نحن هنا وصف شاشة overexpression في البلازميد<em> السكيراء الجعوية</em> ، وذلك باستخدام مكتبة المحتشدة البلازميد والتحول خميرة بروتوكول عالية الإنتاجية مع الروبوت مناولة السائل.
الخميرة في مهدها ، السكيراء البيرة ، هو نموذج النظام قوية لتحديد الآليات الأساسية لكثير من العمليات الخلوية الهامة ، بما فيها تلك التي لها صلة مباشرة الأمراض التي تصيب البشر. لأن من وقته قصير والجيل جيدا اتسم الجينوم ، ميزة كبيرة التجريبية لنظام الخميرة النموذج هو القدرة على أداء شاشات الجينية لتحديد الجينات والمسارات التي تشارك في عملية معينة. على مدى السنوات الثلاثين الماضية قد استخدمت مثل هذه الشاشات الجينية لاستجلاء دورة الخلية ، ومسار إفرازية ، والعديد من الجوانب الأكثر حفظا للغاية من بيولوجيا الخلايا حقيقية النواة 1-5. في السنوات القليلة الماضية ، تم إنشاء العديد من المكتبات genomewide سلالات الخميرة والبلازميدات 6-10. هذه المجموعات تسمح الآن للاستجواب المنهجي للحصول على وظائف الجينات باستخدام والخسارة من وظيفة نهج 11-16. هنا نقدم بروتوكول مفصلة لاستخدام بروتوكول خميرة التحول عالية الإنتاجية مع الروبوت مناولة السائل لأداء شاشة overexpression البلازميد ، وذلك باستخدام مكتبة المحتشدة من الخميرة البلازميدات 5500. لقد تم استخدام هذه الشاشات لتحديد معدلات السمية الوراثية المرتبطة تراكم تجميع البروتينات البشرية المعرضة للمرض الاعصاب. الأساليب المقدمة هنا هي قابلة للتكيف بسهولة لدراسة الظواهر الخلوية الأخرى ذات الاهتمام.
هنا نطرح على بروتوكول لتنفيذ عالية الإنتاجية الشاشة overexpression البلازميد في الخميرة. هذا النهج يسمح للفحص السريع وغير منحازة عن المعدلات الوراثية للكثير من الظواهر الخلوية المختلفة. باستخدام هذا النهج ، يمكن للباحث الشاشة جزء كبير من الجينوم الخميرة في غضون أسابيع. هذ…
The authors have nothing to disclose.
وأيد هذا العمل من خلال منحة من مركز للبحوث باكارد ALS في جامعة جونز هوبكنز (المدير العام المساعد) ، وجائزة من مدير المعاهد الوطنية للصحة ومبتكر جديد 1DP2OD004417 – 01 (المدير العام المساعد) ، NIH R01 NS065317 (المدير العام المساعد) ، وجائزة الباحث ألن ريتا المؤسسة. مساعد المدير العام لمركز بيو باحثة في العلوم الطبية الحيوية ، وبدعم من صناديق بيو الخيرية.
Name of reagent | Company | Catalog number |
---|---|---|
BioRobot RapidPlate | Qiagen | 9000490 |
96 bolt replicator (frogger) | V&P Scientific | VP404 |
FLEXGene ORF Library | Institute of Proteomics, Harvard Medical School | |
Tabletop centrifuge | Eppendorf | 5810R |
500mL baffled flask | Bellco | 2543-00500 |
2.8L triple-baffled Fernbach flask | Bellco | 2551-02800 |
100μL Rapidplate pipette tips | Axygen | ZT-100-R-S |
200μL Rapidplate pipette tips | Axygen | ZT-200-R-S |