A arborização dendrítica de neurônios sensoriais da<em> Drosophila</em> Sistema periférico larval nervoso são modelos úteis para elucidar tanto gerais como neurônio específico de classe mecanismos de diferenciação de neurônios. Nós apresentamos um guia prático para gerar e analisar arborização dendrítica mosaicos neurônio genética.
Desenvolvimento do sistema nervoso requer a especificação correta de neurônio posição e identidade, seguido por desenvolvimento precisa dendríticas do neurônio específico de classe e fiação axonal. Recentemente, a arborização dendrítica (DA) neurônios sensoriais da larval Drosophila sistema nervoso periférico (SNP) tornaram-se poderosos modelos genéticos em que para elucidar os mecanismos gerais e específicas de classe de diferenciação neuronal. Há quatro principais classes DA neurônio (I-IV) 1. Eles são nomeados em ordem crescente de complexidade arbor dendrite, e têm diferenças de classe específica no controle genético da sua diferenciação 2-10. O sistema DA sensorial é um modelo prático para investigar os mecanismos moleculares por trás do controle da morfologia dendrítica 13/11 porque: 1) pode aproveitar as poderosas ferramentas genéticas disponíveis na mosca da fruta, 2) o neurônio DA dendrite arbor se espalha em apenas duas dimensões sob uma ótica clear cutícula larval tornando-o fácil de visualizar com alta resolução in vivo, 3) a diversidade de classe específico em morfologia dendrítica facilita uma análise comparativa para encontrar elementos-chave controlando a formação de simples contra altamente ramificados árvores dendríticas, e 4) arbor dendríticas estereotipada formas diferentes de neurônios DA facilitar morfométricas análises estatísticas.
DA atividade do neurônio modifica a saída de um gerador de padrão larval locomoção centrais 14-16. As diferentes classes de DA neurônio têm distintas modalidades sensoriais, e sua ativação provoca diferentes respostas comportamentais 14,16-20. Além disso diferentes classes de enviar projeções stereotypically axonal no sistema central de Drosophila larval nervoso no cordão nervoso ventral (VNC) 21. Essas projeções terminar com representações topográficas dos dois modalidade neurônio sensorial e DA a posição na parede do corpo do campo dendríticas 7,22De 23. Por isso o exame de projeções DA axonal pode ser usado para elucidar os mecanismos subjacentes mapeamento topográfico 7,22,23, bem como a fiação de um circuito simples locomoção larval modulando 14-17.
Nós apresentamos aqui um guia prático para gerar e analisar mosaicos genéticos 24 neurônios marcação DA via MARCM (Análise Mosaic com um marcador de células repressor) 1,10,25 e FLP-out 22,26,27 técnicas (resumidos na Figura 1.).
A Drosophila larval DA modelo de neurônio fornece um excelente sistema genético para investigar os mecanismos de controle que a morfologia dos neurônios ea formação do circuito. MARCM é geralmente utilizada para rotulagem e para a geração de clones mutantes DA neurônio. Para MARCM que usar uma pan-neural (por exemplo Gal4 C155) ou DA motorista neurônio-específica. Usando um driver de pan-neural é possível usar diretamente diversas unidades populacionais amplamente dispon…
The authors have nothing to disclose.
Os autores agradecem RIKEN para financiamento. Agradecemos também Cagri Yalgin, Caroline Delandre, e Jay Parrish para discussões sobre protocolos de genética e imuno-histoquímica.
Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
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SZX16 fluorescence dissection microscope (with GFPHQ filter) | Olympus | SZX16 | |
Live Insect Forceps | FST | 26030-10 | |
26mm x 76mm depression slide glass | Toshinriko Co. | T8-R004 | |
Sylgard 184 (or Silpot 184) | Dow Corning | 3097358-1004 | |
Poly-L-lysine | Sigma | P-1524 | This product has proven most effective |
DPX mounting medium | Sigma | 44581 | |
Rabbit anti-GFP | Invitrogen | A-11122 | Dilution 1:500 |
Rat anti-CD8 | Caltag | 5H10 | Dilution 1:200 |
Mouse anti-CD2 | AbD serotec | MCA443R | Dilution 1:700 |
Mouse anti-Fasciclin2 | DSHB | 1D4 | Dilution 1:10 |