Summary
Viktiga tekniker som ska användas vid utvärdering av
Abstract
Vulvovaginal candidiasis (VVC), orsakade av Candida arter är en svampinfektion i nedre kvinnliga könsorgan som drabbar cirka 75% av i övrigt friska kvinnor under reproduktiva åren 18,32-34. Predisponerande faktorer inkluderar antibiotikaanvändning, okontrollerad diabetes och störning i reproduktiv hormonnivåerna på grund av graviditet, p-piller eller hormonbehandling substitutionsbehandlingar 33,34. Återkommande VVC (RVVC), definieras som tre eller flera episoder per år, drabbar en separat 5 till 8% av kvinnor med inga faktorer 33.
En experimentell musmodell av VVC har fastställts och använts för att studera patogenesen och slemhinnor värd reaktion på Candida 3,4,11,16,17,19,21,25,37. Denna modell har också använts för att testa potentiella antimykotisk behandling in vivo 13,24. Modellen förutsätter att djuren hållas i ett tillstånd av pseudoestrus för optimal Candida kolonisering / infektion 6,14,23. Under sådana förutsättningar kommer inokuleras djur har detekterbara vaginal svamp börda i veckor till månader. Tidigare studier visar en extremt hög parallell mellan djurmodell och infektion hos människor i förhållande till immunologiska och fysiologiska egenskaper 3,16,21. Skillnader ingår dock en brist på Candida som normal vaginal flora och ett neutralt vaginalt pH i möss.
Här visar vi en rad viktiga metoder i musen vaginit modell som inkluderar vaginala ympning, snabb samling av vaginala prover, bedömning av vaginal svamp börda, och förberedelser vävnad för cellulära utvinning / isolering. Detta följs av representativa resultat för beståndsdelar i vaginal lavage, svamp börda och dränerande lymfkörteln ger leukocyter. Med hjälp av narkosmedel kan magsköljning prover samlas in vid flera tidpunkter på samma möss för longitudinella utvärdering avinfektion / kolonisering. Dessutom kräver denna modell ingen immunosuppressiva medel att initiera infektion, vilket gör att immunologiska studier under definierade värd förhållanden. Slutligen införde modellen och varje teknik här potentiellt kan ge upphov till användning av metoder för att undersöka andra smittsamma sjukdomar i de nedre kvinnliga könsorgan (bakterier, parasiter, virus) och respektive lokal eller systemisk försvar värd.
Protocol
1. Vaginal inokulering med Candida albicans
- Tre dagar före inokulering, medan besöksförbud djuret att exponera buken, injicera 100 ìl sesamolja innehåller 0,1-0,5 mg β-estradiol subkutant i nedre delen av magen. Advance nålen ca 5 till 10 mm i sidled på huden för att minimera läckaget från injektionsstället.
Den subkutan administrering av östrogen i nedre delen av magen är optimal i den här modellen på grund av närheten till könsorganen. Effektiva doser kan variera musstammar, åldrar eller derivat östrogen. I tidigare studier med CBA-J (H-2 κ), C3H/HeN (H-2 κ), C57BL / 6 (H-2 b), BALB / C (H-2 d), DBA / 2 (H- 2 d),, SJL (H-2 s) mus vid 6-8 veckors ålder var 0,1 mg per 100 l hittat effektiva framgår av förtjockning av vaginala väggen, minskad vaginal slem ochökat epitelceller sårskorpa. Möss ovan behandlas med östrogen vid denna koncentration uppvisar konsekvent vaginal kolonisering med Candida. För ympning hos möss av andra stammar och åldrar, är en pilotstudie rekommenderas för att säkerställa effektiviteten av östrogen under de ändrade villkoren och öka dosen östrogen om det behövs.
Den östrogen lösning bör beredas på nytt varje gång på dagen för injektionen. För att säkerställa fullständig löslighet av östrogen i sesamolja, blanda lösningen med en vortexblandare och värme intermittent vid 37 ° C. Upprepa injektionen varje vecka under hela studietiden. - För att förbereda inokulatet, lägg till en ögla med C. albicans blastoconidia från en nyligen subkultur preparatet på Sabouraud-dextros (SDA) i 10 ml Phytone-pepton buljong kompletteras med 0,1% glukos. Inkubera buljongen kultur till stationär fas för 18 h vid 25 ° C i en skakvattenbad.
