Summary
Основные методы, используемые в оценке
Abstract
Вульвовагинального кандидоза (ВВЦ), вызванного видами Candida, является грибковой инфекцией нижних половых путей женщины, которая затрагивает около 75% здоровых женщин в течение репродуктивного возраста 18,32-34. Предрасполагающие факторы включают антибиотик использования, неконтролируемого диабета и нарушение репродуктивных гормонов в связи с беременностью, оральных контрацептивов или гормональной терапии 33,34. Периодические ВВЦ (RVVC), определяется как три и более эпизодов в год, влияет на отдельном от 5 до 8% женщин, не имеющих предрасполагающие факторы 33.
Экспериментальной модели мышей ВВЦ была создана и используется для изучения патогенеза и слизистых ответ принимающей Candida 3,4,11,16,17,19,21,25,37. Эта модель также была использована для испытаний потенциальной противогрибковое лечение в естественных условиях 13,24. Модель предполагает, что животные содержаться в состоянии выбрать для pseudoestrusimal Candida колонизации / инфекции 6,14,23. В таких условиях, затравленных животных будет обнаружено вагинальных грибковых нагрузку на несколько недель или месяцев. Прошлые исследования показывают чрезвычайно высокую параллель между моделью человека и животных инфекция относительно иммунологических и физиологических свойств 3,16,21. Различия, однако, в том числе отсутствие Candida в качестве нормальной влагалищной флоры и нейтральный рН влагалища у мышей.
Здесь мы демонстрируем ряд ключевых методов в модели вагинит мыши, которые включают вагинальные прививки, быстрый сбор образцов вагинального, оценка вагинальных грибковых бремя, и тканевые препараты для сотовых добычи / изоляции. Далее следуют представитель результаты для трехсторонних промывания влагалища жидкости, грибковые бремя, и осушения лимфатических узлов дает лейкоцитов. При использовании анестетиков, промывание образцы могут быть собраны в нескольких точках времени на тех же мышей для продольной оценкиинфекции / колонизации. Кроме того, эта модель не требует иммуносупрессивных препаратов для инфицирования, что позволяет иммунологических исследований при определенных условиях хозяина. Наконец, модель и каждая техника введенные здесь, может привести к использованию методологии для изучения других инфекционных заболеваний нижних женских половых путей (бактериальные, паразитарные, вирусные) и соответствующего местного или системного защиту хозяина.
Protocol
1. Вагинальные инокуляции Candida Albicans
- За три дня до прививки, в то время как сдерживающее животных подвергать живот, вводят 100 мкл кунжутное масло, содержащее 0,1-0,5 мг β-эстрадиола подкожно в нижнюю часть живота. Advance иглу от 5 до 10 мм сбоку от кожи, чтобы минимизировать утечки из места инъекции.
Подкожного введения эстрогена в нижней части живота является оптимальным в данной модели из-за непосредственной близости от половых путей. Эффективные дозы могут различаться в зависимости от штамма мыши, возраст или эстроген производных. В предыдущих исследованиях с использованием CBA-J (H-2 κ), C3H/HeN (H-2 κ), C57BL / 6 (H-2 б), BALB / C (H-2 г), DBA / 2 (H- 2 г), SJL (H-2 с) мышей на 6-8 недельного возраста, 0,1 мг/100 мкл был найден эффективный свидетельствует утолщение стенки влагалища, снижение вагинальной слизи иувеличилась эпителиальных шелушение клеток. Мыши выше получавших эстроген при этой концентрации выставки соответствует вагинальной колонизации Candida. Для прививки у мышей других штаммов и возрастов, пилотное исследование рекомендуется для обеспечения эффективности эстрогенов при измененных условиях и увеличение дозы эстрогена, если необходимо.
Эстроген решение следует приготовить свежую каждый раз в день инъекции. Для обеспечения полной растворимости эстрогена в кунжутное масло, тщательно перемешать раствор с помощью миксера вихря и тепло с перерывами при температуре 37 ° C. Повторите инъекции еженедельно в течение периода исследования. - Для подготовки посевной, добавьте loopful С. Albicans blastoconidia из последних подготовке субкультуры на Сабуро-агар декстрозы (ПДД) в 10 мл Phytone-пептонном бульоне дополнен с 0,1% глюкозы. Инкубируйте бульон культуры стационарной фазы в течение 18 ч при температуре 25 ° С в пожимая водяной бане.
