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Biology

Injeção intravítrea para o Estabelecimento de Modelo de Doenças Ocular

doi: 10.3791/313 Published: October 1, 2007

Summary

Injeção intravítrea é uma técnica amplamente utilizada na pesquisa em ciências visuais para doenças oculares ou como a aplicação direta do tratamento local. Este vídeo demonstra um protocolo para a injeção intravítrea usando uma seringa de 1ml com vidro pipeta. Dicas úteis sobre como evitar sangramento maciço e danos lentes são dadas.

Abstract

Injeção intravítrea é uma técnica amplamente utilizada na pesquisa em ciências visuais. Ele pode ser usado para estabelecer modelos animais com doenças oculares ou como a aplicação direta do tratamento local. Este vídeo apresenta como usar ferramentas simples e baratas para terminar o procedimento de injeção intravítrea. Uso de uma seringa de 1 ml, em vez de uma seringa hemilton, é usado. Dicas práticas de como fazer agulhas de injeção apropriada usando pipetas de vidro com pontas perfeitas, e como facilmente se conectar a agulha da seringa com a pipeta de vidro bem juntos, são dadas.

Para realizar uma boa injeção intravítrea, há três aspectos a serem observados: 1) no local da injecção não deve atrapalhar estrutura retina; 2) sangramento devem ser evitados para reduzir o risco de infecção; 3) lente deve ser intocável para evitar a catarata traumática. Em resumo, o ponto mais importante é reduzir a interrupção da estrutura ocular normal. Para evitar a interrupção da retina, a região nasal superior do olho de rato foi escolhido. Além disso, o ponto de punção da agulha estava no planar par, que foi cerca de 1,5 mm do limbo na região do olho de rato. Uma pequena quantidade de vítreo é delicadamente empurrado para fora através do orifício da punção para reduzir a pressão intra-ocular antes da injeção. Com o ângulo de injeção de 45 °, é menos provável de causar catarata traumática no olho do rato, evitando assim complicações relacionadas e influência de fatores lenticular. Nesta operação, não houve corte do músculo conjuntiva ocular e, sem sangramento. Com lesão rápido e menor, uma injeção intravítrea de sucesso pode ser feito em minutos.

A injeção set descritas neste protocolo específico é específico para injeção intravítrea. No entanto, os métodos e materiais aqui apresentados também podem ser usados ​​para outros procedimentos de injecção na entrega da droga para o cérebro, medula espinhal ou em outros órgãos pequenos mamíferos.

Protocol

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  1. Prepare as pipetas de vidro usando extrator pipetas, conectá-lo a uma seringa de 1ml, e selar a conexão com parafilme. Retirar 2 ml de solução na ponta das pipetas e prepare-se para a injecção.
  2. Anestesiar o rato por injeção intra-peritoneal de cetamina (80mg/kg) e xilazina (8mg/kg) (relação de volume de 2:1).
  3. Aplique uma gota de Alcaine 0,5% para os olhos de ratos como anestésicos tópicos antes da injeção intravítrea.
  4. Posicione o rato e expor a região nasal superior do olho.
  5. Use uma agulha de calibre 30 para perfurar a esclera nasal superior ao nível do par plana. Evite tocar o músculo ocular e vasos.
  6. Dê a pressão do globo ocular leve para se livrar de uma pequena quantidade de vítreo através do orifício de punção da câmara posterior.
  7. Insira a ponta da pipeta de vidro através do orifício de punção em um ângulo de 45 ° através da esclera no corpo vítreo. Injetar 2 ml de solução para a câmara posterior e manter no local durante cerca de alguns segundos, em seguida, remova cuidadosamente a agulha. Evite tocar na lente e vasos intra-ocular.
  8. Após a injeção intravítrea, aplique pomada oftálmica Tobrex sobre os olhos de ratos para prevenir a infecção.

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Discussion

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Injeção intravítrea bom é útil para estabelecer um modelo animal, bem como o tratamento intra-ocular directa. Primeiro, no local da injecção não deve perturbar a estrutura retina. Sangramento, segundo devem ser evitados para reduzir o risco de infecção. Lente, o terceiro deve ser intocável para evitar a catarata traumática. O mais importante é reduzir a interrupção da estrutura ocular normal.

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Disclosures

Os animais foram tratados de acordo com o protocolo para o uso de animais em pesquisa aprovado pelo Comitê sobre o Uso de Animais Vivos em Ensino e Pesquisa (CULATR) da Universidade de Hong Kong e da Associação para Pesquisa em Visão e Oftalmologia Demonstrações para o uso de animais em oftálmica e Vision Research.

Acknowledgments

O estudo do glaucoma neste laboratório é apoiado pela National Research Glaucoma da Fundação Americana de Saúde Adjunto.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Operating Microscope Olympus Corporation OME
Glass Pipettes World Precision Instruments, Inc.
Pipette Puller David Kopf Instruments
1ml syringes single use
30G needles single use
Ketamine Aldasan anesthetic
Xylazine Aldasan anesthetic
Alcaine Alcon 0.5% proparacaine hydrochloride
Tobrex Alcon ointment, 3% tobramyxin.

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Chiu, K., Lam, T. T., Ying Ku, W. W., Caprioli, J., Kwong Kwong, J. M. Calpain and N-methyl-d-aspartate (NMDA)-induced excitotoxicity in rat retinas. Brain Research. 1046, 207-215 (2005).
  2. Fisher, D., Pavlidis, M., Thanos, S. Cataractogenic lens injury prevents traumatic ganglion cell death and promotes axonal regeneration both in vivo and in culture. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 41, 3943-3954 (2000).
  3. Ji, J. -Z., Elyaman, W., Yip, H. K., Lee, V. W. H., Yick, L. -W., Hugon, J., So, K. -F. CNTF promotes survival of retinal ganglion cells after induction of ocular hypertension in rats: the possible involvement of STAT3 pathway. European Journal of Neuroscience. 19, 265-272 (2004).
  4. Lam, T. T., Abler, A. S., Kwong, J. M. K., Tso, M. O. M. N-Methyl-D-Aspartate (NMDA)-Induced Apoptosis in Rat Retina. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 40, 2391-2397 (1999).
Injeção intravítrea para o Estabelecimento de Modelo de Doenças Ocular
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Chiu, K., Chang, R. C., So, K. Intravitreous Injection for Establishing Ocular Diseases Model. J. Vis. Exp. (8), e313, doi:10.3791/313 (2007).More

Chiu, K., Chang, R. C., So, K. Intravitreous Injection for Establishing Ocular Diseases Model. J. Vis. Exp. (8), e313, doi:10.3791/313 (2007).

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