- Efter inkubation, samla in the buljong kultur i en 15 ml koniska rör och centrifugera vid 800 xg under 5 min. Tvätta pelleten två gånger med sterilt PBS.
- Räkna livskraftiga blastoconidia på en hemocytometer av trypan blått färgämne utslagning. Justera cellkoncentrationen till 2,5 x 10 6 / ml (eller till en önskad inokulat koncentration) i sterila PBS.
- För att stabilisera musen, håll svansroten med två fingrar och lyft höften uppåt så att den vaginala öppningen vänd mot dig (Figur 1A). Det är idealiskt om musen är placerad på en plan riven yta (t.ex. bur överst) så att musen kan ge resistens mot svansen återhållsamhet.
- Pipettera 20 l (eller en önskad volym inte överstiga 20 l) av inokulatet fjädring genom att föra in pipettspetsen ca 5 mm djupt in i slidan lumen (Figur 1B). Slutföra det här steget så snabbt och skonsamt som möjligt för att minimera stress hos mus.
2. Vaginal lavages
- Efter dödshjälp (eller narkos), Hgamla musen nedåt genom svansroten med två fingrar så att slidöppningen blir exponerade.
- Lavage den vaginala lumen genom att införa 100 ìl steril PBS med upprepad aspiration och agitation med pipettspetsen. Pipettspetsen kan bli igensatta med celler. Om detta inträffar, dosera hindrar cellerna och fortsätter lavaging med återstående PBS i slidan. Samla lavage i ett mikrocentrifugrör.
- Alternativt kan vaginal lavages utföras på sövda möss med isofluran inhalant anestesi. För detta utsätta möss att förångas isofluran tills de är helt lugnande preparat (~ 30 sek.). Håll mössen nedåt genom svansroten och försiktigt lavage vaginal lumen med 50 ìl av sterila PBS. Se till att undvika hårda agitation med en pipett spets för att minimera skador i slidan under denna procedur. Sederade möss bör återhämta sig från anestesi inom 30 sek av exponering för luften.
Isoflurankan förångas med hjälp av en isofluran förångare och O 2 (rekommenderas) eller ett vanligt släpp-systemet stängt bedövning kammare utan förångaren systemet (kräver noggrann övervakning av djuret medan sederad att undvika andnöd).
Vaginal lavages på sövda möss bör vara den metod som föredras för longitudinella lavage prov på samma möss. I följd lavaging påverkar inte bedömningen av svamp börda över tiden 41.
- För våt-fäste förberedelser, överföring 10 ìl av lavage på en glasplatta och observera på 400-1000x förstoring av ljusmikroskop. Dessutom kan cellfraktioner av lavage färgas för att undersöka cell och kärnkraft morfologier. För smutskasta förberedelser, överföring 10 ìl av lavage på en glasplatta och försiktigt sprids med hjälp av den yttre väggen av en pipettspetsen. Bevara smeta prover med CytoPrep fixativ och bets av standarden Papanicolaou teknik (cellprov). Beakta vid 400 gångers förstoring med ljusmikroskop.
3. Kvantifiering av vaginal svamp börda
- I en 96 väl rund bottenplatta, överföra lavage i en brunn i den översta raden och 180 l steril PBS i följande fem brunnar i den kolumnen (ner plattan).
- Gör 1:10 spädningar av vaginal lavage genom att överföra 20 ìl av vätska till nästa väl i kolumnen. Blanda noggrant genom upprepad aspiration före varje överföring. Spädningar av upp till 12 lavage prover (en helt vågräta raden) kan utföras samtidigt med en 12-kanals pipett.
- Från och med den lägsta utspädning, överföring 10 ìl av provet på Sabouraud-dextros (SDA). Plätering av upp till 36 prover kan utföras på en plåt med SDA upprättats i kvadrat petriskålar med rutnät och ett justerbart avstånd multikanalpipett.
- Räkna kolonibildande enheter (CFUs) efter inkubation vid 34 ° C feller 48 h.
4. Vaginala vävnaden extraktion
- Efter den vaginala magsköljning förfarande, lägga euthanized musen på rygg och mätta ljumskarna med 70% etanol. Med hjälp av en pincett, lyfter urin öppning uppåt så att slidöppningen blir exponerade.
