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Medicine

एकतरफा-lesioned 6 OHDA पार्किंसंस रोग के माउस मॉडल का विकास

Published: February 14, 2012 doi: 10.3791/3234
Automatic Translation
1, 1, 1
1Centre for Neurobiology of Stress, Dept Biological Sciences, University of Toronto at Scarborough

Summary

एकतरफा 6 OHDA घावों चूहों में औसत दर्जे का अग्रमस्तिष्क बंडल के प्रदर्शन के लिए एक प्रोटोकॉल में वर्णित है. इस विधि> striatal dopamine और 90.63 के 95% नुकसान दिखा जीवित पशुओं के 89% के साथ एक कम मृत्यु दर (13.3%) ± -4.02% घाव के पक्ष की ओर ipsiversive घूर्णी पूर्वाग्रह है.

Protocol

1. आवास और चूहों की तैयारी

  1. इन चूहों को शुद्ध FVB चूहे कर रहे हैं, और जीवाणु कृत्रिम गुणसूत्र (बीएसी) ट्रांसजेनिक चूहों 8 (उत्परिवर्ती माउस क्षेत्रीय संसाधन (MMRRC) भोजन और पानी के लिए स्वतंत्र पहुँच के साथ एक 12:12 घंटे प्रकाश अंधेरे चक्र में केंद्र FVB संचालित की एक कॉलोनी का रखरखाव. यह किसी भी अन्य तनाव के साथ इन चूहों को पार करने के लिए आवश्यक है, या प्रयोजनों के प्रजनन के लिए, या घाव 6 OHDA प्रक्रिया की सफलता सुनिश्चित करने.
  2. आदेश में एक Parkinsonian मॉडल उत्पन्न करने के लिए, वयस्क प्रसव के बाद 31-42 दिन आयु वर्ग के चूहों (P31-42) 6 - OHDA घाव और नकली सर्जरी के लिए आवश्यक हैं.
  3. संक्रमण के जोखिम को कम करने के लिए, 24 सर्जरी से पहले घंटे के लिए पीने के पानी में Baytril (एंटीबायोटिक) प्रशासन.

2. दवाओं की सर्जरी के लिए तैयार

का एक premedication desipramine और pargyline आमतौर पर कृन्तकों को पहले प्रशासित इंजेक्शन 6 hydroxydopamine के (6 OHDA) चयनात्मकता और eff वृद्धि6 OHDA प्रेरित घावों की icacy. तेज noradrenaline / 5HT अवरोध करनेवाला, 6 OHDA प्रेरित desipramine noradrenaline और 5HT 22 रिक्तीकरण के कम हो जाती है, जबकि monoamine oxidase अवरोध करनेवाला, pargyline 6 - OHDA 31 6 - hydroxydopamine extrasynaptic टूटने को कम करने के द्वारा डोपामिनर्जिक टर्मिनलों की संवेदनशीलता को बढ़ाता है.

  1. premedication (desipramine हाइड्रोक्लोराइड (एचसीएल) और pargyline एचसीएल) को बड़ी मात्रा में बनाया जा सकता है और -80 डिग्री तक उपयोग सी संग्रहीत. Desipramine एचसीएल की उचित राशि के लिए / 25 किलो मिलीग्राम के साथ जानवरों की संख्या है कि उस दिन सर्जरी प्राप्त करने के लिए प्रत्येक माउस की आपूर्ति वजन. माउस का कम वजन छोटे संस्करणों को सही देने के लिए चुनौतीपूर्ण बनाता है, इसलिए 2.5 मिलीग्राम / एमएल के एक एकाग्रता में desipramine हाइड्रोक्लोराइड तैयार है और 10 मिलीग्राम / किग्रा पशु को दिलाई. परिसर के नमक घटक के वजन के लिए जिम्मेदार होना चाहिए ऐसी है कि सही एकाग्रता हासिल की है. के वजन के लिए सुधारऔर हाइड्रोक्लोराइड desipramine में एचसीएल नमक: desipramine एचसीएल आण्विक वजन (मेगावाट): 302.84 मेगावाट एचसीएल: 36.46 मेगावाट की मुक्त आधार: 266.38 सुधार कारक: 302.84 / 266.38 = 1.137 समाधान के 10 मिलीग्राम के लिए: = desipramine 2.5mg/ml एक्स 10.0ml सुधार कारक = 2.5mg/ml एक्स 10.0ml के 1.137 x = desipramine हाइड्रोक्लोराइड की 28.43mg
  2. बाहर pargyline एचसीएल की उचित मात्रा में पशुओं की संख्या सर्जरी कि दिन को प्राप्त करने के लिए 5mg/kg साथ प्रत्येक माउस की आपूर्ति वजन. ऊपर वर्णित के रूप में परिसर के नमक घटक के लिए सही. माउस का कम वजन छोटे संस्करणों को सही देने के लिए चुनौतीपूर्ण बनाता है, इसलिए 0.5 मिलीग्राम / एमएल के एक एकाग्रता पर pargyline हाइड्रोक्लोराइड तैयार है और 10 मिलीग्राम / किग्रा पशु के लिए प्रशासन.
    Pargyline हाइड्रोक्लोराइड में एचसीएल नमक के वजन के लिए सही है:
    Pargyline एचसीएल मेगावाट: 195.69 मेगावाट एचसीएल: 36.46
    मुक्त आधार मेगावाट: 159.23 सुधार का पहलू: 195.69 / 159.23 1.229 =
    के लिए समाधान के 10 मिलीग्राम वजन: <br /> = 0.5 मिलीग्राम / एमएल pargyline एक्स 10.0 मिलीग्राम एक्स सुधार कारक
    = 0.5 मिलीग्राम / एमएल x 10.0 मिलीग्राम 1.229 x
    = Pargyline हाइड्रोक्लोराइड की 6.15mg
  3. एक 10 मिलीलीटर गिलास में 28.43mg desipramine एचसीएल और 6.15mg pargyline एचसीएल के जुडा सिलेंडर स्नातक की उपाधि प्राप्त की, और 8 मिलीग्राम बाँझ खारा (0.9%) जोड़ें. भंवर और गर्मी से 45 डिग्री सेल्सियस तक मिश्रण भंग कर रहा है. समाधान के पीएच अब लगभग 3 हो सकता है, जो अगर चूहों को दिलाई बेचैनी और पोस्ट ऑपरेटिव जटिलताओं के कारण मूत्र और जठरांत्र संबंधी मार्ग समारोह को शामिल करेंगे. NaOH (1M) की बूँदें जोड़ें जब तक पीएच 7.4 है. बाँझ खारा (0.9%), और भंवर के साथ ऊपर 10ml की मात्रा. लेबल, और ~ 80 ° सी. पर तारीख फ्रीज यह देखते हुए कि कमरे के तापमान पर pargyline एचसीएल खारा में घुलनशील नहीं है, शल्य चिकित्सा की अवधि के दौरान, एक पानी स्नान करने के लिए गर्म ° सी ऑपरेटिंग कमरे 37 में premedication मिश्रण की दुकान.
  4. समाधान 6 OHDA के पूर्व तुरंत सर्जरी के लिए तैयार रहना चाहिए. वाहन 6 OHDA hydrobromide (6 का भंग कियाOHDA.Br) समाधान बाँझ (0.9%) खारा समाधान युक्त ascorbic एसिड (0.2%) है. Ascorbic एसिड के 6 OHDA.Br को स्थिर करने की जरूरत है, के रूप में यह एक निष्क्रिय फार्म 6 OHDA.Br के ऑक्सीकरण को रोकता है. स्नातक की उपाधि प्राप्त बाहर ascorbic एसिड की 0.2 ग्राम वजन, तो एक खाली 1 एल को जोड़ने सिलेंडर, बाँझ खारा साथ 1 एल (0.9%) ऊपर और हलचल. लेबल, दिनांक, 80 ~ दुकान और डिग्री सेल्सियस तक की आवश्यकता है.
  5. बाहर 6 OHDA.HBr की उचित राशि वजन एक 15.0 मिलीग्राम / एमएल 3.0 μg साथ प्रत्येक माउस आपूर्ति के समाधान बनाने के लिए. के बाद से 6 OHDA.Br प्रकाश और गर्मी है, प्रकाश और जगह के लिए बर्फ पर संवेदनशील जोखिम से बचने के पूर्व वजन करने के लिए.
    , HBR नमक के 6 OHDA.HBr में वजन के लिए सही है:
    6 OHDA.HBr के मेगावाट: 250.09 मेगावाट HBR: मुक्त आधार की 79.9 मेगावाट: 170.19
    सुधार का पहलू: 250.09 / 170.19 1.47 =
    के लिए समाधान के 0.5 मिलीग्राम वजन:
    = 15.0 मिलीग्राम / एमएल 6 OHDA 0.5 x मिलीलीटर एक्स सुधार कारक
    = 15.0 मिलीग्राम / एमएल 6 OHDA 0.5 x मिलीलीटर 1.47 एक्स
    = 6 OHDA.HBr के 11.03 मिलीग्राम
  6. दिखावा संचालित जानवरों के लिए, वाहन के एक बराबर मात्रा (बाँझ (0.9%) खारा, ascorbic एसिड% 0.02 7.4 पीएच) है जो कि 6 OHDA - lesioned जानवरों प्राप्त होगा बनाने के लिए, और एक 1.0 मिलीग्राम बाँझ लिपटे ट्यूब में जगह टिन पन्नी, और लेबल का उपयोग करें जब तक बर्फ पर तुरंत जगह में.

