Eine Beschreibung der chirurgischen Induktion von Endometriose bei Mäusen und Ratten durch auto-Transplantation von Gebärmutter-Gewebe auf die arterielle Kaskade der Darm Mesenterium.
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Methodenartikel
Maus-Modell der chirurgisch-induzierten Endometriose durch Auto-Transplantation von Gebärmutter-Gewebe
In diesem Artikel
Zusammenfassung
Zusammenfassung
Die Endometriose ist eine chronische, schmerzhafte Erkrankung, deren Ätiologie ist unbekannt. Darüber hinaus kann die Behandlung der Endometriose erfordern laparoskopische Entfernung der Läsionen und / oder chronischen pharmazeutische Behandlung von Schmerzen und Unfruchtbarkeit Symptome. Die Kosten im Zusammenhang mit Endometriose hat bei 22 Milliarden Dollar pro Jahr in den Vereinigten Staaten von Amerika 1 geschätzt. Um unser Verständnis der zugrunde liegenden Mechanismen dieser rätselhaften Krankheit sind Tiermodelle eingesetzt. Primaten entwickeln spontan Endometriose und somit Primatenmodelle am ehesten die Krankheit bei Frauen ähneln. Nager-Modelle, sind aber kostengünstiger und leicht verfügbar 2. Das Modell, das wir hier beschreiben, beinhaltet eine autologe Transfer von Gebärmutter-Gewebe der Darmwand Mesenterium (Abbildung 1) und wurde zum ersten Mal in der Ratte 3 entwickelt und später an der Maus 4 übertragen. Das Ziel der autologen Nagetier Modell der chirurgisch-induzierten Endometriose ist zu imitierendie Krankheit bei Frauen. Wir und andere haben bereits gezeigt, dass die veränderte Genexpressionsmuster in Endometrioseherde von Mäusen oder Ratten Spiegel bei Frauen mit der Krankheit 5,6 beobachtet wurden. Ein Vorteil der Durchführung der Operation in der Maus ist, dass die Fülle von transgenen Mauslinien zur Verfügung können die Forscher bei der Bestimmung der Rolle von spezifischen Komponenten wichtig für die Gründung und das Wachstum der Endometriose helfen. Ein alternatives Modell, in dem ausgeschnittenen menschlichen Endometrium-Fragmente an das Bauchfell von immungeschwächten Mäusen eingebracht werden, ist ebenfalls weit verbreitet, sondern wird durch das Fehlen eines normalen Immunsystems, die Gedanken zu sein bei der Endometriose 2,7 wichtig ist begrenzt. Wichtig ist, dass die Maus-Modell der chirurgisch induzierten Endometriose ein vielseitiges Modell, das verwendet wurde, zu untersuchen, wie das Immunsystem 8, Hormone 9,10 und Umweltfaktoren 11,12 Endometriose sowie die Auswirkungen von Endometriose auf fert beeinflussenility 13 und Schmerzen 14.
Protokoll
1. Die Planung für lebende Tiere Chirurgie
- Stellen Sie sicher, dass geeignete Genehmigung eingegangen ist, um mit Versuchstieren zu arbeiten.
- Auftrag Mäusen und lassen Sie mindestens eine Woche Akklimatisierung an ihre neue Umgebung.
- Weibliche Mäuse in der Abwesenheit von der Kontakt mit männlichen Pheromonen untergebracht ist Radfahren zu stoppen, bezeichnet ein Phänomen, das als Whitten-Effekt 15,16. Um Mäuse Rad übertragen Urin getränkten männlichen Betten zu den weiblichen Käfig alle fünf Tage. Alternativ, wenn offene Käfige verwendet werden, statt der weiblichen Käfig zwischen zwei Käfigen der Männchen zu halten die Weib....
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Diskussion
Es gibt mehrere kritische Parameter, bemerkt während der Durchführung der chirurgischen Induktion von Endometriose bei Mäusen sollte. Erstens ist die Endometriose ein Östrogen abhängig Krankheit und als solche diese Operation sollte in gesunden Tieren oder alternativ in ovarektomierten Tiere mit Östrogenen 20 ergänzt durchgeführt werden. Zweitens muss die Naht Endometriumbiopsien der arteriellen Kaskade mit äußerster Sorgfalt durchgeführt werden. Wir haben festgestellt, dass mit nur zwei relativ lockeren Knot.......
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Offenlegungen
Keine Interessenskonflikte erklärt.