- Sätt ett par böjd tång in i slidan lumen och leta reda på livmoderhalsen. Samtidigt som man behåller ett stadigt grepp med pincett, extrahera livmoderhalsen genom slidan kaviteten (Figur 2A-C).
- Excise slidan vid basen av den vaginala öppningen och sedan ta bort livmoderhalsen från slidan med kirurgisk sax. Tänk på att den vaginala vävnaden är INVECKLAD (inre epitel-sidan av slidan exponeras utåt). Vävnaden kan vara antingen i sidled inverterad att behålla den ursprungliga orienteringen i slidan eller öppnat i en tabell genom att göra en lateral snitt.
Censurerade vaginala vävnader kan användas för 1) lymfocyter extraktion enligt collageNase matsmältningen (~ 1 × 10 4 / mus) 40, 2) epitelceller isolering följande dispase matsmältningen (~ 5 × 10 4 / mus) 28, 3) fryst eller paraffininbäddade preparat för histologisk analys 25.
5. Lumbar lymfkörtel excision
- Efter den vaginala magsköljning förfarande, lägga euthanized musen på rygg och mätta magen med 70% etanol. Gör en lateral snitt räknat från nedre delen av magen till bröstet och exponera de inre organen. Med hjälp av en pincett i båda händerna, flytta tarmarna uppåt så att den centrala blodkärlen blir synliga.
- Leta reda på sämre vena cava och bukaorta. Normalt kan ett par ländryggen lymfkörtlar identifieras i anslutning till bukaorta, som ligger ungefär halvvägs mellan ursprunget till njur-och gemensamma bäckenartärerna 39. Dessa lymfkörtlar kan visuellt särskiljas från fettvävnad med elastisk konsistensoch är lättare och mer ogenomskinlig i färg jämfört med fettvävnad (Figur 3). Dessa lymfkörtlar är märkbart större i smittade djur jämfört med icke-inympade djur.
- Excise lymfkörtlarna genom att placera microforceps under noden och dra upp försiktigt för att separera från omgivande vävnad.
6. Isolering av lymfoida celler i single-cellsuspensioner
- Överför lymfkörtlar på en steril trådnät skärm (ca 3 x 3 cm 2 i storlek) placeras i en steril glas petriskål med ~ 10 ml Hanks balanserad saltlösning (HBSS) (Figur 4).
- Med petriskål benägen något, tryck på lymfkörtlarna mot skärmen med en sprutkolven huvud. Se till att bryta alla lymfkörtlar så att det cellulära innehållet i noderna passerar genom skärmen medan icke-cellulära komponenter av noderna (dvs, membran, stroma, fett) kvar på skärmen.
- Med samma kolven och spruta aspirera tHan HBSS innehåller celler. Tvätta skärmen med ~ 5 ml HBSS och samla in de återstående vätskan i en 15 ml koniska rör.
- Centrifugera vid 800 xgi 10 minuter. Aspirera alla fetthaltiga avlagringar på toppen av vätskan med en pipett före kassering vätskan. Tvätta cellpelleten tre gånger med HBSS. Suspendera pelleten i 1 ml HBSS och räkna livskraftiga celler genom trypan blått färgämne utslagning.
7. Representativa resultat:
Den cellfraktioner vaginal lavage från> inokulerade 4-dagars möss består typiskt av Candida, epitelceller och cellulära infiltrerar (Figur 5). Genom våt montering mikroskopi kan Candida visuellt identifieras genom förekomsten av hyfer samt jäst (figur 5a). Smörj beredningar av vaginal lavage kan missfärgas av Papanicolaou teknik för att undersöka epitelceller och infiltrera leukocyter, av vilka de viktigaste cellerna neutrofiler identifieras av tri-nuclear lober (Figur 5B). Mycket få neutrofiler, om några, upptäcks i icke-inympade möss (Figur 5C) 41.
