פרוטוקול לביצוע חד צדדיים 6-OHDA נגעים של צרור המוח הקדמי המדיאלי בעכברים מתואר. שיטה זו יש שיעור תמותה נמוך (13.3%) עם 89% מבעלי החיים ששרדו מראה> אובדן 95% של דופמין striatal ו 90.63 ± -4.02% הטיה לכיוון הסיבוב ipsiversive בצד של הנגע.
Lesioned באופן חד צדדי 6-hyroxydopamine (6-OHDA)-lesioned במודל חולדה של מחלת הפרקינסון (PD) הוכיח את עצמו רב ערך בקידום הבנתנו את המנגנונים בבסיס הסימפטומים הפרקינסון, שכן היא דומה שינויים המעגלים הגרעינים הבזליים ותרופות שנצפתה הפרקינסון חולים 1-4. עם זאת, השינויים תאית ומולקולרית מדויקים המתרחשים cortico-striatal סינפסות של המסלולים פלט בתוך הסטריאטום, המהווה את אזור הקלט העיקרי של הגרעינים הבזליים להישאר חמקמקה, ואת זה היא ככל הנראה המקום בו ליקויים פתולוגיים שבבסיס הסימפטומים הפרקינסון עולות 3 , 5.
ב PD, בהבנת המנגנונים בבסיס שינויים ניוון המעגלים הבסיסיים הגרעינים הבאה של מסלול הכושי-striatal כבר התקדמו במידה רבה על ידי פיתוח של כרומוזום בקטריאלי מלאכותי (BAC) על עכברים-לבטא חלבונים ניאון ירוק מונע על ידי קידום8, ומאפשר להם להיות למד בבידוד::: ספציפית בין שני המסלולים פלט striatal (eGFP-D2 ו-eGFP A2A מסלול עקיף eGFP-D1 מסלול ישיר) RS. לדוגמה, מחקרים שנעשו לאחרונה הראו כי ישנם שינויים פתולוגיים הפלסטיות הסינפטית הפרקינסון בעכברים 9,10. עם זאת, מחקרים אלה נוצלו עכברים צעירים ומודלים חריפות של פרקינסון. לא ברור אם השינויים המתוארים חולדות מבוגרים עם נגעים יציבים 6-OHDA להתרחש גם במודלים אלה. קבוצות אחרות ניסו ליצור יציבה באופן חד צדדי, lesioned 6-OHDA העכבר מבוגרים מודל של פרקינסון על ידי lesioning צרור המוח הקדמי המדיאלי (MFB), למרבה הצער, שיעור התמותה במחקר זה היה גבוה ביותר, כאשר רק 14% שורדים את הניתוח עבור 21 ימים או יותר 11. מחקרים מאוחרים יותר יצרו התוך nigral נגעים עם שיעור תמותה נמוך גם> אובדן 80% של נוירונים דופאמין, לעומת זאת ביטוי של dyskinesia המושרה L-DOPA 11,12,13,14 היה משתנהבמחקרים אלה. מודל אחר העכבר מבוססת היטב של פ"ד הוא MPTP-lesioned העכבר 15. בעוד המודל הזה הוכיח שימושי בהערכת סוכנים פוטנציאליים neuroprotective של 16, הוא מתאים פחות להבנת מנגנוני שבבסיס הסימפטומים של מחלת הפרקינסון, כמו במודל זה לעיתים קרובות לא מצליח לגרום ליקויים מוטוריים, ומראה השתנות רחב היקף הנגע 17, 18 .
כאן פיתחנו מודל יציב חד צדדית 6-OHDA-lesioned העכבר של PD על ידי הממשל ישירה של 6-OHDA אל MFB, אשר באופן עקבי גורם> אובדן 95% של דופמין striatal (כפי שנמדד על ידי HPLC), כמו גם לייצר התנהגותי חוסר האיזון שנצפה המודל מאופיין גם 6-OHDA-lesioned חד צדדית של עכברוש פ"ד. מודל זה של העכבר החדש שפותח פ"ד יוכיח כלי חשוב בהבנת המנגנונים בבסיס הדור של סימפטומים הפרקינסון.