3. शल्य तंत्र की स्थापना

सर्जिकल उपकरण एक autoclave पूर्व टी का प्रयोग निष्फल किया जाना चाहिएओ सर्जरी. प्रत्येक आपरेशन के बीच, सर्जिकल उपकरण 95% इथेनॉल में निष्फल होना चाहिए 250 हीटिंग के बाद ° 2 मिनट के लिए सी. सभी प्रयोगों संबद्ध संस्था और देश की उचित पशु की देखभाल समिति के दिशा निर्देशों के अनुसार किया जाना चाहिए.

  1. सभी उपकरणों की स्थापना से पूर्व isopropyl शराब के साथ सतहों और उपकरण साफ. बाँझ दस्ताने पहनें जब साफ शल्य चिकित्सा उपकरणों से निपटने.
  2. सेट अप के आधार पर कागज तौलिये के साथ एक माउस वसूली पिंजरे. एक हीटिंग दीपक के नीचे या एक गर्म पैड के शीर्ष पर रखें.
  3. संज्ञाहरण ट्राली सेट, यह सुनिश्चित करना है कि ऑक्सीजन इनफ्लो जुड़ा हुआ है और खुला है, और isoflurane जलाशय पूरी तरह से भरा हुआ है. 1 एल / मिनट, और 2-4% isoflurane के लिए ऑक्सीजन का प्रवाह निर्धारित करें. आदर्श रूप में वहाँ दो संवेदनाहारी मशीन से बहिर्वाह बंदरगाहों के लिए एक प्रेरण कक्ष में ऑक्सीजन isoflurane मिश्रण देने, के रूप में अच्छी तरह से रखरखाव के लिए जबकि पशु फ्रेम में stereotaxic है है होगा.
  4. सहrrect जलसेक तंत्र की विधानसभा के सफल घावों को सुनिश्चित करने के लिए महत्वपूर्ण है, फँस हवा या अवरुद्ध सुई के रूप में 6 OHDA के घाव साइट पर संचार की मात्रा कम हो जाती है. जलसेक उपकरण इकट्ठे संख्या 1 में प्रदर्शन के रूप में. धागा तिरछी नज़र टयूबिंग की एक साइड पर एक आर.एन. धातु अखरोट (आर.एन. संपीड़न किट (1 फिटिंग / 16 वें इंच)), तिरछी नज़र कप सामी, तो विहित पीएफए ​​सामी द्वारा पीछा किया. ओरिएंट ferrules ताकि विहित पीएफए ​​सामी पर शंकु तिरछी नज़र कप सामी की संभोग भाग में पर्ची जाएगा. दोहरी छोटे हब आर.एन. (# 1) युग्मक, कनेक्शन सुनिश्चित करने में जगह तंग है. दोहरी छोटे हब आर.एन. युग्मक के दूसरे छोर पर 33 गेज इंजेक्शन सुई डालने. आर.एन. धातु पागल और कस के माध्यम से सुई धागा. सुनिश्चित करें कि 33 गेज सुई दोहरी छोटे हब आर.एन. युग्मक (# 1) के लिए एक 180 डिग्री कोण पर है. तिरछी नज़र टयूबिंग, धागा एक आर.एन. धातु पागल एक तिरछी नज़र सामी के बाद के दूसरे छोर पर है, तो पीएफए ​​सामी. धातु अखरोट डालेंएन डी एक दूसरे दोहरी छोटे हब आर.एन. युग्मक में विधानसभा सामी और कनेक्शन कस. एक दूसरे छोटे दोहरी आर.एन. हब युग्मक (# 2) के दूसरे छोर पर छोटे हब आर.एन. अनुकूलक (Luer अनुकूलक) Luer सम्मिलित करने के लिए, और कनेक्शन कस.
  5. अगला जलसेक उपकरण (चित्रा 1 देखें) से primed किया जाना चाहिए. बाँझ पानी के साथ 250 μl और 1.0 μl हैमिल्टन सीरिंज को भरें, यह सुनिश्चित करना है कि वहाँ कोई हवाई बुलबुले हैं. Luer एडाप्टर के लिए 250 μl सिरिंज देते हैं और 250 μl ऐसे कि पानी टयूबिंग के दूसरे छोर पर 33 गेज इंजेक्शन सुई के माध्यम से जारी है सिरिंज की गोताख़ोर दबाना. प्रणाली के माध्यम से पानी धक्का है, जबकि 250 μl सिरिंज बाहर खींच Luer एडाप्टर के Luer एडाप्टर के अंत पर एक छोटे से पानी मनका छोड़ जारी रखें. 1.0 μl सिरिंज सवार दबाना जब तक एक छोटा सा पानी मनका अलग हो जाता है. ध्यान से Luer अनुकूलक में 1.0 μl सिरिंज सम्मिलित करने के लिए, सुनिश्चित करें कि 1.0 μl सिरिंज पर मनका पानी पानी मनका वर्तमान ओ के साथ जोड़ता हैn Luer अनुकूलक, और पूरी तरह से Luer अनुकूलक में 1.0 μl सिरिंज डालने. छोटे दोहरी आर.एन. हब युग्मक में कोई बुलबुले सुनिश्चित करें.
  6. अब है कि प्रणाली primed है, छिड़काव उपकरण stereotaxic फ्रेम और जलसेक पंप करने के लिए सुरक्षित किया जा सकता है. 33 गेज इंजेक्शन stereotaxic फ्रेम की जोड़तोड़ हाथ से जुड़ी सुई के साथ छोटे दोहरी आर.एन. हब युग्मक दबाना, तो छिड़काव पंप करने के लिए 1.0 μl सिरिंज दबाना, जैसे कि जब छिड़काव पंप शुरू होता है सिरिंज दबाना के खिलाफ दबाया जाता है और नहीं कर सकता चाल है. जलसेक पंप कार्यक्रम के लिए 0.1 / μl मिनट के एक जलसेक दर की अनुमति.

