一个6-OHDA单侧病变,内侧前脑束对小鼠进行的协议说明。该方法具有低死亡率与89%的幸存的动物> 95%的损失纹状体多巴胺和90.63率(13.3%)±-4.02%ipsiversive旋转对病灶侧的偏见。
单方面损毁6 hyroxydopamine(6 – 羟基多巴胺),损毁帕金森病大鼠模型(PD)的已证实到是在推进我们基本巴金森氏症症状的机制的理解非常宝贵的,因为它概括在基底神经节电路的变化和药理学观察中帕金森患者1-4。然而,在纹状体内的输出途径,这是基底节的主要输入地区的皮质纹状体突触发生的确切的细胞和分子的变化仍然是难以捉摸的,这被认为是网站,在这里出现潜在的帕金森病症状的病理异常5。
在PD,了解基底节电路以下尼格罗 – 纹状体通路变性的变化机制已大大提前过度表达绿色荧光蛋白,通过促进推动发展由细菌人工染色体(BAC)的小鼠RS具体纹状体两个输出途径(EGFP-D1的直接途径,间接的途径:EGFP-D2和EGFP-A2A)让他们在隔离研究。例如,最近的研究表明,有在突触可塑性的病理变化在帕金森病小鼠9,10。然而,这些研究利用幼年小鼠和急性帕金森模型。目前还不清楚是否与稳定的6 – 羟多巴胺损毁大鼠中所描述的变化也发生在这些模型中。其他团体都试图产生一个稳定的单方面的损毁6-OHDA成年PD小鼠模型,损毁内侧前脑束(MFB),不幸的是,在这项研究中的死亡率是非常高,只有14%存活21手术天或更长时间11。最近的研究已产生内黑质病变与低死亡率> 80%的多巴胺能神经元的损失,但表达左旋多巴引起的运动障碍11,12,13,14变量在这些研究中。另一个PD小鼠模型MPTP的损伤小鼠15。虽然这种模式已被证明在评估潜在神经保护剂16有用的,它是不适合理解机制帕金森病的症状,这种模式往往未能引起运动障碍,在18 17病变程度,显示了一个很大的可变性。
在这里,我们已经开发了6-OHDA直接管理到稳定单方面的PD小鼠模型6-OHDA损毁MFB的,一贯导致95%的损失纹状体多巴胺(高效液相色谱法测定),以及生产的行为,不平衡的特点以及单方面的6-OHDA损毁PD大鼠模型中观察到。这个新开发的PD小鼠模型,将被证明是有价值的工具,在了解帕金森病症状的生成机制。
本协议描述了一个稳定的单方面6-OHDA损毁的帕金森氏症,这是非常重复性高病变的成功率,低死亡率,小鼠模型的生成方法。 6-OHDA损伤手术的成功,可以很容易地估计> 70%> 95%,在27的损毁纹状体多巴胺耗竭的指标ipsiversive旋转自发旋转行为的测量。纹状体多巴胺水平的量化纹状体多巴胺耗竭的程度相比,在黑质致密部TH阳性细胞数量quantificiation是最精确的测量,因为它提供了直接?…
The authors have nothing to disclose.
这项工作是支持的外交事务和国际贸易(加拿大政府),多伦多大学,加拿大创新,NSERC,Krembil的基金会和治疗帕金森氏信托基金会诺基金。
Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
desipramine HCl | Sigma-Aldrich, Oakville, ON, Canada | D125 | 25mg/kg |
pargyline HCl | Sigma-Aldrich, Oakville, ON, Canada | P8013 | 5mg/kg |
6-OHDA HBr | Sigma-Aldrich, Oakville, ON, Canada | H116 | 3mg / mouse |
stereotaxic Frame | Kopf Instruments, Tujunga, CA, USA | Model 900 | |
mouse ear cups | Kopf Instruments, Tujunga, CA, USA | Model 921 Zygoma Ear Cups | |
mouse incisor bar | Kopf Instruments, Tujunga, CA, USA | Model 923B | |
mouse anaesthesia mask | Kopf Instruments, Tujunga, CA, USA | Model 923B | |
priming kit (containing 250ml syringe) | Hamilton Company, Reno, NV, USA | PRMKIT 81120 | |
RN compression fitting kit (1 mm) | Hamilton Company, Reno, NV, USA | 55750-01 | |
PEEK tubing from RN compression fitting kit< (1/16th inch) | Hamilton Company, Reno, NV, USA | 55751-01 | |
dual small hub RN Coupler | Hamilton Company, Reno, NV, USA | 55752-01 | |
luer to small hub RN adaptor | Hamilton Company, Reno, NV, USA | 55753-01 | |
1ml 25S syringe model 7001KH | Hamilton Company, Reno, NV, USA | 80100 | |
*33G removable needle (RN) pack of 6. . Custom 1 inch with 45<° bevel | Hamilton Company, Reno, NV, USA | 7803-05 | |
Scissors | Fine Science Tools, Vancouver, BC, Canada. | 14084-08 | |
Scalpel | Fine Science Tools, Vancouver, BC, Canada | 10003-12 | |
Scalpel blades | Fine Science Tools, Vancouver, BC, Canada | 10035-20 | |
Forcep | Fine Science Tools, Vancouver, BC, Canada | 11608-15 | |
Hemostats | Fine Science Tools, Vancouver, BC, Canada. | 13004-14 | |
Isoflurane | Abbot | 02241315 | 2-3% |
Suters (Vicryl 4.0) | Syneture | SS-683 | |
Steriliser | Fine Science Tools, Vancouver, BC, Canada | 18000-45 | |
Infusion Pump | Harvard Apparatus | PhD 22/2000 | |
Needles (27G) | Becton Dickinson | 305109 | |
Needles (25G) | Becton Dickinson | 305127 | |
Syringes (1ml) | BD syringe | 309692 | |
Anaesthesia trolley | LEI medical | M2000 | |
Baytril | CDMV, St. hyacinthe, QC | 102207 | |
Lidocaine | CDMV, St. hyacinthe, QC | 3914 | |
Betadine solution | CDMV, St. hyacinthe, QC | 19955 |