- После инкубации, собирать йэлектронной бульон культуры в 15 мл коническую трубку и центрифуги при 800 мкг в течение 5 мин. Вымойте гранул в два раза стерильной PBS.
- Перечислять жизнеспособной blastoconidia на гемоцитометра по трипанового исключения синий краситель. Отрегулируйте концентрацию клеток до 2,5 х 10 6 / мл (или желаемого посевной концентрации) в стерильном PBS.
- Для стабилизации мыши, удерживая основания хвоста двумя пальцами и поднимите бедра вверх так, чтобы вход во влагалище лица по отношению к вам (рис. 1А). Это идеально, если мышь помещается на плоскую поверхность тертым (например, клетки сверху), так что мышь может обеспечить устойчивость к хвосту сдержанность.
- Внесите 20 мкл (или желаемую громкость не должна превышать 20 мкл) посевного подвески путем введения пипетки около 5 мм в глубину вагинального просвета (рис. 1б). Заполните этот шаг, как быстро и нежно, как свести к минимуму бедствия в мышь.
2. Вагинальные промываний
- После эвтаназии (или анестезия), чстарые мыши в сторону понижения на основании хвоста двумя пальцами так, чтобы вход во влагалище становится подвергается.
- Промывание вагинального просвета путем введения 100 мкл стерильной PBS с повторными стремление и агитации с кончика пипетки. Кончика пипетки может засориться с ячейками. В этом случае обойтись без препятствий клетки и продолжают lavaging с остальными PBS во влагалище. Сбор лаваже в микроцентрифужных трубки.
- Кроме того, вагинальных орошений могут быть выполнены на мышах с наркозом изофлуран анестезии летучими. Для этого, разоблачить мышей испаряется изофлуран пока они полностью не седативные (~ 30 сек.). Держите мышь в сторону понижения на основании хвоста и аккуратно промывание просвета вагинального, используя 50 мкл стерильной PBS. Убедитесь в том, чтобы избегать резких агитации с кончика пипетки, чтобы минимизировать травмы влагалища во время этой процедуры. Sedated мышей должна оправиться от наркоза в течение 30 секунд контакта с окружающим воздухом.
Изофлюранаможет быть испаряется использованием изофлуран испаритель и O 2 (предпочтительно) или стандартная система падение закрытой камере без анестезии испаритель системы (требуется тщательный мониторинг животных в то время как седативные, чтобы избежать расстройства дыхания).
Вагинальные смывов на анестезию мышей должна быть методом выбора для продольных образцов на промывание же мышей. Последовательный lavaging не влияет на оценку грибковых нагрузку с течением времени 41.
- Для влажных монтажа подготовку, передачу 10 мкл лаваже на предметное стекло и наблюдать на 400-1000x увеличения с помощью световой микроскопии. Кроме того, сотовые доли лаваже могут быть окрашены для изучения клеток и ядерной морфологии. Для мазков подготовку, передачу 10 мкл лаваже на предметное стекло и осторожно распространяется, используя внешнюю стену кончика пипетки. Заповедник мазок образцов с фиксатором CytoPrep и пятна по стандартной методике Папаниколау (Пап-мазка). Соблюдать при 400-кратном увеличении с помощью световой микроскопии.
3. Количественная оценка вагинальных грибковых бремя
- В 96-круглым дном пластины, передача лаваже в одну лунку в верхнем ряду и 180 мкл стерильной PBS на следующие 5 скважин этого столбца (снижение на табличке).
- Сделать 1:10 серийные разведения промывания влагалища жидкость путем передачи 20 мкл жидкости к следующему хорошо в столбце. Тщательно перемешать повторными стремление перед каждой передачи. Серийные разведения до 12 промывание образцов (один полный горизонтальный ряд) могут быть выполнены одновременно с помощью 12-канальной пипетки.
- Начиная с самой низкой разведении, передаче 10 мкл образца на Сабуро-агар декстрозы (ПДД). Покрытие до 36 образцов могут быть выполнены на 1 пластины с использованием ПДД подготовлен в квадратных чашки Петри с сеткой и регулируемые пипетки многоканальный интервал.