4. एकतरफा घाव 6 OHDA सर्जरी

  1. पहले आपरेशन तीस मिनट, प्रत्येक जानवर का वजन और वजन रिकॉर्ड. प्रणालीबद्ध 10 मिलीग्राम / अंतर peritoneal इंजेक्शन (आईपी) द्वारा किलोग्राम पर एक माउस desipramine हाइड्रोक्लोराइड (2.5 मिलीग्राम / एमएल, सिग्मा Aldrich) और pargyline हाइड्रोक्लोराइड (0.5 मिलीग्राम / एमएल, सिग्मा Aldrich) (0.9% बाँझ खारा, 7.4 पीएच) प्रशासनएक 27g सुई का उपयोग करते हुए एक 1ml सिरिंज से जुड़ी है. उदाहरण के लिए, एक 30.0 ग्राम माउस premedication की 300 μl प्राप्त होगा. हीटिंग डिस्क गर्म और कान और छेनी बार के तहत इस जगह. हीटिंग डिस्क सर्जरी के दौरान पशुओं के तापमान को बनाए रखने और एक आदर्श ऊंचाई पर पशु के कान stereotaxic फ्रेम और छेनी सलाखों फिट रखने के लिए मदद मिलेगी.
  2. , Desipramine एचसीएल और pargyline के एचसीएल समाधान के प्रशासन के बाद पंद्रह मिनट, एक बंद संज्ञाहरण कक्ष में माउस जगह है, और पशु चतनाशून्य करना isoflurane साँस लेना (2 हे में 2-3%) का उपयोग. पशु पर्याप्त anesthetised है जब यह हिंद पैर चुटकी और नहीं ब्लिंक रिफ्लैक्स के लिए कोई प्रतिक्रिया से पता चलता है.
  3. माउस सिर के ऊपर दाढ़ी, और सामयिक एनाल्जेसिक लागू रूई का उपयोग कर त्वचा को सीधे lidocaine के. Lidocaine आवेदन के बाद पांच मिनट, बाँझ betadine समाधान के साथ पशु के सिर.
  4. एक stereotaxic चूहों के लिए अनुकूलित फ्रेम में पशु रखें. संज्ञाहरण जानवर के चेहरे पर रखा मुखौटा के साथ: सबसे पहले छेनी सलाखों (-3.0 के लिए 2.0 मिमी छेनी पट्टी सेटिंग) में पशु जगह. 1 एल / मिनट, और 1.5-2% isoflurane के लिए ऑक्सीजन का प्रवाह समायोजित करें. छेनी बार एक ऐसी है कि खोपड़ी के शीर्ष स्तर है कान कप के लिए सापेक्ष स्तर पर होना चाहिए. कान कप (व्यास 5.0 मिमी) डालें. कान कप को सही ढंग से डाला गया है, जब सिर पूरी तरह से फ्लैट है, और या तो दिशा में नहीं ले जाया जा सकता है.
  5. एक स्केलपेल ब्लेड का उपयोग कर माउस के सिर के शीर्ष पर त्वचा के midline के साथ काटा, और त्वचा वापस लेना. धुंध का उपयोग कर खोपड़ी की सतह सूखी.
  6. नीचे 1.0 μl सिरिंज सवार धक्का, और 1 मिलीलीटर टिन 6 OHDA समाधान (15 मिग्रा / मिली) युक्त पन्नी में कवर ट्यूब में 33 गेज इंजेक्शन सुई जगह है. वापस धीरे 1.0 μl सिरिंज के सवार पर जबकि 33 गेज इंजेक्शन 6 OHDA समाधान (15 मिलीग्राम / एमएल) में डूब सुई रखने ड्रा.
  7. मध्य साथ एक 1 सेमी चीरा बनाएँखोपड़ी की लाइन. शीर्षस्थान की ओर इंजेक्शन की सुई की नोक अग्रिम, 33 गेज इंजेक्शन की सुई से 6 OHDA समाधान की एक छोटी राशि के लिए एक छोटी सी मनका फार्म वितरित. धीरे धीरे इंजेक्शन सुई टिप कम शीर्षस्थान, जब मनका छू शीर्षस्थान सुई की नोक से आगे बढ़ रोकने के लिए और इन निर्देशांक रिकॉर्ड. इंजेक्शन सुई पृष्ठीय दिशा में 2 मिमी, और लैम्ब्डा दिशा में एक व्याख्यान चबूतरे वाला दुम का दिशा में बाण के समान सीवन के साथ कदम वापस लेना. 33 गेज इंजेक्शन की सुई से 6 OHDA समाधान की एक छोटी राशि के लिए एक छोटी सी मनका फार्म अग्रिम. धीरे धीरे कम इंजेक्शन सुई लैम्ब्डा, जब मनका संपर्क लैम्ब्डा सुई की नोक से आगे बढ़ रोकने के लिए और इन निर्देशांक रिकॉर्ड करने के लिए टिप. औसत दर्जे का (माले), और पार्श्व पृष्ठीय उदर निर्देशांक (डीवी) शीर्षस्थान और लैम्ब्डा के लिए समान होना चाहिए, अगर वे नहीं कर रहे हैं, छेनी बार एपी निर्देशांक, और एमएल निर्देशांक के लिए कान सलाखों के लिए तदनुसार समायोजित. -1.2 मिमी, एमएल: -1.1 Breg करने के लिए सापेक्ष मिमी सुई ले जाएँ एपी सह तालमेलसह तालमेल Stereotaxic 25 में माउस ब्रेन एटलस के अनुसार मा. सुई को वापस लेना, और एक 25 गेज सुई का उपयोग खोपड़ी में एक छेद गड़गड़ाहट.
  8. समन्वय ऊपर इंजेक्शन सुई लौटें, और डीवी सुई डालने के लिए:-5mm. मंझला अग्रमस्तिष्क बंडल में एकतरफा 0.1 / μl मिनट (3 μg कुल) की दर पर 6 OHDA या वाहन के 0.2 μl बिगोना. 6 OHDA या वाहन के प्रशासन के पूरा होने पर, एक और पांच मिनट के लिए जगह में सुई इंजेक्शन साइट से दूर करने के लिए प्रसार की अनुमति के लिए छोड़.
  9. धीरे धीरे वापस लेना सुई.
  10. तीन sutures का उपयोग कर खोपड़ी चीरा को बंद करें, और Lactated घंटी समाधान के 1ml subcutaneously देने (अनुसूचित जाति).
  11. Stereotaxic फ्रेम, वसूली पिंजरे में और जगह से पशु निकालें जब तक होश आ जाता है.

