Kuş Embriyo Model kullanarak Kanser metastaz Kantitatif Analiz
Summary
Kantitatif PCR kullanarak, köklü civciv CAM modeli, uzak organlara insan tümör hücreleri metastaz kantitatif analiz etmek için nasıl kullanılabileceğini göstermektedir.
Abstract
Primer tümörün metastaz kanser hücrelerinin yayılmasını sırasında, işgal, çevre dokulara ve uzak organlara yayılabilir. Metastaz, birçok doku tipleri, a değişken zaman dilimlerinde, içerir ve genellikle zor araştırmak ve ölçmek için, organların içinde derin meydana karmaşık bir süreçtir. Buna ek olarak, metastatik sürecinin etkinliği zor tümör hücre davranışı tek bir yönü katkısını değerlendirmektir metastatik kaskad birden fazla adımlar etkilenir. Bunun bir sonucu olarak, metastaz testlerin sık metastaz çalışma mutlaka gerçekçi bir bağlam sağlamak için deney hayvanlarında yapılmaktadır. Ne yazık ki, bu modellerin daha da kompleks fizyolojisi karmaşıktır. Civciv embriyo chorioallantoic membran (CAM), tümör hücrelerinin xenografting alıcı kabuğu altında bulunan iyi vaskülarize ekstra embriyonik doku erişilebilirlik nedeniyle eşsiz bir metastaz okuyan birçok sınırlamalar üstesinden in vivo modeldir. (Şekil 1). Ayrıca, doğal civciv embriyo immünyetmezligi beri, CAM kolayca engraftman hem normal ve tümör dokularının destekler. En önemlisi, kuş CAM başarıyla büyüme, istila, anjiyogenez ve mikroçevresinin itilme dahil olmak üzere birçok kanser hücresi özellikleri destekler. Bu kanser metastazı yol ve yeni potansiyel terapötikler metastatik kanser cevabı tahmin etmek yollarının araştırılması için model son derece yararlı hale getirir. Türlerin belirli Alu PCR yaygın hücrelerinin algılama kantitatif 25 hücreleri gibi birkaç kişi tarafından kolonize organlarda metastaz değerlendirmek için mümkün kılar. İnsan Epidermoid Karsinomu hücre hattı (HEp3) kullanarak kanser hücrelerinin spontan civciv karaciğer ve akciğer gibi uzak organlara metastaz analiz etmek için bu modeli kullanın. Ayrıca, Alu-PCR protokolü kullanılarak testin duyarlılığı ve tekrarlanabilirlik intravasation, tutuklama, ekstravazasyon ve kolonizasyon metastaz bireysel unsurları olarak analiz etmek ve ölçmek için bir araç olarak göstermektedir.
Protocol
Discussion
Civciv CAM kanser biyolojisi ve metastatik ilerlemesi çeşitli yönlerini incelemek için bir model sistem olarak on yıllardır kullanılmaktadır. Dormansi analizi de dahil olmak üzere çeşitli gruplar tarafından bu modelde, metastatik yetenekleri Prensibi değerlendirme yapılmıştır (Aguirre Ghiso ve ark, 1999; Ossowski ve Reich, 1983), doku yeniden yapılanma (Deryugina ve ark, 2005; Hahn- DANTONA ve ark, 1999) ve metastaz (Zijlstra ve ark, 2008; Zijlstra ve ark, 2…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Biz cömertçe döllenmiş yumurta sağlamak için Tyson Foods Inc tanımak istiyorum. Shanna Arnold, bu protokolün çekimler sırasında etkili oldu. Trenis Palmer Ruth L. Kirschstein Ulusal Araştırma Hizmet Ödülü (F31 National Cancer Institute) altında Ulusal Sağlık Enstitüleri tarafından desteklenmiştir. Bu çalışma kısmen CCSRI Hibe # 700.537 JDL ve NIH / NCI hibe # CA120711-01A1 ve AZ CA120711-01A1 tarafından desteklenmiştir.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
|---|---|---|---|
| 1X Dulbecco’s Modified Eagle Medium (DMEM) | Invitrogen | 11995073 | |
| Dulbecco’s Phosphate-Buffered Saline (D-PBS) (1X), liquid | Invitrogen | 14190250 | pH 7.4 |
| Trypsin, 0.05% (1X) with EDTA 4Na, liquid | Invitrogen | 25300054 | |
| Sportsman hatcher | Berry Hill | 1550HA | These incubators are some of the most readily available. However, the video will show different equipment. |
| Sportsman incubator | Berry Hill | 1502EA | |
| Dremel rotary tool | Dremel | ||
| Dremel cutoff wheels no. 36 | Dremel | 409 | |
| Portable Pipette Aid | Fisher | 1368115E | |
| Cotton Tipped Applicators | Fisher | 23-400-001) | |
| Fertilized Eggs | Various | Many different vendor can be used. The eggs should be approximately 35-55 grams. The hens that lays them should be between 36 and 55 weeks of age. | |
| Hemocytometer | Hausser Scientific, VWR | 15170-090 | |
| Fiber-optic microscope illuminator | Amscope | HL250-AY | 150W |
| 25 gauge needle | |||
| Sybr Green Extract–N-Amp Tissue PCR Kit | Sigma-Aldrich | XNATRG |
References
- Ghiso, A. g. u. i. r. r. e., Kovalski, J. A., K, ., Ossowski, L. Tumor dormancy induced by downregulation of urokinase receptor in human carcinoma involves integrin and MAPK signaling. J Cell Biol. 147, 89-104 (1999).
