Summary
Protocol
NIH3T3 الخلايا التحضير :
ألف لخلايا الطرد
- يعرض للتريبسين الخلايا ، ثم تمييع 01:01 الخلية مع وسائل الاعلام ، ونقل من القارورة إلى T75 أنبوب 15 مل فالكون
- تدور باستمرار إلى الخلايا بواسطة الطرد المركزي بيليه ، نضح طاف وغسل الخلايا مع DPBS
- تدور أسفل الخلايا في بيليه مرة أخرى ، ونضح طاف
- Resuspend الخلايا في وسائل الإعلام
- تحديد كثافة الخلية مع عدادة الكريات (~ 200 X 10 4 خلايا / مل في القارورة T75)
- الطرد المركزي حل الخلية ، نضح طاف ، وresuspend في كمية مناسبة من وسائل الإعلام لتركيزات مختلفة الخلية
باء طرد الخليوي
- قبل استخدام الخلايا دوامة لطرد
- نقل 200 ميكرولتر من محلول الخلية إلى حقنة
- تعيين وضع المناسبة على مولد النبض
- لإخراج واحدة قطرات قطرات متعددة (رشقات نارية) ، تعيين مولد النبض إلى "هاء BUR" واسطة
- لطرد قطرات متواصلة ، مجموعة المولدات النبض إلى وضع "القاعدة"
- تغيير إعدادات إشارة
- تعيين مستوى ارتفاع وانخفاض مستوى الناتج الجهد : HIL إلى 5 والخامس LOL إلى 0 الخامس وتأكد من أن "LIM" على الصمام
- تعيين إشارة إلى نبضة مربعة
- تغيير مقدار الوقت اللولبي صمام مفتوح لطرد قطرات عن طريق تغيير قيمة عن "دور المرأة في التنمية" أو تغيير دورة العمل ("واجب")
- تغير وتيرة طرد عن طريق تغيير قيمة "لكل"
- تغيير عدد من قطرات في انفجار طرد عن طريق تغيير قيمة "بور"
- إخراج حل الخلية على الركيزة التي أعدت للتصوير مع المجهر
جيم يلطخ
- تشكل محلول الصبغة مع 0.5 ميكرولتر calcein - AM و 2 لكل ميكرولتر homodimer إيثيديوم مل من DPBS
- تزج الركيزة أعد في محلول الصبغة
- السماح لاحتضان عينة لمدة 10 دقيقة عند 37 درجة مئوية قبل التصوير
التجربة التحقق من صحة
- على مجهر الكسوف نيكون U TE - 2000 نيون
- بقعة البرامج المتقدمة (التشخيص ، المؤتمر الوطني العراقي)
- أعيش / الفحص الميت
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Type | Company | Catalog Number | Comments |
| Fluorescent Microscope | Nikon Instruments | Eclipse TE-2000 U | ||
| Solenoid valve cell ejector | Operation frequency: 1 KHz, 30psi, 50nl~0.5ul. 12V Valve Driver: 2.5 Amp drive current | |||
| 5-Gallon Portable air tank | Coleman | Powermate CT5 | Pressurized air: 30 PSI | |
| Pressure regulators | Marsh Bellofram | |||
| Pulse Generator | HP8112A | Actuation frequency generation: 50 MHz | ||
| XYZ-stage | Newmark Systems | With Stepping motor: 6inch travel xy-stage(NLS4-6-25), 2.5inch travel z-stage(NLS4-2.5-25), 3axis controller(NSC-G3), 0.1um resolution | ||
| NIH 3T3 | Cell-line | fibroblasts | ||
| Trypsin | 0.05% solution | |||
| NIH 3T3 cell medium | ||||
| DPBS | Buffer | |||
| T75 | Tissue culture flasks | |||
| Plastic conical tubes | 15 ml, for tissue culture |