5. पोस्ट ऑपरेटिव 6 OHDA - lesioned जानवरों की देखभाल

  1. जगह जानवरों के पिंजरों में (3 चूहों / पिंजरे) और खाद्य और sugare के लिए मुक्त पहुँच की अनुमतिघ पानी (10 मिमी). भूख और गैस्ट्रोइंटेस्टाइनल गतिशीलता को प्रोत्साहित करने के लिए पिंजरे की फर्श पर खाद्य कंटेनर में Nutra जेल और KMR (बिल्ली का बच्चा दूध प्रतिस्थापन) प्रदान करते हैं.
  2. 2 24 हफ्तों के लिए सर्जरी के बाद दैनिक चूहों का निरीक्षण किया. प्रत्येक निरीक्षण पर विशेष ध्यान पशु पिंजरे के चारों ओर ले जाने की क्षमता का आकलन करने से पशु की सतर्कता के लिए भुगतान किया जाना चाहिए. खाद्य और पिछले प्रेक्षण अवधि से पानी का सेवन, के रूप में के रूप में अच्छी तरह से और fecal बात की उपस्थिति स्थिरता भी मनाया जाना चाहिए. एक आम समस्या पोस्ट ऑपरेटिव निर्जलीकरण यह त्वचा निम्नलिखित त्वचा चुटकी की धीमी त्याग द्वारा स्पष्ट है. यदि यह मनाया जाता है Lactated घंटी समाधान सुप्रीम कोर्ट के 1 सप्ताह के लिए 1ml देने के लिए या जब तक लक्षणों में सुधार. पुरुष जानवरों के मामले में, ध्यान से लिंग लिंग की लालिमा के द्वारा की पहचान आगे को बढ़ाव के लिए मनाया जननांगों होना चाहिए. यदि ऐसा होता है प्रभावित जानवर का लिंग mucol जेल लागू, और 1 सप्ताह के लिए Lactated घंटी समाधान सुप्रीम कोर्ट के 1 मिलीग्राम देनेया लक्षणों जब तक सुधार होगा.
  3. वजन शरीर के वजन में परिवर्तन की निगरानी दैनिक जानवरों.
  4. मामले में जहां आईपी इंजेक्शन गैस्ट्रोइंटेस्टाइनल प्रणाली में एक छोटा सा आंसू का कारण है, पेट में संक्रमण हो सकता है. इसलिए, पेट की संक्रमण की prsence की, सूजन distended पेट से स्पष्ट के लिए आकलन करें. 3-4 दिनों के लिए drining पानी में Baytril प्रशासन द्वारा इलाज के लिए या जब तक लक्षणों में सुधार.

6. Parkinsonian मूल्यांकन

घाव की सीमा का अनुमान 14-21 दिन, 6 OHDA - घाव सर्जरी के बाद व्यवहार मूल्यांकन किया गया था, जब dopamine कमी की मात्रा अधिक से अधिक और स्थिर 26 है.

  1. 0.01 मिलीग्राम / छ 0.9% बाँझ खारा आईपी इंजेक्शन के बाद, गिलास सिलेंडर में जगह चूहों (11 सेमी x 9.5 सेमी) और उनकी गतिविधि रिकॉर्ड एक वीडियो कैमरा (CG9, Sanyo) का उपयोग कर.
  2. वीडियो देख, पूर्ण 360 ° दोनों ipsiversive और contrav में बनाया घुमाव की संख्या गिनतीersive घाव करने के लिए सापेक्ष दिशा.
  3. अधिक ipsiversive घुमाव की ओर पूर्वाग्रह, अधिक Parkinsonian जानवर, इस प्रकार शुद्ध का एक प्रतिशत (contraversive और ipsiversive) घूर्णी व्यवहार के रूप में ipsiversive rotations के अनुपात की गणना.