- Перечислять колониеобразующих единиц (CFUs) после инкубации при 34 ° С Пили 48 ч.
4. Вагинальные добычи ткани
- После процедуры промывания влагалища, лежал эвтаназии мыши на его спине и насыщают паховой области с 70% этанола. Использование пара щипцов, поднимите мочевого отверстия вверх так, чтобы вход во влагалище становится подвергается.
- Вставьте пару изогнутых щипцов в вагинальной полости и найти шейку матки. При сохранении надежного сцепления с щипцы, извлечение шейки матки через вагинальные полости (рис. 2A-C).
- Акцизный влагалища у основания во влагалище, а затем удалить шейку матки из влагалища с хирургическими ножницами. Имейте в виду, что вагинальные ткани инволютированной (внутренний эпителий-стороне влагалища подвержена внешним). Ткань может быть либо сбоку перевернутого сохранить исходную ориентацию во влагалище или открыт в лист, делая боковой разрез.
Подакцизные ткани влагалища могут быть использованы для: 1) лимфоцитов коллажа после удаленияnase пищеварения (~ 1 × 10 4 / мышь) 40, 2) эпителиальных клеток изоляции следующие dispase пищеварения (~ 5 × 10 4 / мышь) 28, 3) замороженные или парафин подготовки гистологических анализов 25.
5. Поясничный иссечение лимфатических узлов
- После процедуры промывания влагалища, лежал эвтаназии мыши на его спине и насыщают живота с 70% этанола. Сделать боковой разрез, начиная с нижней части живота к груди и выставить внутренних органов. Используя пару щипцов в обеих руках, двигаться кишечника вверх так, чтобы центральные кровеносные сосуды становятся видимыми.
- Найдите нижней полой вены и брюшной аорты. Как правило, пары поясничных лимфатических узлов может быть идентифицирован, прилегающих к брюшной аорты, расположенного примерно на полпути между происхождении почечной и общей подвздошной артерии 39. Эти лимфатические узлы могут быть визуально отличить от жировой ткани упругими текстурыи легче и менее прозрачным в цвете по сравнению с жировой ткани (рис. 3). Эти лимфатические узлы заметно больше у инфицированных животных по сравнению с uninoculated животных.
- Акцизный лимфатических узлов, помещая microforceps в узле, а затем подтянуть аккуратно отделить от окружающей ткани.
6. Выделение лимфоидных клеток в одноклеточных суспензий
- Передача лимфатические узлы на экране стерильной проволочной сетки (примерно 3 х 3 см 2 размера) помещается внутри стерильные стеклянные чашки Петри, содержащей ~ 10 мл сбалансированного солевого раствора Хэнкса (HBSS) (рис. 4).
- В чашке Петри слегка наклонены, нажмите лимфатических узлов против экран с головой поршень шприца. Убедитесь в том, чтобы разбить все лимфатические узлы так, что клеточное содержимое узлов проходят через экран в то время как не-клеточных компонентов узлов (то есть, мембраны, стромы, жир), остаются на экране.
- Используя тот же поршень и шприца, аспирацию тон HBSS, содержащих клетки. Вымойте экран с ~ 5 мл HBSS и собирать остатки жидкости в 15 мл коническую трубку.
- Центрифуга при 800 мкг в течение 10 мин. Аспирируйте любые жировые отложения в верхней части жидкости с пипеткой до отбрасывая жидкости. Промыть осадок клеток в три раза с HBSS. Ресуспендируют гранул в 1 мл HBSS и перечислить жизнеспособных клеток трипанового исключения синий краситель.
7. Представитель Результаты:
Клеточных фракциях промывания влагалища жидкость от> 4-дневный прививку мышей обычно состоят из Candida, эпителиальные клетки и клеточные инфильтраты (рис. 5). По мокрой монтажа микроскопии, Candida может быть визуально определить наличие гиф, а также дрожжи (рис. 5А). Мазок препаратов промывание влагалища жидкости могут быть окрашены по Папаниколау технику для изучения эпителиальные клетки и проникают лейкоциты, из которых основной клетки нейтрофилов, определенные три-нуклоновар долях (рис. 5В). Очень немногие нейтрофилы, если таковые имеются, обнаруженных в uninoculated мышей (рис. 5С) 41.
