באמצעות PCR כמותי, אנו מדגימים כיצד המודל ומבוססת חומוס CAM ניתן להשתמש כדי לנתח את כמותית גרורות של תאים סרטניים אנושיים לאיברים רחוקים.
במהלך תאים סרטניים להפיץ גרורות מהגידול הראשוני, לפלוש לתוך הרקמות הסובבות, ומתפשטים לאיברים מרוחקים. גרורה היא תהליך מורכב זה יכול לערב סוגי רקמות רבות, בתקופות משך הזמן משתנה, ולעתים קרובות להתרחש עמוק בתוך איברים, ולכן קשה לחקור ולכמת. בנוסף, יעילות תהליך גרורתי מושפעת שלבים מרובים מפל גרורתית ולכן קשה להעריך את התרומה של היבט אחד של התנהגות תאים סרטניים. כתוצאה מכך, מבחני גרורות מבוצעות לעתים קרובות בחיות מעבדה לספק בהכרח בהקשר מציאותי שבו ללמוד גרורות. למרבה הצער, אלה הם מודלים מורכבים יותר על ידי הפיזיולוגיה המורכבת שלהם. עובר אפרוח הוא מודל ייחודי vivo כי מתגבר על מגבלות רבות ללימוד גרורות, בשל הנגישות של קרום chorioallantoic (רמ"א), היטב vascularized חוץ עובריים רקמות הממוקמת מתחת קליפת כי הוא פתוח xenografting של תאים סרטניים (איור 1). יתר על כן, מאז הוא עובר אפרוח immunodeficient טבעי, CAM בקלות תומך engraftment של רקמות הן נורמליות הגידול. והחשוב מכל, CAM העופות בהצלחה תומך המאפיינים תאים סרטניים ביותר כולל צמיחה, פלישה, אנגיוגנזה, שיפוץ של microenvironment. זה הופך את המודל שימושי במיוחד לצורך חקירה של מסלולים שיובילו גרורות סרטן כדי לחזות את התגובה של סרטן גרורתי כדי הרפוי פוטנציאליים חדשים. זיהוי של תאים המופץ על ידי מינים ספציפיים Alu PCR מאפשרת להעריך כמותית גרורות לאיברים כי הם יישבו על ידי כמה כמו 25 תאים. באמצעות קו קרצינומה האדם Epidermoid תא (HEp3) אנו משתמשים במודל זה כדי לנתח גרורות ספונטנית של תאים סרטניים לאיברים רחוקים, כולל הכבד חומוס ריאות. יתר על כן, באמצעות פרוטוקול Alu-PCR אנו מדגימים את רגישות שחזור של assay ככלי לניתוח לכמת, intravasation מעצר, extravasation, והקולוניזציה כמו אלמנטים בודדים של גרורות.
CAM חומוס שימש במשך עשרות שנים כמודל למערכת ללמוד היבטים שונים של הביולוגיה בסרטן גרורתי התקדמות. הערכה עקרון היכולות גרורתי בוצעו במודל זה על ידי מגוון של קבוצות, כולל ניתוח של תרדמת (אגירה Ghiso et al, 1999;. Ossowski ו רייך, 1983), שיפוץ רקמות (Deryugina et al, 2005;. האן-Dantona . et al,<…
The authors have nothing to disclose.
אנחנו רוצים להכיר טייסון פודס בע"מ עבור בנדיבות לספק את הביציות המופרות. שארמה ארנולד סייעה במהלך הסרטה של פרוטוקול זה. Trenis פאלמר נתמכה על ידי מכוני הבריאות הלאומיים תחת L. רות פרס Kirschstein הלאומית למחקר שירות (F31 המכון הלאומי לסרטן). עבודה זו נתמכה בחלקה על ידי CCSRI גרנט # 700537 כדי JDL NIH ו / NCI מענק # CA120711 ו-01A1-01A1 CA120711 ל AZ.
Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
---|---|---|---|
1X Dulbecco’s Modified Eagle Medium (DMEM) | Invitrogen | 11995073 | |
Dulbecco’s Phosphate-Buffered Saline (D-PBS) (1X), liquid | Invitrogen | 14190250 | pH 7.4 |
Trypsin, 0.05% (1X) with EDTA 4Na, liquid | Invitrogen | 25300054 | |
Sportsman hatcher | Berry Hill | 1550HA | These incubators are some of the most readily available. However, the video will show different equipment. |
Sportsman incubator | Berry Hill | 1502EA | |
Dremel rotary tool | Dremel | ||
Dremel cutoff wheels no. 36 | Dremel | 409 | |
Portable Pipette Aid | Fisher | 1368115E | |
Cotton Tipped Applicators | Fisher | 23-400-001) | |
Fertilized Eggs | Various | Many different vendor can be used. The eggs should be approximately 35-55 grams. The hens that lays them should be between 36 and 55 weeks of age. | |
Hemocytometer | Hausser Scientific, VWR | 15170-090 | |
Fiber-optic microscope illuminator | Amscope | HL250-AY | 150W |
25 gauge needle | |||
Sybr Green Extract–N-Amp Tissue PCR Kit | Sigma-Aldrich | XNATRG |