Ett exempel på vaginal svamp börda visas i Figur 6. Vaginal lavage samlas vid specifika tidpunkter odlas för CFU uppräkning (Figur 6A). Vaginal kolonisation / infektion med Candida kvarstår i veckor i östrogen-behandlade inokulerade möss (Figur 6B), medan Candida misslyckas med att etablera vaginal kolonisation i icke-östrogen-behandlade inokulerade möss (Figur 6c). Östrogen-behandlade icke-inympade möss förbli negativt för Candida hela tiden (data visas inte). Dessutom kan vaginal lavages utföras antingen en gång på separata möss vid varje tidpunkt eller longitudinellt i samma möss under narkos.
Den ländryggen lymfkörtlarna är den primära dränerande lymfkörtlar i könsorganen och de mest relevanta platsen för att utvärdera för systemiskt immunsvar mot en vaginal utmaning. NOTE att dessa lymfkörtlar kan bli förstorade i inokulerade möss medan de normalt förekommer ganska små i icke-inympade möss. Leukocyte cellulära återvinningar utbud normalt mellan 8 × 10 5 / icke-inympade musen till 5 × 10 6 / inokuleras mus. Förutom att ländryggen lymfkörtlar, kan ljumsk, Poplietallymfknutor och kröslymfknutor också användas.
Figur 1. Vaginal inokulering med Candida. A) En mus återhållsam för ympning. Musen placeras på en tråd bur in och som innehas av svansroten, något uppåt för att lyfta benen och exponera slidöppningen. Höften av musen kan stabiliseras med samma hand som den försöker att motstå svansen återhållsamhet. B) Introduktion av inokulatet in i slidan lumen. En pipettspetsen är försiktigt in ca 5 mm djupt in i slidan lumen. Suspensionen inokulatet är sedan deponeras.
Figur 2. Vaginala vävnaden extraktion. AB) Utvinning av livmoderhalsen. Livmoderhalsen ligger med böjda pincett och exponeras utåt genom vaginala hålighet. Väl ute ur underlivet hålighet är livmoderhalsen ytterligare dras utåt för att till fullo avslöja slidan. C) Utvinning av slidan. Slidan skärs från vulva med en sax. När fristående, ta bort livmoderhalsen från slidan.
Figur 3. Identifiering av ländryggen lymfkörtlarna. Placeringen av ländryggen lymfkörtlar bland de omgivande organ / blodkärl i närheten av bäckenet anges. A, bukaorta. B, urinblåsan. C, gemensamma bäckenartären. Jag, tarmar. L, lever. R, ändtarmen. S, mjälte. U, livmoder.
Figur 4. Ländryggen lymfkörtlarna placeras på ett trådnät skärm. Lymfkörtlarna samlas på skärmen placeras i en petriskål med HBSS. Lymfkörtlarna pressas mot skärmen med en sprutkolven att få lymfoida celler i encelliga suspensioner.
Figur 5. Cellfraktioner vaginal lavage från inokulerade möss. A) Wet-fäste och B) cellprov beredningar av vaginal lavage prover som samlats in 4 dagar efter ympning och C) från icke-inympade möss. Bilderna visades på 1000 × (A) eller 400 × (B, C) förstoring. Insatsen i B visar den kärntekniska morfologi av vaginal neutrofiler vid 1000 ×. Candida jäst (Y) och hyfer (H), epitelceller (EG) och neutrohils (N) anges.
Figur 6. Detection av vaginal svamp börda. A) representant C. albicans kolonier odlas på ett SDA tallrik. Neat (N) lavage prover från sex inokulerade olika möss (övre raden) var seriellt utspätt och odlade för CFU uppräkning. B) Kvantifiering av vaginal svamp börda i östrogen-behandlade och C) icke-östrogen-behandlade möss. Cfu/100 ìl lavage från inokulerade möss bedömdes på angivna tidpunkter.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
En experimentell musmodell av Candida vaginit har etablerats och historiskt använts för de senaste decennierna för att studera slemhinnor värd reaktion på Candida samt för testning antimykotiska 3,4,11,13,16,17,19,21,24, 25,37. De protokoll som presenteras här innehåller effektiva och mindre arbetskrävande metoder, och verkar vara en av de mest optimerade modellsystem för Candida vaginit som hittills beskrivits. Dessa tekniker möjliggör snabb kvantifiering av svamp börda och insamling av vaginala prover. Dessutom tidigare studier testa flera haplotypic musstammar (n = 13) och olika tidpunkter efter ympningen visade liknande nivåer av variationer i svampmängden och svar värd för vaginal kolonisation med Candida 2,6,41. Därför kan denna modell anpassas till befintliga protokoll utan begränsning musstammar eller varaktigheten av infektion. Man bör dock inse attvariabilitet i vaginal svamp börda kan vara hög mellan djur ges samma inokulatet (Figur 6B). Det finns bevis som styrker att de variationer uppstår på grund av olika grader av tidiga anslutning till vaginala epitelet 41. Därför är 7-10 möss / grupp föreslås för statistiska ändamål.
