Injeção intravítrea é uma técnica amplamente utilizada na pesquisa em ciências visuais para doenças oculares ou como a aplicação direta do tratamento local. Este vídeo demonstra um protocolo para a injeção intravítrea usando uma seringa de 1ml com vidro pipeta. Dicas úteis sobre como evitar sangramento maciço e danos lentes são dadas.
Abstract
Injeção intravítrea é uma técnica amplamente utilizada na pesquisa em ciências visuais. Ele pode ser usado para estabelecer modelos animais com doenças oculares ou como a aplicação direta do tratamento local. Este vídeo apresenta como usar ferramentas simples e baratas para terminar o procedimento de injeção intravítrea. Uso de uma seringa de 1 ml, em vez de uma seringa hemilton, é usado. Dicas práticas de como fazer agulhas de injeção apropriada usando pipetas de vidro com pontas perfeitas, e como facilmente se conectar a agulha da seringa com a pipeta de vidro bem juntos, são dadas.
Para realizar uma boa injeção intravítrea, há três aspectos a serem observados: 1) no local da injecção não deve atrapalhar estrutura retina; 2) sangramento devem ser evitados para reduzir o risco de infecção; 3) lente deve ser intocável para evitar a catarata traumática. Em resumo, o ponto mais importante é reduzir a interrupção da estrutura ocular normal. Para evitar a interrupção da retina, a região nasal superior do olho de rato foi escolhido. Além disso, o ponto de punção da agulha estava no planar par, que foi cerca de 1,5 mm do limbo na região do olho de rato. Uma pequena quantidade de vítreo é delicadamente empurrado para fora através do orifício da punção para reduzir a pressão intra-ocular antes da injeção. Com o ângulo de injeção de 45 °, é menos provável de causar catarata traumática no olho do rato, evitando assim complicações relacionadas e influência de fatores lenticular. Nesta operação, não houve corte do músculo conjuntiva ocular e, sem sangramento. Com lesão rápido e menor, uma injeção intravítrea de sucesso pode ser feito em minutos.
A injeção set descritas neste protocolo específico é específico para injeção intravítrea. No entanto, os métodos e materiais aqui apresentados também podem ser usados para outros procedimentos de injecção na entrega da droga para o cérebro, medula espinhal ou em outros órgãos pequenos mamíferos.
Protocol
Prepare as pipetas de vidro usando extrator pipetas, conectá-lo a uma seringa de 1ml, e selar a conexão com parafilme. Retirar 2 ml de solução na ponta das pipetas e prepare-se para a injecção. Anestesiar o rato por injeção intra-peritoneal de cetamina (80mg/kg) e xilazina (8mg/kg) (relação de volume de 2:1). Aplique uma gota de Alcaine 0,5% para os olhos de ratos como anestésicos tópicos antes da injeção intravítrea. Posicione o rato e expor a região nasal superior do olho. Use u…
Discussion
Injeção intravítrea bom é útil para estabelecer um modelo animal, bem como o tratamento intra-ocular directa. Primeiro, no local da injecção não deve perturbar a estrutura retina. Sangramento, segundo devem ser evitados para reduzir o risco de infecção. Lente, o terceiro deve ser intocável para evitar a catarata traumática. O mais importante é reduzir a interrupção da estrutura ocular normal.
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
O estudo do glaucoma neste laboratório é apoiado pela National Research Glaucoma da Fundação Americana de Saúde Adjunto.