Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Biology

Encapsulation título celular por Droplets

doi: 10.3791/316 Published: October 1, 2007

Summary

Protocol

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

NIH3T3 preparação células:

Células de A. de ejeção

  1. Trypsinize células, então diluir 1:1 com media de células, e transferência de um frasco T75 para um tubo Falcon 15 mL
  2. Spin down células em um pellet por centrifugação, aspirar o sobrenadante e lavar as células com DPBS
  3. Spin down células em uma pelota de novo, e aspirar o sobrenadante
  4. Ressuspender as células em meios de comunicação
  5. Determinar a densidade de células com hemocitômetro (~ 200 X 10 4 células / mL por frasco T75)
  6. Solução da célula centrífuga, aspirar o sobrenadante e ressuspender em quantidade adequada dos meios de comunicação para diferentes concentrações de células

B. Célula de ejeção

  1. Vortex células antes de usar para a ejeção
  2. Transferir 200 mL da solução de célula em seringa
  3. Definir o modo apropriado no gerador de pulso
    1. Para ejetar gotículas de única e gotículas múltiplas (rajadas), grupo gerador de pulso para "E. BUR" modo
    2. Para a ejeção de gotas contínuo, grupo gerador de pulso para "NORM" modo de
  4. Alterar as configurações de sinal
    1. Conjunto de alto nível e baixo nível de tensão de saída: LIS a 5 V e LOL para 0 V e certifique-se o "LIM" LED está ligado
    2. Definir como um sinal de pulso quadrado
    3. Alterar a quantidade de tempo que a válvula solenóide é aberta para a ejeção de gotas, alterando o valor para "WID" ou mudar ciclo ("dever")
    4. Mudar a freqüência de ejeção, alterando o valor para "PER"
    5. Alterar o número de gotículas ejetado em uma explosão, alterando o valor para "BUR"
  5. Solução da célula ejetar em substrato preparado para imagens com microscópio

Coloração C.

  1. Compõem solução corante com 0,5 mL calceína-AM e 2 homodímero de etídio mL por mL de DPBS
  2. Substrato preparado mergulhe em solução corante
  3. Deixar a amostra para incubar por 10 minutos a 37 ° C antes de imagem

Validação de experiência

  1. Em um microscópio Nikon Eclipse TE U-2000 Fluorescent
    1. Software ponto avançado (Diagnostics, Inc.)
    2. Live / Morto Assay

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Materials

Name Type Company Catalog Number Comments
Fluorescent Microscope Nikon Instruments Eclipse TE-2000 U
Solenoid valve cell ejector Operation frequency: 1 KHz, 30psi, 50nl~0.5ul. 12V Valve Driver: 2.5 Amp drive current
5-Gallon Portable air tank Coleman Powermate CT5 Pressurized air: 30 PSI
Pressure regulators Marsh Bellofram
Pulse Generator HP8112A Actuation frequency generation: 50 MHz
XYZ-stage Newmark Systems With Stepping motor: 6inch travel xy-stage(NLS4-6-25), 2.5inch travel z-stage(NLS4-2.5-25), 3axis controller(NSC-G3), 0.1um resolution
NIH 3T3 Cell-line fibroblasts
Trypsin 0.05% solution
NIH 3T3 cell medium
DPBS Buffer
T75 Tissue culture flasks
Plastic conical tubes 15 ml, for tissue culture

DOWNLOAD MATERIALS LIST

Encapsulation título celular por Droplets
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Moon, S., Lin, P., Keles, H. O., Yoo, S., Demirci, U. Title Cell Encapsulation by Droplets. J. Vis. Exp. (8), e316, doi:10.3791/316 (2007).More

Moon, S., Lin, P., Keles, H. O., Yoo, S., Demirci, U. Title Cell Encapsulation by Droplets. J. Vis. Exp. (8), e316, doi:10.3791/316 (2007).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
simple hit counter