7. Striatal dopamine सामग्री के HPLC द्वारा निर्धारण

  1. 6 OHDA घाव सर्जरी के बाद कम से कम 21 दिन, और व्यवहार के अध्ययन के पूरा होने पर, संज्ञाहरण की अधिक खुराक से चूहों बलिदान, और ध्यान से मस्तिष्क को हटाने के. प्रत्येक माउस में प्रत्येक गोलार्द्ध से striatum का एक टुकड़ा (230 माइक्रोन) को बनाए रखने, और फ्रीज सेक्शनिंग और दुकान -80 ° C striatal नमूनों की तैयारी तक के बाद तुरंत तस्वीर.
  2. HPLC नमूना बफर (2 मिमी glutathione के साथ 0.1 एम पीसीए) नीचे तोड़ने से striatal नमूने से निकाले डोपामाइन से बचाता है.
    नमूना बफर की 100 मिलीलीटर के लिए:
    = 100 मिलीलीटर HPLC ग्रेड एच 2 हे
    = 0.862 मिलीग्राम (70%) पीसीए (Sigmएक)
    = 61.5 मिलीग्राम glutathione (कम)
    HPLC का ग्रेड एच 2 हे उपाय, पीसीए जोड़ने के लिए, समाधान में glutathione भंग, मिश्रण अच्छी तरह से और फिल्टर. नमूना बफर 1 महीने के लिए 4 ° सेल्सियस पर भंडारित किया जा सकता है.
  3. बर्फ पर striatal स्लाइस पिघलना, तो 200 μl नमूना बफर का उपयोग कर एक अल्ट्रासोनिक सेल disrupter (फिशर ध्वनि, संयुक्त राज्य अमरीका) में homogenise हैं. हर समय बर्फ पर नमूने रखें और प्रत्येक नमूने homogenise 10 सुनिश्चित करना है कि नमूने के homogenization अवधि के बीच शांत करने के लिए अनुमति दी जाती है प्रत्येक सेकंड के लिए तीन बार.
  4. प्रत्येक homogenized नमूना की 20 μl (-80 में दुकान डिग्री सेल्सियस) एक प्रोटीन परख के लिए अलग निर्धारित करें.
  5. नमूने (20,800 XG, 20 मिनट (4 डिग्री सेल्सियस, 58 Eppendorf - 04R, संयुक्त राज्य अमेरिका)) अपकेंद्रित्र, तब हटाने के सतह पर तैरनेवाला और 0.2 माइक्रोन PVDF झिल्ली (पाल, बिल्ली # 1935-28143-310) के माध्यम से फिल्टर और पर स्थिर -80 ° C HPLC विश्लेषण तक. बैक अप प्रोटीन परख के लिए के रूप में प्रोटीन गोली को बनाये रखें.
  6. HPLC के लिए मोबाइल चरण के लिए thr चलाने की तैयारीough HPLC स्तंभ.
    1 एल की मोबाइल चरण के लिए:
    60 नः 2 पीओ 4. मिमी एच 2 ओ (एक भस्मक) = 8.27 छ
    30 मिमी साइट्रिक एसिड = 5.7 ग्राम
    0.13 मिमी Ethylenediaminetetraacetic एसिड (EDTA) disodium नमक निर्जलीकरण = 48 मिलीग्राम
    0.16 मिमी सोडियम dodecyl सल्फेट (एसडीएस) = 45 मिलीग्राम
    850 मिलीलीटर HPLC ग्रेड पानी (Caledon # बिल्ली: 8801-7)
    15% v / v 190 Acetonitrile (3.35 पीएच) = 150 मिलीलीटर HPLC ग्रेड (Caledon, बिल्ली: 1401-7)
    ~ 10 एम NaOH के 2 μl (HPLC ग्रेड H2O में)
    सभी अभिकर्मकों ≥ 99.0% शुद्ध और HPLC ग्रेड के जहाँ भी संभव होना चाहिए. पानी और acetonitrile HPLC ग्रेड होना चाहिए. मोबाइल चरण की तैयारी एक सप्ताह के भीतर किया जाना चाहिए. समर्पित, स्वच्छ कांच के बने पदार्थ और मोबाइल चरण एक 1 एल कांच मापने सिलेंडर और 2 कम से कम 1 एल कांच की बोतल की तैयारी के लिए पूरी तरह सलाखों हलचल. मोबाइल चरण की तैयारी से पहले दो साफ 1 एल बोतल तैयार किया है, समाधान बनाने और एक में निस्पंदन और degassi दौरान स्थानान्तरण करने के लिएएनजी. मोबाइल चरण HPLC के माध्यम से प्रसारित करने के लिए रातोंरात और जाँच कि आधारभूत फ्लैट पहले उपयोग करने के लिए अनुमति देते हैं.
  7. एक ग्लास को मापने सिलेंडर में HPLC ग्रेड पानी की 700 मिलीलीटर उपाय और भंग नः 2 4 PO एच 2 हे, साइट्रिक एसिड, EDTA, और उस में एसडीएस. 850 मिलीलीटर पानी ऊपर है.
  8. 3.35 10 एम NaOH का उपयोग करने के लिए पीएच समायोजित, तो acetonitrile जोड़ने और एक Teflon लेपित हलचल पट्टी का उपयोग कर समाधान मिश्रण.
  9. साफ 2, खाली 1 एल कुप्पी और एक .22 माइक्रोन HVLP Millipore फिल्टर के माध्यम से इसे में मोबाइल चरण फ़िल्टर निर्वात में हलचल बार रखो: (बिल्ली # SLGP033RS). 85:15 एच 2 हे / छानने का काम पहले ACN में फिल्टर गीले. एक बार मोबाइल पूरी तरह से फ़िल्टर्ड है degas वैक्यूम के अंतर्गत कम से कम 10 मिनट के लिए सरगर्मी से मोबाइल चरण.
  10. मानकों को तैयार है जो के खिलाफ striatal नमूने के dopamine एकाग्रता मापा जाएगा. मानक और striatal नमूने के प्रत्येक बैच की शुरुआत के अंत में HPLC के माध्यम से चलाए जा रहे हैं. एक 1मिलीग्राम / एमएल स्टॉक समाधान dopamine के अग्रिम में किया जा सकता है और -80 में 20 μl aliquots में संग्रहीत डिग्री सेल्सियस 5 मिलीलीटर नमूना बफर स्टॉक समाधान में 5 मिलीग्राम डोपामाइन भंग (ऊपर देखें) और यह अच्छी तरह से मिश्रण करने के लिए तैयार है. 1 मिलीग्राम / एमएल स्टॉक समाधान के 5 μl लेने, यह 2.5 मिलीग्राम नमूना बफर जोड़ने और यह मिश्रण अच्छी तरह से एक 2 μg / एमएल डोपामाइन समाधान प्राप्त करने के मानकों की तैयारी शुरू करो.
  11. चार मानकों HPLC के माध्यम से चलाए जा रहे हैं के लिए एक एकाग्रता वक्र उत्पादन कर रहे हैं. डोपामाइन के लिए सांद्रता रहे हैं: 100 एनजी / एमएल, 50 एनजी / मिली, 25 एनजी / मिली, और 12.5 एनजी / एमएल. आदेश में उत्पन्न करने के लिए dopamine के इन चार सांद्रता dopamine 2 μg / एमएल तैयार समाधान 7.10 में) के 10 μl ले. और यह नमूना बफर के 190 μl को जोड़ने के लिए आप एक 100 एनजी / एमएल Dopamine समाधान दे. के बाद यह एक 1:1 100 एनजी / नमूना बफर के साथ मिलीलीटर dopamine के समाधान के धारावाहिक कमजोर पड़ने प्रदर्शन. केवल 100 एनजी / मिलीलीटर डोपामाइन के 100 μl लेने के लिए और नमूना बफर और 50 डोपामाइन एनजी / एमएल उत्पादन मिश्रण के 100 μl जोड़ें, तो 100 ले50 डोपामाइन एनजी / एमएल की μl और नमूना बफर और 25 एनजी / एमएल dopamine और इतने पर उत्पादन का मिश्रण के 100 μl जोड़ने.
  12. HPLC प्रणाली (वाटर्स 1525μ बाइनरी पंप, 717plus autosampler, समरूपता सी 18 रिवर्स चरण स्तंभ (15 सेमी x 4.6 मिमी आईडी, 5 माइक्रोन कण आकार) 30 (डिग्री सेल्सियस), विद्युत (में ईएसए Coulochem III) डिटेक्टर लैस तैयार एक दोहरी इलेक्ट्रोड विश्लेषणात्मक सेल (5011A ईएसए) के साथ और हवा (वाटर्स) सॉफ्टवेयर) कंप्यूटर सॉफ्टवेयर में शुद्ध करना प्रोटोकॉल का चयन करके या निर्माता के निर्देशों का पालन करके मोबाइल चरण के साथ पहली शुद्ध करना प्रणाली द्वारा नियंत्रित है. यह आदान - प्रदान के नए मोबाइल चरण के साथ सभी HPLC प्रणाली में पिछले समाधान.
  13. 400 एम वी पर विद्युत क्षमता और क्रमशः पहले और दूसरे इलेक्ट्रोड के लिए -300 एम वी सेट. इस के बाद, यह कम से कम 2 घंटे के लिए चल रहा है और आदर्श 1 मिलीग्राम / मिनट की एक प्रवाह दर पर मोबाइल चरण के साथ रात भर प्रणाली का संतुलित करना. संतुलन के दौरान कोशिकाओं को चालू किया जाना चाहिए और आधारभूत फिरनिगरानी ading हैं, जब पढ़ने स्थिर प्रणाली का उपयोग किया जा करने के लिए तैयार हो जाता है. संतुलन के पहले घंटे के लिए बाहर निकलता है कि प्रणाली एक नुक़सान कंटेनर में आप मोबाइल चरण HPLC प्रणाली के माध्यम से मोबाइल चरण कुप्पी में आउटलेट नली डाल द्वारा recirculate के लिए अनुमति दे सकते हैं जाने के बाद, मोबाइल चरण करते हैं.
  14. Striatal नमूने पर बर्फ पिघलना, तो प्रत्येक dopamine के बाद प्रत्येक नमूने की 2 एक्स 20 μl और प्रत्येक dopamine के मानक के अगले 20 μl equilibrated HPLC प्रणाली में 1 मिलीग्राम / मिनट पर मोबाइल चरण प्रवाह की दर के साथ मानक की 20 μl इंजेक्षन.
  15. Dopamine के मानकों और नमूने के द्वारा उत्पादित चोटियों के क्षेत्र का विश्लेषण HPLC प्रणाली सॉफ्टवेयर का प्रयोग करें. Dopamine के मानक dopamine एकाग्रता वक्र striatal नमूनों में मौजूद चोटियों के क्षेत्र की तुलना प्रत्येक striatal नमूना की 20 μl में डोपामाइन वर्तमान की राशि की पहचान करेगा. इस आंकड़ा को स्केल अप करने के लिए पूरे striatal टुकड़ा में कुल डोपामाइन वर्तमान.
  16. पीstriatal homogenate के 20 μl है कि आप 7.4 में अलग सेट) पर एक मानक प्रोटीन परख erform के. यह मिलीग्राम / एमएल striatal नमूनों में मौजूद प्रोटीन की राशि के उपाय करेगा. इस से एनजी / मिलीग्राम में आप गोलार्द्धों के बीच और चूहों के बीच dopamine सांद्रता की तुलना करने के लिए अनुमति देता है एक मूल्य के रूप में striatal नमूनों में dopamine की राशि की गणना.

