Summary
Protocol
NIH3T3細胞の準備：
イジェクト用A.セル
- 細胞をトリプシン処理し、細胞培地で1:1に希釈し、T75フラスコから15mlのファルコンチューブに移す
- 遠心分離によってペレットに細胞をスピンダウン、上清を吸引し、DPBSで細胞を洗浄
- 再びペレットに細胞をスピンダウンし、上清を吸引除去する
- メディアに懸濁し
- 血球計（〜200 T75フラスコあたりのX 10 4細胞/ mL）で細胞密度を決定する
- 、細胞溶液を遠心上清を吸引除去し、細胞濃度を変化させるためのメディアの適切な量で再懸濁します。
B.セルの取り出し
- 取り出しのために使用する前に渦細胞
- シリンジに細胞溶液200μLを転送する
- パルス発生器で適切なモードを設定します。
- イジェクト単一の液滴と、複数の液滴のために（バースト）、"E. BUR"モードにパルスジェネレータを設定する
- 連続的な液滴の吐出の場合は、"NORM"モードにパルスジェネレータを設定する
- 信号の設定を変更する
- ハイレベルとローレベルの出力電圧を設定する：5 VまでとLOL 0 VにHILと"LIM"LEDが点灯していることを確認してください
- 方形パルスとして信号を設定します。
- （"DUTY"）電磁弁は、"WID"の値を変更するか、デューティサイクルを変更することにより、液滴吐出用に開いている時間の量を変更
- "PER"の値を変更することにより、放出の周波数を変更する
- "BUR"の値を変更することにより、バーストで放出された液滴の数を変更する
- 顕微鏡でイメージングするため、プリペアド基板上に細胞液を取り出します
C.染色
- DPBSのmL当たり0.5μLカルセイン- AM、2μLのエチジウムホモ二量体と色素溶液を作る
- 色素溶液に浸します調製した基質
- サンプルは37℃で10分間インキュベートすることができます·イメージングの前にC
実験の検証
- ニコンのEclipse TE - 2000 U蛍光顕微鏡で
- スポット高度なソフトウェア（診断、（株））
- LIVE / DEADアッセイ
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Materials
| Name | Type | Company | Catalog Number | Comments |
| Fluorescent Microscope | Nikon Instruments | Eclipse TE-2000 U | ||
| Solenoid valve cell ejector | Operation frequency: 1 KHz, 30psi, 50nl~0.5ul. 12V Valve Driver: 2.5 Amp drive current | |||
| 5-Gallon Portable air tank | Coleman | Powermate CT5 | Pressurized air: 30 PSI | |
| Pressure regulators | Marsh Bellofram | |||
| Pulse Generator | HP8112A | Actuation frequency generation: 50 MHz | ||
| XYZ-stage | Newmark Systems | With Stepping motor: 6inch travel xy-stage(NLS4-6-25), 2.5inch travel z-stage(NLS4-2.5-25), 3axis controller(NSC-G3), 0.1um resolution | ||
| NIH 3T3 | Cell-line | fibroblasts | ||
| Trypsin | 0.05% solution | |||
| NIH 3T3 cell medium | ||||
| DPBS | Buffer | |||
| T75 | Tissue culture flasks | |||
| Plastic conical tubes | 15 ml, for tissue culture |