- Chambers, A. F., Shafir, R., Ling, V. A model system for studying metastasis using the embryonic chick. Cancer research. 42, 4018-4025 (1982).
- Chambers, A. F., Wilson, S. M., Tuck, A. B., Denhardt, G. H., Cairncross, J. G. Comparison of metastatic properties of a variety of mouse, rat, and human cells in assays in nude mice and chick embryos. In Vivo. 4, 215-219 (1990).
- Deryugina, E. I., Zijlstra, A., Partridge, J. J., Kupriyanova, T. A., Madsen, M. A., Papagiannakopoulos, T., Quigley, J. P. Unexpected effect of matrix metalloproteinase down-regulation on vascular intravasation and metastasis of human fibrosarcoma cells selected in vivo for high rates of dissemination. Cancer Res. 65, 10959-10969 (2005).
- Hahn-Dantona, E., Ramos-DeSimone, N., Sipley, J., Nagase, H., French, D. L., Quigley, J. P. Activation of proMMP-9 by a plasmin/MMP-3 cascade in a tumor cell model. Regulation by tissue inhibitors of metalloproteinases. Ann N Y Acad Sci. 878, 372-387 (1999).
- Kim, J., Yu, W., Kovalski, K., Ossowski, L. Requirement for specific proteases in cancer cell intravasation as revealed by a novel semiquantitative PCR-based assay. Cell. 94, 353-362 (1998).
- Leong, H. S., Steinmetz, N. F., Ablack, A., Destito, G., Zijlstra, A., Stuhlmann, H., Manchester, M., Lewis, J. D. Intravital imaging of embryonic and tumor neovasculature using viral nanoparticles. Nat Protoc. 5, 1406-1417 (2010).
- Lewis, J. D., Destito, G., Zijlstra, A., Gonzalez, M. J., Quigley, J. P., Manchester, M., Stuhlmann, H. Viral nanoparticles as tools for intravital vascular imaging. Nat Med. 12, 354-360 (2006).
- Ossowski, L., Reich, E. Changes in malignant phenotype of a human carcinoma conditioned by growth environment. Cell. 33, 323-333 (1983).
- Schmittgen, T. D., Livak, K. J. Analyzing real-time PCR data by the comparative C(T) method. Nat Protoc. 3, 1101-1108 (2008).
- Testa, J. E., Brooks, P. C., Lin, J. M., Quigley, J. P. Eukaryotic expression cloning with an antimetastatic monoclonal antibody identifies a tetraspanin (PETA-3/CD151) as an effector of human tumor cell migration and metastasis. Cancer Res. 59, 3812-3820 (1999).
- Zijlstra, A., Lewis, J., Degryse, B., Stuhlmann, H., Quigley, J. P. The Inhibition of Tumor Cell Intravasation and Subsequent Metastasis via Regulation of In Vivo Tumor Cell Motility by the Tetraspanin CD151. Cancer Cell. 13, 221-234 (2008).
- Zijlstra, A., Mellor, R., Panzarella, G., Aimes, R. T., Hooper, J. D., Marchenko, N. D., Quigley, J. P. A quantitative analysis of rate-limiting steps in the metastatic cascade using human-specific real-time polymerase chain reaction. Cancer Res. 62, 7083-7092 (2002).
