En protokol til udførelse unilaterale 6-OHDA-læsioner i den mediale forhjernen bundtet i mus er beskrevet. Denne fremgangsmåde har en lav dødelighed (13,3%) med 89% af de overlevende dyr, som udviser> 95% tab af striatal dopamin og 90,63 ± -4,02% ipsiversive roterende forspænding mod den side af læsionen.
Den ensidigt læderet 6-hyroxydopamine (6-OHDA)-læderede rotte model af Parkinsons sygdom (PD), har vist sig at være uvurderlig i at fremme vores forståelse af de mekanismer, der ligger parkinson symptomer, da den redegør for de ændringer i basalganglierne kredsløb og farmakologi observeret i patienter med Parkinsons sygdom 1-4. Den nøjagtige cellulære og molekylære forandringer i cortico-striatale synapser i output pathways i striatum, som er den største bidrag region af basalganglierne forbliver uklar, og dette menes at være stedet, hvor patologiske afvigelser ligger parkinson symptomerne opstår 3 , 5.
I PD er forstå de mekanismer, der ligger ændringer i basalganglierne kredsløb efter degeneration af den nigro-striatale pathway i høj grad blevet fremført af udviklingen af bakterielle kunstige kromosomer (BAC)-mus over-udtrykker grønt fluorescerende proteiner, som drives af fremmers specifikke for de to striatale output veje (direkte vej: EGFP-D1 indirekte vej: EGFP-D2 og EGFP-A2a) 8, giver dem mulighed for at blive undersøgt i isolation. For eksempel har nylige undersøgelser antydet, at der er patologiske ændringer i synaptisk plasticitet hos Parkinson mus 9,10. Disse undersøgelser anvendes juvenile mus og akutte modeller af parkinsonisme. Det er uklart, om de beskrevne ændringer i voksne rotter med stabile 6-OHDA-læsioner forekommer også i disse modeller. Andre grupper har forsøgt at skabe et stabilt ensidigt-læderede 6-OHDA voksen musemodel af PD ved læsion af mediale forhjernen bundt (MFB), desværre dødeligheden i dette studie var ekstremt høj, med kun 14% overlever operationen for 21 dage eller længere 11. Nyere undersøgelser har genereret inden nigrale læsioner med både en lav dødelighed> 80% tab af dopaminerge neuroner, men ekspression af L-DOPA-induceret dyskinesi 11,12,13,14 var variabeli disse forsøg. Anden veletableret musemodel for PD er den MPTP-læderede mus 15. Mens denne model har vist sig nyttig ved vurderingen af potentielle neurobeskyttende midler 16, er mindre egnet til at forstå mekanismerne bag symptomer på PD, som det model ofte ikke at inducere motoriske mangler, og viser en bred variation i graden af læsionen 17, 18 .
Her har vi udviklet en stabil unilaterale 6-OHDA-læderede musemodel for PD ved direkte administrering af 6-OHDA i MFB, som konsekvent forårsager> 95% tab af striatal dopamin (som målt ved HPLC) såvel som fremstilling af adfærdsmæssige ubalancer observeret i velkarakteriserede unilaterale 6-OHDA-læderede rottemodel for PD. Denne nyudviklede musemodel af PD vil vise sig et værdifuldt værktøj til at forstå de mekanismer, der ligger generation af Parkinsons symptomer.
Denne protokol beskrives en fremgangsmåde til generering af en stabil unilaterale 6-OHDA-læderede musemodel af Parkinsons sygdom, hvilket er meget reproducerbar, med en høj læsion succesrate, og en lav dødelighed. Succes 6-OHDA læsion kirurgi kan let vurderes ved måling af spontan roterende adfærd med> 70% ipsiversive omdrejninger indikative på> 95% dopaminudtømning i den læderede striatum 27. Kvantificering af striatale dopaminniveauer er den mest nøjagtige måling af omfanget af striatal d…
The authors have nothing to disclose.
Dette arbejde blev støttet af Institut for udenrigsanliggender og international handel (Canadas regering), University of Toronto Connaught fond, den canadiske Institut for Innovation, NSERC, den Krembil Foundation og Cure Parkinsons Trust.
Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
desipramine HCl | Sigma-Aldrich, Oakville, ON, Canada | D125 | 25mg/kg |
pargyline HCl | Sigma-Aldrich, Oakville, ON, Canada | P8013 | 5mg/kg |
6-OHDA HBr | Sigma-Aldrich, Oakville, ON, Canada | H116 | 3mg / mouse |
stereotaxic Frame | Kopf Instruments, Tujunga, CA, USA | Model 900 | |
mouse ear cups | Kopf Instruments, Tujunga, CA, USA | Model 921 Zygoma Ear Cups | |
mouse incisor bar | Kopf Instruments, Tujunga, CA, USA | Model 923B | |
mouse anaesthesia mask | Kopf Instruments, Tujunga, CA, USA | Model 923B | |
priming kit (containing 250ml syringe) | Hamilton Company, Reno, NV, USA | PRMKIT 81120 | |
RN compression fitting kit (1 mm) | Hamilton Company, Reno, NV, USA | 55750-01 | |
PEEK tubing from RN compression fitting kit< (1/16th inch) | Hamilton Company, Reno, NV, USA | 55751-01 | |
dual small hub RN Coupler | Hamilton Company, Reno, NV, USA | 55752-01 | |
luer to small hub RN adaptor | Hamilton Company, Reno, NV, USA | 55753-01 | |
1ml 25S syringe model 7001KH | Hamilton Company, Reno, NV, USA | 80100 | |
*33G removable needle (RN) pack of 6. . Custom 1 inch with 45<° bevel | Hamilton Company, Reno, NV, USA | 7803-05 | |
Scissors | Fine Science Tools, Vancouver, BC, Canada. | 14084-08 | |
Scalpel | Fine Science Tools, Vancouver, BC, Canada | 10003-12 | |
Scalpel blades | Fine Science Tools, Vancouver, BC, Canada | 10035-20 | |
Forcep | Fine Science Tools, Vancouver, BC, Canada | 11608-15 | |
Hemostats | Fine Science Tools, Vancouver, BC, Canada. | 13004-14 | |
Isoflurane | Abbot | 02241315 | 2-3% |
Suters (Vicryl 4.0) | Syneture | SS-683 | |
Steriliser | Fine Science Tools, Vancouver, BC, Canada | 18000-45 | |
Infusion Pump | Harvard Apparatus | PhD 22/2000 | |
Needles (27G) | Becton Dickinson | 305109 | |
Needles (25G) | Becton Dickinson | 305127 | |
Syringes (1ml) | BD syringe | 309692 | |
Anaesthesia trolley | LEI medical | M2000 | |
Baytril | CDMV, St. hyacinthe, QC | 102207 | |
Lidocaine | CDMV, St. hyacinthe, QC | 3914 | |
Betadine solution | CDMV, St. hyacinthe, QC | 19955 |