Variabilitet i vaginal svamp bördan har också bevisas mellan olika stammar av C. albicans, vilket tyder på att inte alla stammar av C. albicans har kapacitet att på samma sätt kolonisera musen slidan. Till exempel, C. albicans 3153A (lab stam) som används i detta protokoll har rapporterats att visa högre vaginal kolonisering än SC5314 (kliniska isolat), där en högre inokulat (> en logg) skulle krävas för att erhålla likvärdiga nivåer av vaginal svamp bördan ses med 3153A 27. I själva verket har en mycket varierande vaginal kolonisation med flera kliniska isolat har dokumenterats 36. Därför bör man vara takSV vid fastställandet en optimal inokulum för varje C. albicans stam att säkerställa en konsekvent kolonisering hos möss. Vanligtvis betyder CFUs från 5 x 10 4 till 5 x 10 5 / 100 l lavage bör upptäckas för konsekvent kolonisering. För bedömning av vaginal svamp börda är kvantifiering av CFUs av lavages lämpliga för denna modell som Candida blastoconidia och hyfer normalt inte tränga bortom det ytliga skiktet av vaginala epitelet. Våra tidigare histologisk utvärdering av post-lavage vaginala vävnader visade sällan rester av Candida 25,41. Men vi inser möjligheten att hyfer kan miscounted när de växer som en enda koloni på agarplatta och kanske inte speglar exakt svamp börda. Som en alternativ metod för att CFU uppräkning, en nyutvecklad in vivo imaging tekniken har rapporterats att framgångsrikt bedöma vaginal svamp bördan när man använder genetiskt modifierade självlysande C. albicans 9,29. Dessutom kan protokollet ändras för att förmå C. glabrata kolonisation med diabetes djur 15,20. Hittills har musmodeller för andra icke-C. Albicans-inducerad vaginit inte rapporterats.
Östrogen administration är avgörande för denna modell, initiera robust vaginal kolonisering med Candida 6,14,23. Förutom att subkutan injektion av estradiol i sesamolja suspension injektion av vattenlösligt estradiol i PBS och intradermal implantation av en kontrollerad frisättning estradiol pellets är alternativa metoder för östrogen administration och har varit anställda i andra musmodeller av kvinnliga könsorgan infektioner 10 , 35. Krav på hög östrogen i denna modell kan förklaras av två fysiologiska faktorer. En är att förhöjda östrogen främjar skiktningen av vaginala epitelet 5,8,30. Förtjockat epitel från ökad epitelceller spridning kan allaow Candida att få bättre efterlevnad av den vaginala väggen och efterföljande kolonisering. För det andra är vaginala epitelceller kända för att ha hög glykogen innehåll. En ökad vävnad leder östrogen nivå i ansamling av glykogen i vaginala väggarna 30. Förhöjda glykogen i vaginala mikromiljön kan i sin tur tillåter Candida att blomstra genom att ge ytterligare näring. Tidigare immun analyser visade att exogena östrogen inte påverkar cellens uttryck adhesionsmolekyl 40. En nackdel med att behandla djur med exogent östrogen är att förhöjd östrogen har också varit känt att främja överväxt av vaginal kommensala flora 30. Eftersom sammansättningen av floran kan variera avsevärt mellan djur, kan detta lägga till en variabel där kommensala organismer kan påverka Candida tillväxt eller modulera värd svar. Med hänsyn till denna fråga kräver modell östrogen-behandlade kontroll (icke-inympade) djur som skall ingå ialla experiment och analyseras parallellt.