8. प्रतिनिधि परिणाम

28 खारा (आईपी) के प्रशासन के बाद पंद्रह से बीस 6 OHDA - घाव सर्जरी के बाद एक दिन, जब कोशिका मृत्यु की राशि neurotoxin के कारण completion26 तक पहुँच गया है, सहज 360 के माप ° घुमाव 6 की सफलता का आकलन करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है - OHDA lesioned (चित्रा 2). व्यवहार मूल्यांकन की इस विधि को सरल और त्वरित है, और संभावित भड़काना ऐसे एम्फ़ैटेमिन या apomorphine चुनौतियों के रूप में डोपामिनर्जिक एजेंटों द्वारा प्रभाव के कारण से बचा जाता है. इसके अलावा, सहज रोटेशन मूल्यांकन एक और बेहतर predi है<95% डोपामाइन कमी पशुओं के साथ ctor forelimb पंजा प्लेसमेंट परीक्षण 27 की तुलना में. प्रत्येक जानवर में सहज ipsiversive rotations के प्रतिशत के साथ striatal नमूने (व्यवहार HPLC का उपयोग करते हुए अध्ययन के पूरा होने पर तैयार किया) से striatal dopamine के स्तर correlating द्वारा, हमने पाया है कि जानवरों है जो 70% या 6 - OHDA घाव की ओर अधिक ipsiversive rotations के प्रदर्शन को खो दिया है> 95% striatal डोपामाइन 27 (चित्रा 3). आंशिक 6 OHDA प्रेरित (59.44 ± 17.20) औसत दर्जे का अग्रमस्तिष्क बंडल के घावों (चित्रा 3) के बाद, वहाँ ipsiversive बनाम contraversive पक्षों के बीच कोई घूर्णी पूर्वाग्रह था जब सहज (40.91 ± 8.01) घुमाव (चित्रा 2) को मापने. इस प्रकार, के रूप में 6 OHDA चूहों में MFB के लिए प्रशासन के बाद पाया गया है, यह संभव है करने के लिए में डोपामिनर्जिक nigro striatal न्यूरॉन्स की एक गहरा नुकसान, और खारा प्रशासन के कारण (आईपी) 6 ओह हद तक स्क्रीनिंग के लिए एक सही तरीका हैइन जानवरों में डीए घाव.