Например вагинальных грибковых бремя показано на рисунке 6. Промывание влагалища жидкость, полученная в определенные моменты времени культивировали в течение КОЕ перечисление (рис. 6А). Вагинальные колонизации / инфекции Candida сохраняется в течение недели в эстроген обработанных прививку мышей (рис. 6Б), а Candida не может установить вагинальные колонизации, не связанных с эстроген-лечение прививку мышей (рис. 6С). Эстроген обработанных uninoculated мышей остаются отрицательными для Candida в течение всего времени (данные не представлены). Кроме того, вагинальных орошений можно выполнять как в свое время на отдельных мышей в каждый момент времени или продольно в той же мыши под анестезией.
Поясничных лимфатических узлов первичный дренаж лимфатических узлов половых путей и наиболее актуальные сайт, чтобы оценить для системного иммунного ответа на вагинальные проблемы. NOTE, что эти лимфатические узлы могут стать расширен в прививку мышей, когда они обычно появляются очень малы по uninoculated мышей. Лейкоцитов сотовой восстановление обычно составляет от 8 × 10 5 / uninoculated мыши до 5 × 10 6 / прививку мыши. В дополнение к поясничного лимфатических узлов, паховые, подколенные и брыжеечные лимфатические узлы также могут быть использованы.
Рисунок 1. Вагинальные инокуляции Candida. ) Мыши сдержанный для прививки. Мышь находится на вставке клетки проволоки и проведен основания хвоста, слегка вверх, чтобы поднять ноги и подвергать влагалища. Бедра мыши может быть стабилизирована с той же рукой, он пытается сопротивляться хвост сдержанность. Б) внедрение посевной в вагинальной полости. Кончика пипетки аккуратно вставлены около 5 мм в глубину вагинального просвета. Подвески посевной затем на хранение.
Рисунок 2. Вагинальный извлечения тканей. АВ) Добыча шейки матки. Шейка матки расположена с изогнутым пинцетом и подвергаются наружу через вагинальный полости. Выйдя из вагинальной полости, шейке матки далее вытащил наружу, чтобы полностью раскрыть влагалище. C) Добыча влагалище. Влагалище вырезали из вульвы с помощью ножниц. Как только индивидуальный удалить шейку матки из влагалища.
Рисунок 3. Определение поясничных лимфатических узлов. Расположение поясничного лимфатических узлов среди окружающих органов / кровеносных сосудов в районе таза указывается. , Брюшной аорты. B, мочевого пузыря. С, общей подвздошной артерии. Я, кишечника. L, печени. R, прямую кишку. S, селезенки. U, матки.
Рисунок 4. Поясничных лимфатических узлов размещены на экран сетка. Лимфатические узлы объединяются на экран помещается в чашку Петри с HBSS. Лимфатические узлы прижимается экран с поршень шприца для получения лимфоидных клеток в одноклеточных суспензий.
Рисунок 5. Сотовая фракций промывания влагалища жидкости из прививку мышей. ) Мокрая монтажа и Б) Мазок Папаниколау препаратов промывание влагалища проб 4 дня после инокуляции и С) из uninoculated мышей. Изображения показываются в 1000 × () или 400 × (B, C) увеличении. Вставить в B показывает, ядерная морфология вагинальные нейтрофилы при 1000 ×. Candida дрожжей (Y) и гифы (H), эпителиальные клетки (ЕС) и neutrohils (N), указаны.
Рисунок 6. Detectионных вагинальных грибковых бремя. А) представитель C. Albicans колоний, выросших на тарелку ПДД. Аккуратные (N) промывание образцов из шести различных прививку мышей (верхний ряд) были последовательно разбавлены и культивировали в течение перечисления КОЕ. Б) Количественная оценка вагинальных грибковых бремя в эстроген обращению и С), не эстроген-мышей. CFU/100 мкл промывание жидкости из прививку мышей оценивалась на указанные моменты времени.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Экспериментальной модели мышей Candida вагинит был создан и исторически использовались в течение последних нескольких десятилетий исследования слизистой оболочки ответ принимающей Candida, а также для тестирования противогрибковое лечение 3,4,11,13,16,17,19,21,24, 25,37. Протоколы, представленные здесь включать эффективные и менее трудоемкие методы, и, кажется, одна из самых оптимизированная модель системы Candida вагинит описанных на сегодняшний день. Эти методы позволяют быстро количественного грибковых бремени и коллекция вагинальных образцах. Кроме того, предыдущие исследования тестирования нескольких haplotypic линий мышей (п = 13) и различные моменты времени после заражения показали одинаковый уровень изменчивости грибковых бремя и принимающие ответы на вагинальный колонизации Candida 2,6,41. Таким образом, эта модель может быть адаптирована к существующим протоколам без ограничения по мыши штаммов или длительности инфекции. Тем не менее, следует признать, чтоизменчивости в вагинальных грибковых бремя может быть высокой, между животными при той же посевной (рис. 6Б). Существует подтверждающих, что изменчивость возникает из-за разной степенью ранней приверженности вагинального эпителия 41. Поэтому, 7-10 мышей / группу предлагается для статистических целей.