I denna musmodell, kan effekten av anti-svamp agenter exakt bedömas av de protokoll som beskrivs häri, som kan ge viktig in vivo-testning leder till utveckling av potentiella behandlingar för klinisk användning. I själva verket ger robusta typ av modell goda indikationer på klinisk effekt. Förutom användning av östrogen, främjar neutralt vaginalt pH i möss tillväxt av hyfer, en patogen form av Candida ses i alla inokulerade möss. Liknande kliniska observationer, sker en kraftig vaginal neutrofila migration i en delmängd av möss utan att påverka svampmängden 31,41. Förekomsten av neutrofiler är framträdande hos kvinnor under symptomatisk vaginit och verkar parallellt möss efter ympning 12,41. Eftersom andra kliniska symptom (dvs, klåda, svullnad) inte kan exakt mätbar hos möss, bedömning av vaginala neutrofilerfungerar som en enkel men pålitlig indikation på inflammation (symptom) i denna modell.
Den mikroskopi av vaginal lavage visas i figur 5 är rutinmässigt utförs i vårt laboratorium för att bedöma Candida kolonisation och vaginal inflammation. Dessutom kan hyfernas scoring också användas som ett mått på infektion. Därefter kan de cellulära och lösliga fraktioner av lavage bevaras och Cryo-arkiveras för framtida analyser. Att notera är en fördelaktig egenskap hos det protokoll som vaginala lavages kan utföras längsgående i samma möss under narkos. Våra tidigare studier bekräftat att longitudinella utvärdering inte påverkar bedömningen av vaginal svamp börda. Detta tillvägagångssätt är särskilt fördelaktigt i de fall där longitudinella analyser av infektion önskas.
Slutligen har vi utvecklat en mindre invasiv excision metod för slidan. Denna effektiva och snabba tekniken kräver ingen snitt ibuken eller något inre organ, medan resten i könsorganen intakt. En annan användbar funktion i denna modell är bristen på krav på immunosuppressiva medel att inleda Candida kolonisering. Detta är särskilt viktigt eftersom upprätthålla naturliga immunstatus i värdlandet är en viktig aspekt av immunologiska studier och svar värd för en mikrobiell utmaning. Därmed skulle vävnader och celler som isolerats med dessa metoder tillämpas i olika in vitro-immuna analyser.
Avslutningsvis ger vi flera viktiga funktioner och representativa resultat för experimentell modell av vaginal candidiasis. Förutom C. albicans-inducerad vaginit har infektioner av andra patogener av de kvinnliga lägre könsorgan, även Neisseria gonorrhoeae, Trichomonas vaginalis och herpes simplex-virus har studerats med hjälp av musmodeller där organismerna är intravaginalt införs i hormonbehandlat möss 1,7,10,22,26,35,38. Därför kan de tekniker som är användbara för studier med Candida vaginit tillämpas på och eventuellt förskott metoder för att studera patogenesen och värd immunsvar för andra smittsamma sjukdomar i kvinnliga lägre könsorgan.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Inga intressekonflikter deklareras.
Acknowledgments
Detta arbete stöddes av R01 AI32556 (NIAID, National Institute of Health). Detta arbete stöddes också delvis av Louisiana Vaccine Center och södra Louisiana Smittskyddsinstitutet forskning sponsras av Louisiana Board of Regents.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Female CBA/J mice | Charles River Laboratories | 01C38 | 5-6 weeks of age |
| Candida albicans (3153A) | National Collection of Pathogenic Fungi, UK | NCPF3153 | |
| Sesame oil | Sigma-Aldrich | S3547 | D–s not need to be pre-sterilized before use |
| Β-estradiol 17-valerate | Sigma-Aldrich | E1631 | 0.1-0.5mg in sesame oil |
| Phytone peptone | BD Biosciences | 211906 | Supplement with 0.1% glucose |
| Trypan blue solution | Sigma-Aldrich | T8154 | |
| Sabouraud dextrose agar | BD Biosciences | 211584 | |
| Collagenase type IV | Sigma-Aldrich | C5138 | 0.25% |
| Dispase | Invitrogen | 17105-041 | 1.7 U/ml |
| Wire mesh screens | TWP | 060X060S0065W36T | No. 60 mesh, stainless |
| Hanks’ balanced salt solution | Invitrogen | 24020-117 | |
| CytoPrep fixative | Fisher Scientific | 12-570-10 | Preserves smear slides |
| Papanicolaou stain EA-65 | EMD Millipore | 7054X-85 | |
| Papanicolaou stain OG-6 | EMD Millipore | 7052X-85 | |
| Harris’ Alum hematoxylin | EMD Millipore | 638A-85 | |
| Isoflurane | Baxter Internationl Inc. | NDC 10019-773-60 | Used with isoflurane vaporizer or in a drop system closed anesthetic chamber |
References
- Abraham, M. C. Inducible immunity to Trichomonas vaginalis in a mouse model of vaginal infection. Infect. Immun. 64, 3571-3571 (1996).