Danksagungen
Besonderer Dank geht an Chris Kassotis und Audrey Bailey für die kritische Durchsicht des Manuskripts und Dr. Scott Korte, Joseph Beeman, Alison Curfman, Paul Kimball, Bridget Neibreggue, Jacob Redel, Amy Schröder, Maija Steinberg, und Stacey Winkeler für ihre Unterstützung bei der Optimierung dieses Modell in unserem Labor. Die Finanzierung wurde von der Clinical Biodetectives Training Grant (NIH T90) (KEP), University of Missouri Life Sciences Undergraduate Research Opportunities Program, MU Research Council, MU Research Board Zuschüsse und NIH R21HD056441 (SCN) zur Verfügung gestellt.
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Materialien
| Name | Unternehmen | Katalognummer | Kommentare |
|---|---|---|---|
| Name des Reagenzes / Ausrüstung | Firma | Katalog-Nummer | |
| Wax Bleistift | Fischer | NC9954135 | |
| Objektträger aus Glas | Fischer | 12-550-433 | |
| Pipette | Fischer | S79383 | |
| Standard-Lichtmikroskop für die Bewertung Vaginalzytologie Abstrichen | |||
| Buprenorphin HCL c3 (CARJET) 10X1ml | Butler Tiergesundheit Versorgung | 022891 | |
| Sterile Phosphat-gepufferter Kochsalzlösung (PBS) | Gibco | 14040-117 | |
| 10.000 U / ml Penicillin, 10.000 pg / ml Streptomycin in 0,85% NaCl | Hyclone | SV30010 | |
| Isofluran | AbbottTiergesundheit | 05260-05 | |
| Isofluran nicht Rückatmungssystemen System | |||
| Recirculating Warmwasser Heizkissen | |||
| 30 ml Spritze Mantel | Fischer | 14 bis 823-16G | |
| Puderfrei sterile Handschuhe | Fisherbrand | 19020558 | |
| Augensalbe | Große Pharmaceuticals | 10033691 | |
| Kleine elektrische Haarschneidemaschine | Wahl | 9861-600 | |
| Chlorhexidin scrub | Fischer | NC9863042 | |
| 70% Ethanol | |||
| Polylined sterilen Bereich | Busse Krankenhaus Disposables | 696 | |
| Größe 3 Skalpell | Fischer | 22-079-657 | |
| Number 10 Skalpellklingen | Fischer | 22-079-681 | |
| Kleine chirurgische Scheren | Roboz | RS-5850 | |
| Kleine gezackte semi-gebogenen Pinzette | Roboz | RS-5135 | |
| 5-0 schwarz geflochten Seidenfaden | Ethicon | K870H | |
| Sterilisiert Pyrexglas Petrischalen | Corning | 70160-101 | |
| 2 mm Biopsiestanze | Miltex | 33-31 | |
| Sterile Gaze | Kendall | 1806 | |
| 6-0 schwarz Monofilament Ethilon Nylonnaht | Ethicon | 697G | |
| Needle-Treiber (optional) | World Precision Instruments | 500023 | |
| 5-0 ungefärbt geflochten beschichtet vicryl Naht | Ethicon | J490G | |
| 9mm Autoclip Wundklammern | Becton Dickinson | 427631 | |
| Autoclip Applier & Entferner | Becton Dickinson | 427630 | |
| 23G Nadel | Becton Dickinson | 305193 | |
| 1cc Spritze | Becton Dickson | 301025 | |
| 5x Lupe Standfuß (optional) | Fischer | 14-648-23 | |
| 10% gepuffertem Formalin | Fischer | SF100-4 | |
| Taster | Roboz | RS-6466 | |
| Verarbeitung / Einbettkassetten | Fischer | 15 bis 197-700A | |
| Biopsie Schaumstoff-Pads | Fischer | 22-038-222 | |
| RNAqueous RNA Isolation Kit | Ambion | AM1912 | |
| Flüssiger Stickstoff | |||
| Schnappdeckel Mikrozentrifuge flachen Oberrohr | Fischer | 02-681-240 | |
| Ketamin (optional) | Simga | K4138 | |
| Domitor (Medetomidinhydrochlorid) (optional) | Tocris | 2023 | |
| Antisedan (Atipamezol) (optional) | Sigma | A9611 |
Referenzen
- Simoens, S., Hummelshoj, L., D'Hooghe, T. Endometriosis: cost estimates and methodological perspective. Hum. Reprod. Update. 13, 395-404 (2007).
- Grummer, R. Animal models in endometriosis research. Hum. Reprod. Update. 12, 641-649 (2006).
- Vernon, M. W., Wilson, E....
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Nachdrucke und Genehmigungen