Изменчивость в вагинальной грибковой нагрузки также свидетельствует между различными штаммами C. Albicans, предполагая, что не все штаммы C. Albicans имеют возможности так же колонизировать мыши влагалища. Например, С. Albicans 3153A (лабораторный штамм), используемые в настоящем протоколе, как сообщается, показывают более высокие, чем вагинальный колонизации SC5314 (клинический изолят), где высшие посевной (> один журнал) будут обязаны получить эквивалентные уровни вагинальных грибковых бремя видели с 3153A 27. На самом деле, сильно варьирует вагинальные колонизации нескольких клинических изолятов было зарегистрировано 36. Таким образом, забота должна быть Takан при определении оптимальных для каждой посевной C. Albicans напрягаться, чтобы обеспечить последовательное колонизации у мышей. Как правило, средняя CFUs от 5 х 10 4 до 5 х 10 5 / 100 мкл лаваже должны быть обнаружены для последовательной колонизации. Для оценки вагинальных грибковых бремя, количественное CFUs по промываний подходит для этой модели, как Candida blastoconidia и гиф обычно не проникают за пределы поверхностного слоя эпителия влагалища. Наши предыдущие гистологической оценке после промывания ткани влагалища редко показал остаточную Candida 25,41. Тем не менее, мы признаем возможность того, что гифы может быть miscounted, как они растут, как одну колонию на агар пластины и может не отражать точную грибковых бремя. Как альтернативный метод КОЕ перечисления, недавно разработанный метод визуализации в естественных условиях, как сообщается, успешно оценки вагинальной грибковой нагрузки при использовании генетически модифицированных люминесцентных C. Albicans 9,29. Кроме того, протокол может быть изменен, чтобы побудить C. glabrata колонизации в диабетических животных 15,20. На сегодняшний день, мышь модели для других не-C. Albicans вызванных вагинит не сообщалось.
Эстроген администрация имеет решающее значение для этой модели, инициируя надежные вагинальные колонизации Candida 6,14,23. В дополнение к подкожной инъекции эстрадиола в кунжуте подвески маслом, инъекции водорастворимых эстрадиола в PBS и внутрикожной имплантации с контролируемым высвобождением эстрадиола гранул являются альтернативные методы введения эстрогенов и были заняты в других моделях мыши на женских половых инфекций 10 , 35. Требование высокой эстрогена в этой модели можно объяснить двумя физиологическими факторами. Во-первых, повышенный эстроген способствует расслоению вагинального эпителия 5,8,30. Утолщение эпителия от роста эпителиальной пролиферации клеток могут всевл Candida, чтобы получить лучшее соблюдение стенки влагалища и последующей колонизации. Во-вторых, вагинальных эпителиальных клеток, как известно, имеют высокое содержание гликогена. Увеличился ткани результаты уровень эстрогена в осаждения гликогена в стенки влагалища 30. Повышенные гликогена в вагинальном микросреды, в свою очередь позволит Candida процветать, обеспечивая дополнительные питательные вещества. Предыдущая иммунной анализы показали, что экзогенные эстрогены не влияют ячейки экспрессии молекул адгезии 40. Недостатком лечения животных с экзогенными эстрогенами, что повышение эстрогенов также был известен по содействию чрезмерно быстрый рост вагинальных синантропных флоры 30. Так как состав флоры могут существенно различаться между животными, это может добавить переменную, где синантропных организмов могут повлиять на рост Candida или модулировать хоста ответов. В рассмотрении этого вопроса, модель требует эстрогена обработанных контроля (uninoculated) животные должны быть включены ввсе эксперименты и проанализированы параллельно.