- Black, C. A. Major histocompatibility haplotype does not impact the course of experimentally induced murine vaginal candidiasis. Lab. Anim. Sci. 49 (6), 668-668 (1999).
- Black, C. A. Acute neutropenia decreases inflammation associated with murine vaginal candidiasis but has no effect on the course of infection. Inf. Immun. 66, 1273-1273 (1998).
- Black, C. A. Increased severity of Candida vaginitis in BALB/c nu/nu mice versus the parent strain is not abrogated by adoptive transfer of T cell enriched lymphocytes. J. Reprod. Immunol. 45, 1-1 (1999).
- Buchannan, D. L. Role of stromal and epithelial estrogen receptors in vaginal epithelial proliferation, stratification, and cornification. Endocrinology. 139 (10), 4345-4345 (1998).
- Clemons, K. V. Genetic susceptibility of mice to Candida albicans vaginitis correlates with host estrogen sensitivity. Infect. Immun. 72, 4878-4878 (2004).
- Conrady, C. D., Halford, W. P., Carr, D. J. Loss of the type I interferon pathway increases vulnerability of mice to genital Herpes simplex virus 2 infection. J. Virol. 85 (4), 1625-1625 (2011).
- Cunha, G. R., Cooke, P. S., Kurita, T. Role of estromal-epithelial interaction in hormonal responses. Arch Histol Cytol. 67 (5), 417-417 (2004).
- Enjalbert, B. A multifunctional, synthetic Caussia princeps luciferase reporter for live imaging of Candida albicans infections. 77 (11), 4847-4847 (2009).
- Feinen, B. Critical role of Th17 responses in a murine model of Neisseria gonorrhoeae genital infection. Mucosal Immunol. 3 (3), 312-312 (2010).
- Fidel, P. L. Distinct protective host defenses against oral and vaginal candidiasis. Med. Mycol. 40, 359-359 (2002).
- Fidel, P. L. An intravaginal live Candida challenge in humans leads to new hypotheses for the immunopathogenesis of vulvovaginal candidiasis. Infect. Immun. 72, 2939-2939 (2004).
- Fidel, P. L., Cutright, J. L., Sobel, J. D. Efficacy of D0870 treatment of experimental Candida vaginitis. Antimicrob. Agents. Chemother. 41, 1455-1455 (1997).
- Fidel, P. L., Cutright, J. L., Steele, C. Effects of Reproductive hormones on experimental vaginal candidiasis. Infect. Immun. 68, 651-651 (2000).
- Fidel, P. L. A murine model of Candida glabrata vaginitis. J. Inf. Dis. 173, 425-425 (1996).
- Fidel, P. L. Analysis of vaginal cell populations during experimental vaginal candidiasis. Inf. Immun. 67, 3135-3135 (1999).
- Fidel, P. L., Lynch, M. E., Sobel, J. D. Candida-specific cell-mediated immunity is demonstrable in mice with experimental vaginal candidiasis. Infect. Immun. 61, 1990-1990 (1993).
- Fidel, P. L., Sobel, J. D. Immunopathogenesis of recurrent vulvovaginal candidiasis. Clin. Microbiol. Rev. 9. 9, 335-335 (1996).
- Fidel, P. L., Sobel, J. D. Murine Models of Candida Vaginal Infections, In Experimental models in antimicrobial chemotherapy. Zak, O., Sande, M. , 2nd ed, Academic Press Ltd. London, UK. 741-748 (1999).
- Fidel, P. L., Vazquez, J. A., Sobel, J. D. Candida glabrata: Review of epidemiology, pathogenesis, and clinical disease with comparison to C. albicans. Clin. Microbiol. Rev. 12, 80-80 (1999).