चित्रा 1

चित्रा 1. योजनाबद्ध आरेख 6 OHDA - घाव सर्जरी के लिए इंजेक्शन सुई तंत्र की विधानसभा को प्रदर्शित करने के लिए.

चित्रा 2

चित्रा 2 घूर्णी व्यवहार का दिखावा - संचालित और 6 OHDA lesioned चूहों में मूल्यांकन. नकली संचालित और 6 OHDA - lesioned के चूहों में सहज घुमाव. डेटा मतलब प्रतिशतता ipsiversive ± घुमाव SEM, जहां शुद्ध contraversive और ipsiversive rotations के 100% के रूप में प्रस्तुत कर रहे हैं. ओपन सलाखों: पशुओं दिखावा संचालित, ग्रे सलाखों:> 95% dopamine के नुकसान के साथ 6 OHDA - lesioned जानवर, काले सलाखों: जानवरों है कि 6 OHDA - घाव सर्जरी कराना पड़ा कि आंशिक lesioned थे. पी *** <दिखावा संचालित जानवरों की तुलना में 0.001. एक तरह से एनोवा डन एकाधिक तुलना परीक्षण (s द्वारा पीछा किया हैम संचालित: n = 17; 6 OHDA - lesioned (> 95%) n = 23; आंशिक 6 OHDA के घाव: n = 3).

चित्रा 3

चित्रा 3 दिखावा संचालित में striatal dopamine के स्तर और 6 OHDA lesioned चूहों HPLC का उपयोग का मूल्यांकन. Striatal डोपामाइन सामग्री दिखावा और में 6 OHDA - lesioned जानवरों की संचालित और unoperated गोलार्द्ध में निर्धारित किया गया था. डेटा मतलब ± प्रतिशत striatal unoperated striatum में dopamine के स्तर के SEM के रूप में प्रस्तुत कर रहे हैं. ओपन सलाखों: पशुओं दिखावा संचालित, ग्रे सलाखों:> 95% dopamine के नुकसान के साथ 6 OHDA - lesioned जानवर, काले सलाखों: जानवरों है कि 6 OHDA - घाव सर्जरी कराना पड़ा कि आंशिक lesioned थे. *** पी <.001, ** पी <0.01 दिखावा संचालित पशुओं की तुलना में. एक तरह से एनोवा डन एकाधिक तुलना परीक्षण द्वारा पीछा किया (नकली संचालित: n = 17, 6 OHDA - lesioned> 95% () n = 23, आंशिक 6 OHDA - घाव: n = 3).

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चित्रा 4

चित्रा 4 tyrosine hydroxylase immunoreactivity का दिखावा - संचालित और 6 OHDA lesioned चूहों में दक्षिणी नौसेना कमान में मूल्यांकन. Substantia nigra pars compacta दक्षिणी नौसेना कमान () में dopamine सेल हानि, tyrosine hydroxylase का दिखावा और में 6 OHDA - lesioned जानवरों की संचालित और unoperated गोलार्द्ध में हानि (HI) सकारात्मक immunohistochemisty के एक मार्कर के रूप में है Thiele एट अल में वर्णित के रूप में निर्धारित किया गया था. प्रेस में. डेटा मतलब ± प्रतिशत unoperated striatum में वें सकारात्मक कोशिकाओं के SEM के रूप में प्रस्तुत कर रहे हैं. ओपन सलाखों: पशुओं दिखावा संचालित, ग्रे सलाखों:> 95% dopamine के नुकसान के साथ 6 OHDA - lesioned जानवर, काले सलाखों: जानवरों है कि 6 OHDA - घाव सर्जरी कराना पड़ा कि आंशिक lesioned थे. *** पी <.001, ** पी <0.01 दिखावा संचालित पशुओं की तुलना में. एक तरह से एनोवा डन कई कंपनियों द्वारा पीछा कियाRison परीक्षण (नकली संचालित: n = 17, 6 OHDA - lesioned> 95% () n = 23, आंशिक 6 OHDA - घाव: n = 3).

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Discussion

इस प्रोटोकॉल के एक स्थिर एकतरफा 6 OHDA पार्किंसंस रोग है, जो अत्यंत प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य, एक उच्च घाव सफलता दर है, और एक कम मृत्यु दर के साथ है की lesioned माउस मॉडल की पीढ़ी के लिए एक विधि का वर्णन करता है. 6 OHDA घाव सर्जरी की सफलता आसानी से> 70% ipsiversive के घुमाव> 95% striatum lesioned 27 में dopamine कमी के संकेत के साथ सहज घूर्णी व्यवहार की माप से अनुमान लगाया जा सकता है. Striatal dopamine के स्तर की मात्रा का ठहराव संख्या में substantia nigra pars compacta वें पॉजिटिव कोशिकाओं की quantificiation striatal dopamine कमी की तुलना में विस्तार के लिए सबसे सही माप है, के रूप में यह striatal में डोपामाइन 28 के स्तर के प्रत्यक्ष माप प्रदान करता है. यह देखते हुए कि इस प्रोटोकॉल इंजेक्शन के स्थल (MFB) और अच्छी तरह से विशेषता एकतरफा 6 OHDA - lesioned पार्किंसंस रोग 1,4 के चूहे मॉडल के घाव विकास की लंबाई (21 दिन) reproduces है, यह वें माना जा सकता हैइस माउस मॉडल में, चूहे मॉडल के साथ के रूप में, स्मरण दिलाता है औषध विज्ञान और मस्तिष्क circuitry में परिवर्तन पार्किंसंस रोग के साथ रोगियों में मनाया. इस प्रकार, इस विधि ट्रांसजेनिक चूहों में पार्किंसंस रोग के लक्षण मॉडल पैदा करने का एक साधन प्रदान करता है. यह देखते हुए कि ट्रांसजेनिक चूहों हमें vivo में अणुओं और प्रोटीन की भूमिका को समझने के लिए आणविक में, सेलुलर और पूरे ऊतक के स्तर के माध्यम से, इन दो तकनीकों के संयोजन के लिए अनुमति देने के लिए अत्यंत शक्तिशाली उपकरण हैं आगे आणविक और सेलुलर तंत्र के वर्णन में अत्यंत उपयोगी साबित होगा पार्किंसंस रोग के लक्षणों की अंतर्निहित पीढ़ी.