В этой модели мыши, эффективность противогрибковых агентов могут быть точно оценены протоколы, описанные в настоящем документе, который может обеспечить решающее значение в естественных условиях тестирования, ведущих к развитию потенциала терапии для клинического использования. На самом деле, надежный характер модель обеспечивает хорошие признаки клинической эффективности. В дополнение к использованию эстрогенов, нейтральный рН влагалища у мышей способствует росту гифы, патогенные формы Candida наблюдается во всех прививку мышей. Как и в клинических наблюдениях, надежные вагинальные миграции нейтрофилов происходит в подмножество мышей, не затрагивая грибковых бремя 31,41. Наличие нейтрофилов является видным у женщин в период симптоматическое вагинит и, похоже, параллельно мышей после прививки 12,41. Поскольку другие клинические симптомы (например, зуд, отек), не может быть точно измеримых на мышах, оценка вагинальных нейтрофиловявляется простым, но надежным признаком воспаления (симптомы) в этой модели.
Микроскопии промывание влагалища жидкости показано на рисунке 5, регулярно проводится в нашей лаборатории для оценки колонизации Candida и вагинальные воспаления. Более того, гиф забил также может быть использован в качестве меры инфекции. После этого, клеточных и растворимых фракций лаваже может быть сохранена и крио-архив для будущего анализа. Следует отметить, что выгодно особенность протокола в том, что вагинальные промываний может быть выполнен в продольном же мыши под анестезией. Наши предыдущие исследования подтвердили, что продольная оценка не влияет на оценку вагинальных грибковых бремя. Такой подход особенно выгодно в тех случаях, когда продольные анализы инфекции лучшего.
Наконец, мы разработали менее инвазивный метод иссечения влагалище. Этот эффективный и быстрый метод не требует разреза вживота или каких-либо внутренних органов, оставляя остальную часть половых путей без изменений. Еще одной полезной особенностью данной модели является отсутствие потребности в иммуносупрессивных препаратов инициировать Candida колонизации. Это особенно важно, потому что для поддержания естественного иммунного статуса хозяина из важнейших аспектов иммунологических исследований и принимающих ответ на микробную вызов. Таким образом, тканей и клеток, выделенных на эти методы могут быть применены в различных в пробирке иммунной анализов.
В заключение, мы предлагаем несколько важных функций и представительства Результаты экспериментальной модели вагинального кандидоза. В дополнение к С. Albicans вызванных вагинит, инфекции, вызванные другими возбудителями женского нижних отделов половых путей, в том числе гонореи Neisseria, влагалищной трихомонады и вирус простого герпеса были изучены с помощью мыши моделей, в которых организмы интравагинально введенных в гормон мышей 1,7,10,22,26,35,38. Поэтому методы, которые являются полезными для исследований, связанных с Candida вагинит может быть применена к и, возможно, заранее методологии для изучения патогенеза и иммунный ответ на другие инфекционные заболевания женских нижних половых путей.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Нет конфликта интересов объявлены.
Acknowledgments
Эта работа была поддержана R01 AI32556 (NIAID, Национальный институт здравоохранения). Эта работа также была частично поддержана Луизиана вакцины Центр и Юг Луизиана Институт исследований в области инфекционных болезней поддержке Луизиана Совет регентов.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Female CBA/J mice | Charles River Laboratories | 01C38 | 5-6 weeks of age |
| Candida albicans (3153A) | National Collection of Pathogenic Fungi, UK | NCPF3153 | |
| Sesame oil | Sigma-Aldrich | S3547 | D–s not need to be pre-sterilized before use |
| Β-estradiol 17-valerate | Sigma-Aldrich | E1631 | 0.1-0.5mg in sesame oil |
| Phytone peptone | BD Biosciences | 211906 | Supplement with 0.1% glucose |
| Trypan blue solution | Sigma-Aldrich | T8154 | |
| Sabouraud dextrose agar | BD Biosciences | 211584 | |
| Collagenase type IV | Sigma-Aldrich | C5138 | 0.25% |
| Dispase | Invitrogen | 17105-041 | 1.7 U/ml |
| Wire mesh screens | TWP | 060X060S0065W36T | No. 60 mesh, stainless |
| Hanks’ balanced salt solution | Invitrogen | 24020-117 | |
| CytoPrep fixative | Fisher Scientific | 12-570-10 | Preserves smear slides |
| Papanicolaou stain EA-65 | EMD Millipore | 7054X-85 | |
| Papanicolaou stain OG-6 | EMD Millipore | 7052X-85 | |
| Harris’ Alum hematoxylin | EMD Millipore | 638A-85 | |
| Isoflurane | Baxter Internationl Inc. | NDC 10019-773-60 | Used with isoflurane vaporizer or in a drop system closed anesthetic chamber |
References
- Abraham, M. C. Inducible immunity to Trichomonas vaginalis in a mouse model of vaginal infection. Infect. Immun. 64, 3571-3571 (1996).
