위해 우리를 돕는 그의 실험실의 구성원을 감사드립니다.
Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
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xCELLigence RTCA DP station | Roche | 05469759001 | |
RTCA control unit | Roche | 05454417001 | Notebook with preinstalled RTCA software |
E-Plate 16 | Roche | 05469830001 | |
HUVEC cells | Lonza | CC-2517 | |
EGM-2 media | Lonza | CC-3156 | |
EGM-2 bullet kit | Lonza | CC-4176 | |
0.1% Gelatin in sterile H2O | Millipore | MCPROTO045 |