Viktiga tekniker som ska användas vid utvärdering av<em> Candida</em> Vaginit i en experimentell djurmodell beskrivs. De metoder som möjliggör snabb insamling av vaginala prover och lymfocyter från dränerande ländryggen lymfkörtlar. Dessa tekniker kan ge upphov till musmodeller av andra sjukdomar i det kvinnliga nedre könsorgan.
Vulvovaginal candidiasis (VVC), orsakade av Candida arter är en svampinfektion i nedre kvinnliga könsorgan som drabbar cirka 75% av i övrigt friska kvinnor under reproduktiva åren 18,32-34. Predisponerande faktorer inkluderar antibiotikaanvändning, okontrollerad diabetes och störning i reproduktiv hormonnivåerna på grund av graviditet, p-piller eller hormonbehandling substitutionsbehandlingar 33,34. Återkommande VVC (RVVC), definieras som tre eller flera episoder per år, drabbar en separat 5 till 8% av kvinnor med inga faktorer 33.
En experimentell musmodell av VVC har fastställts och använts för att studera patogenesen och slemhinnor värd reaktion på Candida 3,4,11,16,17,19,21,25,37. Denna modell har också använts för att testa potentiella antimykotisk behandling in vivo 13,24. Modellen förutsätter att djuren hållas i ett tillstånd av pseudoestrus för optimal Candida kolonisering / infektion 6,14,23. Under sådana förutsättningar kommer inokuleras djur har detekterbara vaginal svamp börda i veckor till månader. Tidigare studier visar en extremt hög parallell mellan djurmodell och infektion hos människor i förhållande till immunologiska och fysiologiska egenskaper 3,16,21. Skillnader ingår dock en brist på Candida som normal vaginal flora och ett neutralt vaginalt pH i möss.
Här visar vi en rad viktiga metoder i musen vaginit modell som inkluderar vaginala ympning, snabb samling av vaginala prover, bedömning av vaginal svamp börda, och förberedelser vävnad för cellulära utvinning / isolering. Detta följs av representativa resultat för beståndsdelar i vaginal lavage, svamp börda och dränerande lymfkörteln ger leukocyter. Med hjälp av narkosmedel kan magsköljning prover samlas in vid flera tidpunkter på samma möss för longitudinella utvärdering avinfektion / kolonisering. Dessutom kräver denna modell ingen immunosuppressiva medel att initiera infektion, vilket gör att immunologiska studier under definierade värd förhållanden. Slutligen införde modellen och varje teknik här potentiellt kan ge upphov till användning av metoder för att undersöka andra smittsamma sjukdomar i de nedre kvinnliga könsorgan (bakterier, parasiter, virus) och respektive lokal eller systemisk försvar värd.
En experimentell musmodell av Candida vaginit har etablerats och historiskt använts för de senaste decennierna för att studera slemhinnor värd reaktion på Candida samt för testning antimykotiska 3,4,11,13,16,17,19,21,24, 25,37. De protokoll som presenteras här innehåller effektiva och mindre arbetskrävande metoder, och verkar vara en av de mest optimerade modellsystem för Candida vaginit som hittills beskrivits. Dessa tekniker möjliggör snabb kvantifiering av svamp börd…
The authors have nothing to disclose.
Detta arbete stöddes av R01 AI32556 (NIAID, National Institute of Health). Detta arbete stöddes också delvis av Louisiana Vaccine Center och södra Louisiana Smittskyddsinstitutet forskning sponsras av Louisiana Board of Regents.
Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
Female CBA/J mice | Charles River Laboratories | 01C38 | 5-6 weeks of age |
Candida albicans (3153A) | National Collection of Pathogenic Fungi, UK | NCPF3153 | |
Sesame oil | Sigma-Aldrich | S3547 | Does not need to be pre-sterilized before use |
Β-estradiol 17-valerate | Sigma-Aldrich | E1631 | 0.1-0.5mg in sesame oil |
Phytone peptone | Becton Dickinson | 211906 | Supplement with 0.1% glucose |
Trypan blue solution | Sigma-Aldrich | T8154 | |
Sabouraud dextrose agar | Becton Dickinson | 211584 | |
Collagenase type IV | Sigma-Aldrich | C5138 | 0.25% |
Dispase | Invitrogen | 17105-041 | 1.7 U/ml |
Wire mesh screens | TWP | 060X060S0065W36T | No. 60 mesh, stainless |
Hanks’ balanced salt solution | Invitrogen | 24020-117 | |
CytoPrep fixative | Fisher Scientific | 12-570-10 | Preserves smear slides |
Papanicolaou stain EA-65 | EMD Chemicals | 7054X-85 | |
Papanicolaou stain OG-6 | EMD Chemicals | 7052X-85 | |
Harris’ Alum hematoxylin | EMD Chemicals | 638A-85 | |
Isoflurane | Baxter Healthcare | NDC 10019-773-60 | Used with isoflurane vaporizer or in a drop system closed anesthetic chamber |