- Black, C. A. Major histocompatibility haplotype does not impact the course of experimentally induced murine vaginal candidiasis. Lab. Anim. Sci. 49 (6), 668-668 (1999).
- Black, C. A. Acute neutropenia decreases inflammation associated with murine vaginal candidiasis but has no effect on the course of infection. Inf. Immun. 66, 1273-1273 (1998).
- Black, C. A. Increased severity of Candida vaginitis in BALB/c nu/nu mice versus the parent strain is not abrogated by adoptive transfer of T cell enriched lymphocytes. J. Reprod. Immunol. 45, 1-1 (1999).
- Buchannan, D. L. Role of stromal and epithelial estrogen receptors in vaginal epithelial proliferation, stratification, and cornification. Endocrinology. 139 (10), 4345-4345 (1998).
- Clemons, K. V. Genetic susceptibility of mice to Candida albicans vaginitis correlates with host estrogen sensitivity. Infect. Immun. 72, 4878-4878 (2004).
- Conrady, C. D., Halford, W. P., Carr, D. J. Loss of the type I interferon pathway increases vulnerability of mice to genital Herpes simplex virus 2 infection. J. Virol. 85 (4), 1625-1625 (2011).
- Cunha, G. R., Cooke, P. S., Kurita, T. Role of estromal-epithelial interaction in hormonal responses. Arch Histol Cytol. 67 (5), 417-417 (2004).
- Enjalbert, B. A multifunctional, synthetic Caussia princeps luciferase reporter for live imaging of Candida albicans infections. 77 (11), 4847-4847 (2009).
- Feinen, B. Critical role of Th17 responses in a murine model of Neisseria gonorrhoeae genital infection. Mucosal Immunol. 3 (3), 312-312 (2010).
- Fidel, P. L. Distinct protective host defenses against oral and vaginal candidiasis. Med. Mycol. 40, 359-359 (2002).
- Fidel, P. L. An intravaginal live Candida challenge in humans leads to new hypotheses for the immunopathogenesis of vulvovaginal candidiasis. Infect. Immun. 72, 2939-2939 (2004).
- Fidel, P. L., Cutright, J. L., Sobel, J. D. Efficacy of D0870 treatment of experimental Candida vaginitis. Antimicrob. Agents. Chemother. 41, 1455-1455 (1997).
- Fidel, P. L., Cutright, J. L., Steele, C. Effects of Reproductive hormones on experimental vaginal candidiasis. Infect. Immun. 68, 651-651 (2000).
- Fidel, P. L. A murine model of Candida glabrata vaginitis. J. Inf. Dis. 173, 425-425 (1996).
- Fidel, P. L. Analysis of vaginal cell populations during experimental vaginal candidiasis. Inf. Immun. 67, 3135-3135 (1999).
- Fidel, P. L., Lynch, M. E., Sobel, J. D. Candida-specific cell-mediated immunity is demonstrable in mice with experimental vaginal candidiasis. Infect. Immun. 61, 1990-1990 (1993).
- Fidel, P. L., Sobel, J. D.
- Fidel, P. L., Sobel, J. D. Murine Models of Candida Vaginal Infections, In Experimental models in antimicrobial chemotherapy. Zak, O., Sande, M. , 2nd ed, Academic Press Ltd. London, UK. 741-748 (1999).
- Fidel, P. L., Vazquez, J. A., Sobel, J. D. Candida glabrata: Review of epidemiology, pathogenesis, and clinical disease with comparison to C. albicans. Clin. Microbiol. Rev. 12, 80-80 (1999).