Cenci पहले पार्किंसंस रोग के एक एकतरफा माउस 6 - OHDA - lesioned पैदा करने के लिए किया गया है एक समान विधि वर्णित है, तथापि, यह एक उच्च मृत्यु दर के साथ संबद्ध किया गया था अधिक से अधिक 21 दिन 6 की पोस्ट सर्जरी निम्नलिखित इंजेक्शन जीवित पशुओं का केवल 14% के साथ, 11 MFB में OHDA. कई poss के प्रोटोकॉल में मृत्यु दर की कमी के लिए ible स्पष्टीकरण यहाँ वर्णित. सबसे पहले, stereotaxic इस प्रोटोकॉल में चुना समन्वय इंजेक्शन सुई पूरी तरह से hypothalamus के बचने के लिए अनुमति देते हैं. माउस के बाद से hypothalamus के बहुत छोटा है, इस संरचना के लिए किसी भी क्षति माउस के खाने और पीने केन्द्रों को प्रभावित करता है, जानवर के लिए वजन कम करने के लिए और निर्जलित बनने के कारण हो सकता है, और अंततः मर जाते हैं. दूसरे, यहां वर्णित प्रोटोकॉल, 6 OHDA (3mg) की एक ही एकाग्रता Lundblad और 11 सहयोगियों द्वारा अध्ययन के रूप में उपयोग किया गया था, तथापि, यह एक धीमी जलसेक के साथ एक छोटी मात्रा (0.2ml 1ml की तुलना में) में दिलाई दर (0.5ml/min 0.1ml/min तुलना करने के लिए). मात्रा छोटे और धीमी जलसेक दर MFB आसपास के ढांचे को कम से कम क्षति सुनिश्चित करते हैं. अंत में इंजेक्शन की सुई का व्यास काफी छोटे (0.33 बनाम 50mm) है, जो मस्तिष्क की संरचना को नुकसान कम से कम के रूप में सुई के मस्तिष्क के माध्यम से पेट के बल यात्रा.

ontent "Cenci भी एकतरफा 6 OHDA के घावों के साथ 6 - OHDA 11 striatum में अंतःक्षिप्त किया जा रहा है, पैदा करने के लिए किसी अन्य विधि का वर्णन चूहों में किया गया है 6 OHDA striatal इंजेक्शन के बाद वर्णित है, एक कम के स्तर में यह परिणाम dopamine का नुकसान, जो चूहों के बीच चर है.

एक अंतिम विचार है कि खाते में लिया जाना चाहिए चूहों के तनाव के संभावित प्रभाव है. यह अच्छी तरह से प्रलेखित किया गया है तनाव dopamine कमी के MPTP, जो भी डोपामिनर्जिक 29 nigro-striatal मार्ग की चयनात्मक कोशिका मृत्यु का कारण बनता है की प्रणालीगत प्रशासन के बाद सफलता पर एक नाटकीय प्रभाव पड़ता है. जबकि प्रजातियों के बीच यह अंतर 6 OHDA प्रशासन के बाद चूहों में होने के प्रतीत नहीं होता, यह संभव है कि यह चूहों में 6 OHDA घाव की सफलता का निर्धारण करने में एक कारक हो सकता है.

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Disclosures

लेखकों का खुलासा करने के लिए के लिए कुछ भी नहीं है.

Acknowledgments

इस काम के विदेश मामलों के विभाग और अंतर्राष्ट्रीय व्यापार (कनाडा की सरकार), विश्वविद्यालय टोरंटो कनॉट फंड, अभिनव, NSERC, Krembil फाउंडेशन और इलाज पार्किंसंस ट्रस्ट के लिए कनाडा फाउंडेशन के द्वारा समर्थित किया गया.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
desipramine HCl Sigma-Aldrich D125 25mg/kg
pargyline HCl Sigma-Aldrich P8013 5mg/kg
6-OHDA HBr Sigma-Aldrich H116 3mg / mouse
stereotaxic Frame Kopf Instruments Model 900
mouse ear cups Kopf Instruments Model 921 Zygoma Ear Cups
mouse incisor bar Kopf Instruments Model 923B
mouse anaesthesia mask Kopf Instruments Model 923B
priming kit (containing 250ml syringe) Hamilton Co PRMKIT 81120
RN compression fitting kit (1 mm) Hamilton Co 55750-01
PEEK tubing from RN compression fitting kit< (1/16th inch) Hamilton Co 55751-01
dual small hub RN Coupler Hamilton Co 55752-01
luer to small hub RN adaptor Hamilton Co 55753-01
1ml 25S syringe model 7001KH Hamilton Co 80100
*33G removable needle (RN) pack of 6. . Custom 1 inch with 45<° bevel Hamilton Co 7803-05
Scissors Fine Science Tools 14084-08
Scalpel Fine Science Tools 10003-12
Scalpel blades Fine Science Tools 10035-20
Forcep Fine Science Tools 11608-15
Hemostats Fine Science Tools 13004-14
Isoflurane Abbott Laboratories 02241315 2-3%
Suters (Vicryl 4.0) Syneture SS-683
Steriliser Fine Science Tools 18000-45
Infusion Pump Harvard Apparatus PhD 22/2000
Needles (27G) BD Biosciences 305109
Needles (25G) BD Biosciences 305127
Syringes (1ml) BD Biosciences 309692
Anaesthesia trolley LEI medical M2000
Baytril CDMV, St. hyacinthe, QC 102207
Lidocaine CDMV, St. hyacinthe, QC 3914
Betadine solution CDMV, St. hyacinthe, QC 19955

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References

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चिकित्सा अंक 60 माउस 6 OHDA पार्किंसंस रोग औसत दर्जे का अग्रमस्तिष्क बंडल एकतरफा
एकतरफा-lesioned 6 OHDA पार्किंसंस रोग के माउस मॉडल का विकास
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Thiele, S. L., Warre, R., Nash, J.… More

Thiele, S. L., Warre, R., Nash, J. E. Development of a Unilaterally-lesioned 6-OHDA Mouse Model of Parkinson's Disease. J. Vis. Exp. (60), e3234, doi:10.3791/3234 (2012).

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