- Fulurija, A., Ashman, R. B., Papadimitriou, J. M. Neutrophil depletion increases susceptibility to systemic and vaginal candidiasis in mice, and reveals differences between brain and kidney in mechanisms of host resistance. Microbiology. 142, 3487-3487 (1996).
- Gill, N. NK cells require type I IFN receptor for antiviral responses during genital HSV-2 infection. Cell Immunol. 269 (1), 29-29 (2011).
- Hamad, M., Abu-Elteen, K. H., Ghaleb, M. Estrogen-dependent induction of persistent vaginal candidosis in naive mice. Cell. Immunol. 47 (7), 304-304 (2004).
- Hamad, M. Utility of the oestrogen-dependent vaginal candidosis murine model in evaluating the efficacy of various therapies against vaginal Candida albicans infection. Mycoses. 49 (2), 104-104 (2006).
- LeBlanc, D. M., Barousse, M. M., Fidel, P. L. A role for dendritic cells in immunoregulation during experimental vaginal candidiasis. Infect. Immun. 74, 3213-3213 (2006).
- McGrory, T., Garber, G. E. Mouse intravaginal infection with Trichomonas vaginalis and role of Lactobacillus acidophilus in sustaining infection. Infect. Immun. 60, 2375-2379 (1992).
- Naglik, J. R., Fidel, P. L., Odds, F. C. Animal models of mucosal Candida infection. FEMS. Microbiol. Lett. 283 (2), 129-129 (2008).
- Nomanbhoy, F. Vaginal and oral epithelial cell anti-Candida activity. Inf. Immun. 70, 7081-7081 (2002).
- Pietrella, D. A beta-glucan-conjugate vaccine and anti-beta-glucan antibodies are effective against murine vaginal candidiasis as assessed by a novel in vivo imaging technique. Vaccine. 28 (7), 1717-1717 (2010).
- Redondo-Lopez, V., Cook, R. N., Sobel, J. D. Emerging role of Lactobacilli in the control and maintenance of the vaginal bacterial microflora. Rev Infect Dis. 12 (5), 856-856 (1990).
- Saavedra, M. Local production of chemokines during experimental vaginal candidiasis. Inf. Immun. 67, 5820-5820 (1999).
- Sobel, J. D. Pathogenesis and epidemiology of vulvovaginal candidiasis. Ann. N. Y. Acad. Sci. 544, 547-547 (1988).
- Sobel, J. D. Pathogenesis and treatment of recurrent vulvovaginal candidiasis. Clin. Infect. Dis. 14, Suppl 1. S148-S153 (1992).
- Sobel, J. D. Vulvovaginal candidiasis: Epidemiologic, diagnostic, and therapeutic considerations. Am. J. Obstet. Gynecol. 178 (2), 203-203 (1998).
- Song, W. Local and humoral immune responses against primary and repeat Neisseria gonorrhoeae genital tract infections of 17β-estradiol-treated mice. Vaccine. 26, 5741-5741 (2008).
- Taylor, B. N. In vivo virulence of Candida albicans isolates causing mucosal infections in people infected with the human immunodeficiency virus. J. Infect. Dis. 182, 955-955 (2000).
- Taylor, B. N., Saavedra, M., Fidel, P. L. Local Th1/Th2 cytokine production during experimental vaginal candidiasis. Med. Mycol. 38, 419-419 (2000).
- Tirabassi, R. S. A mucosal vaccination approach for herpes simplex virus type 2. Vaccine. 29 (5), 1090-1090 (2011).
- Broeck, W. V. anden, Derore, A., Simoens, P. Anatomy and nomenclature of murine lymph nodes: descriptive and nomenclatory standardization in BALB/cAnNCrl mice. J. Immunol. Methods. 312 (1-2), 12-12 (2006).
- Wormley, F. L., Chaiban, J., Fidel, P. L. Cell adhesion molecule and lymphocyte activation marker expression during experimental vaginal candidiasis. J. Immunol. Methods. 69, 5072-5072 (2001).
- Yano, J. Epithelial cell-derived S100 calcium-binding proteins as key mediators in the hallmark acute neutrophil response during Candida vaginitis. Infect. Immun. 78 (12), 5126-5126 (2010).