- Fulurija, A., Ashman, R. B., Papadimitriou, J. M. Neutrophil depletion increases susceptibility to systemic and vaginal candidiasis in mice, and reveals differences between brain and kidney in mechanisms of host resistance. Microbiology. 142, 3487-3487 (1996).
- Gill, N. NK cells require type I IFN receptor for antiviral responses during genital HSV-2 infection. Cell Immunol. 269 (1), 29-29 (2011).
- Hamad, M., Abu-Elteen, K. H., Ghaleb, M. Estrogen-dependent induction of persistent vaginal candidosis in naive mice. Cell. Immunol. 47 (7), 304-304 (2004).
- Hamad, M. Utility of the oestrogen-dependent vaginal candidosis murine model in evaluating the efficacy of various therapies against vaginal Candida albicans infection. Mycoses. 49 (2), 104-104 (2006).
- LeBlanc, D. M., Barousse, M. M., Fidel, P. L. A role for dendritic cells in immunoregulation during experimental vaginal candidiasis. Infect. Immun. 74, 3213-3213 (2006).
- McGrory, T., Garber, G. E. Mouse intravaginal infection with Trichomonas vaginalis and role of Lactobacillus acidophilus in sustaining infection. Infect. Immun. 60, 2375-2379 (1992).
- Naglik, J. R., Fidel, P. L., Odds, F. C. Animal models of mucosal Candida infection. FEMS. Microbiol. Lett. 283 (2), 129-129 (2008).
- Nomanbhoy, F. Vaginal and oral epithelial cell anti-Candida activity. Inf. Immun. 70, 7081-7081 (2002).
- Pietrella, D. A beta-glucan-conjugate vaccine and anti-beta-glucan antibodies are effective against murine vaginal candidiasis as assessed by a novel in vivo imaging technique. Vaccine. 28 (7), 1717-1717 (2010).
- Redondo-Lopez, V., Cook, R. N., Sobel, J. D. Emerging role of Lactobacilli in the control and maintenance of the vaginal bacterial microflora. Rev Infect Dis. 12 (5), 856-856 (1990).
- Saavedra, M. Local production of chemokines during experimental vaginal candidiasis. Inf. Immun. 67, 5820-5820 (1999).
- Sobel, J. D. Pathogenesis and epidemiology of vulvovaginal candidiasis. Ann. N. Y. Acad. Sci. 544, 547-547 (1988).
- Sobel, J. D. Pathogenesis and treatment of recurrent vulvovaginal candidiasis. Clin. Infect. Dis. 14, Suppl 1. S148-S153 (1992).
- Sobel, J. D. Vulvovaginal candidiasis: Epidemiologic, diagnostic, and therapeutic considerations. Am. J. Obstet. Gynecol. 178 (2), 203-203 (1998).
- Song, W. Local and humoral immune responses against primary and repeat Neisseria gonorrhoeae genital tract infections of 17β-estradiol-treated mice. Vaccine. 26, 5741-5741 (2008).
- Taylor, B. N. In vivo virulence of Candida albicans isolates causing mucosal infections in people infected with the human immunodeficiency virus. J. Infect. Dis. 182, 955-955 (2000).
- Taylor, B. N., Saavedra, M., Fidel, P. L. Local Th1/Th2 cytokine production during experimental vaginal candidiasis. Med. Mycol. 38, 419-419 (2000).
- Tirabassi, R. S. A mucosal vaccination approach for herpes simplex virus type 2. Vaccine. 29 (5), 1090-1090 (2011).
- Broeck, W. V. anden, Derore, A., Simoens, P. Anatomy and nomenclature of murine lymph nodes: descriptive and nomenclatory standardization in BALB/cAnNCrl mice. J. Immunol. Methods. 312 (1-2), 12-12 (2006).
- Wormley, F. L., Chaiban, J., Fidel, P. L. Cell adhesion molecule and lymphocyte activation marker expression during experimental vaginal candidiasis. J. Immunol. Methods. 69, 5072-5072 (2001).
- Yano, J. Epithelial cell-derived S100 calcium-binding proteins as key mediators in the hallmark acute neutrophil response during Candida vaginitis. Infect. Immun. 78 (12), 5126-5126 (2010).