פרוטוקול זה מתאר שיטה לייצור של מודל יציב 6-OHDA-lesioned חד צדדית העכבר של מחלת פרקינסון, שהיא לשחזור ביותר, עם שיעור הצלחה גבוה הנגע, ואת שיעור תמותה נמוך. ההצלחה של הניתוח 6-OHDA הנגע ניתן לאמוד בקלות עם> סיבובים ipsiversive 70% המעידים על דלדול> דופמין 95% ב הסטריאטום lesioned 27 …
The authors have nothing to disclose.
עבודה זו נתמכה על ידי משרד החוץ והמסחר הבינלאומי (ממשלת קנדה), אוניברסיטת טורונטו קונוט קרן, קרן קנדה עבור חדשנות, NSERC, קרן Krembil ואמון פרקינסון תרופה.
Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
desipramine HCl | Sigma-Aldrich, Oakville, ON, Canada | D125 | 25mg/kg |
pargyline HCl | Sigma-Aldrich, Oakville, ON, Canada | P8013 | 5mg/kg |
6-OHDA HBr | Sigma-Aldrich, Oakville, ON, Canada | H116 | 3mg / mouse |
stereotaxic Frame | Kopf Instruments, Tujunga, CA, USA | Model 900 | |
mouse ear cups | Kopf Instruments, Tujunga, CA, USA | Model 921 Zygoma Ear Cups | |
mouse incisor bar | Kopf Instruments, Tujunga, CA, USA | Model 923B | |
mouse anaesthesia mask | Kopf Instruments, Tujunga, CA, USA | Model 923B | |
priming kit (containing 250ml syringe) | Hamilton Company, Reno, NV, USA | PRMKIT 81120 | |
RN compression fitting kit (1 mm) | Hamilton Company, Reno, NV, USA | 55750-01 | |
PEEK tubing from RN compression fitting kit< (1/16th inch) | Hamilton Company, Reno, NV, USA | 55751-01 | |
dual small hub RN Coupler | Hamilton Company, Reno, NV, USA | 55752-01 | |
luer to small hub RN adaptor | Hamilton Company, Reno, NV, USA | 55753-01 | |
1ml 25S syringe model 7001KH | Hamilton Company, Reno, NV, USA | 80100 | |
*33G removable needle (RN) pack of 6. . Custom 1 inch with 45<° bevel | Hamilton Company, Reno, NV, USA | 7803-05 | |
Scissors | Fine Science Tools, Vancouver, BC, Canada. | 14084-08 | |
Scalpel | Fine Science Tools, Vancouver, BC, Canada | 10003-12 | |
Scalpel blades | Fine Science Tools, Vancouver, BC, Canada | 10035-20 | |
Forcep | Fine Science Tools, Vancouver, BC, Canada | 11608-15 | |
Hemostats | Fine Science Tools, Vancouver, BC, Canada. | 13004-14 | |
Isoflurane | Abbot | 02241315 | 2-3% |
Suters (Vicryl 4.0) | Syneture | SS-683 | |
Steriliser | Fine Science Tools, Vancouver, BC, Canada | 18000-45 | |
Infusion Pump | Harvard Apparatus | PhD 22/2000 | |
Needles (27G) | Becton Dickinson | 305109 | |
Needles (25G) | Becton Dickinson | 305127 | |
Syringes (1ml) | BD syringe | 309692 | |
Anaesthesia trolley | LEI medical | M2000 | |
Baytril | CDMV, St. hyacinthe, QC | 102207 | |
Lidocaine | CDMV, St. hyacinthe, QC | 3914 | |
Betadine solution | CDMV, St. hyacinthe, QC | 19955 |