<em> לשעבר vivo</emהכנה> מתואר על הבידוד של השרירים הגדולים gracilis arterioles ההתנגדות לחקירה של שני כלי דם התגובות לגירויים vasoactive והערכת תכונות מבניות בסיסיות באמצעות מכניקת קיר פסיביים.
הכנה microvessel מבודד הוא הכנה vivo לשעבר המאפשר בחינה של תרומות שונות של גורמים בקוטר כלי שליטה, וכך, התנגדות זלוף 1-5. זהו תכשיר ניסיוני קלאסי זה היה, במידה רבה, תיאר בתחילה על ידי אושידה et al. 15 לפני כמה עשורים. זה תיאור ראשוני סיפק את הבסיס הטכניקות שונה בהרחבה משופרת, בעיקר במעבדה של ד"ר בריאן Duling באוניברסיטת וירג'יניה 6-8, ואנחנו מציגים גישה הנוכחי בעמודים הבאים. הכנה זו באופן ספציפי מתייחסים עורקיק gracilis בחולדה כמו microvessel של בחירה, אבל ההכנה הבסיסית יכול בקלות להיות מיושם על כלי מבודדים מרקמת כמעט כל איבר אחר או על פני מינים 9-13. מכני (כלומר, מימדי) שינויים microvessels בודד יכול בקלות לעבור הערכהבתגובה מגוון רחב של פיזיולוגיים (למשל, לחץ היפוקסיה, intravascular, או גזירה) או אתגרים תרופתי, והוא יכול לספק תובנות לגבי האלמנטים המרכיבים מכניסטית תגובות המשולבים ללא פגע, אם כי רקמת vivo לשעבר. המשמעות של שיטה זו הוא שהיא מאפשרת מניפולציה קליל של ההשפעות על תקנה משולבת של קוטר microvessel, תוך המאפשר שליטה של רבים תרומות ממקורות אחרים, כולל לחץ intravascular (myogenic), עצבוב האוטונומית, hemodynamic ( למשל, מאמץ גזירה), גירויים התלויים או עצמאית אנדותל, הורמונליים, והשפעות parenchymal, כדי לספק רשימה חלקית. תחת תנאי הניסוי מתאימים ועם המטרות המתאימות, זה יכול להוות יתרון על פני in vivo או ברקמות / איברים ההכנות באתרו, שאינם מאפשרים בקלות עבור קליל של משתנים מערכתיות רחבות יותר.
תואר שניהגבלה יור הכנה זו היא למעשה תולדה של נקודות החוזק שלה. על פי ההגדרה, את ההתנהגות של הכלים האלה הוא נחקר בתנאים בהם רבים התורמים המשמעותיים ביותר בוויסות של התנגדות כלי הדם הוסרו, כולל עצבית, הלחות, חילוף החומרים וכו 'על כן, החוקר הוא הזהיר, כדי למנוע יתר פרשנות אקסטרפולציה של הנתונים אשר נאספו תוך שימוש בתכשיר זה. אזור משמעותי אחר של דאגה לגבי הכנה זו היא כי זה יכול להיות קל מאוד לגרום נזק לרכיבים תאיים כמו רירית האנדותל או השריר החלק בכלי הדם, כגון מקור משתנה הטעות יכול להיות מוצג. מומלץ מאוד כי החוקר הפרט לנצל מדידות מתאימים כדי להבטיח את איכות של התכשיר, הן התחלת הניסוי ומדי פעם במהלך כל פרוטוקול.
פרוטוקול הציג מתאר cannulation, בידוד הסרת כפולה של microvessel שרירי השלד, אם כי טכניקה זו בכלל ניתן ליישם בקלות ברוב הרקמות. על כתב היד הנוכחי, המונח "עורקיק" נוצל בעבר על ידי החוקרים לתאר כלי התנגדות נע בין 70-120 מיקרומטר בקוטר תחת הטון פעיל מנוחה, שהיא גם תורמת רבות תקנה הה?…
The authors have nothing to disclose.
עבודה זו נתמכה על ידי איגוד הלב האמריקני (EIA 0740129N) ו NIH T32 HL90610.
Reagents and Equipment | Company | Comments/Catalogue # |
Vessel Chamber | Custom | Dave Eick (MCW) |
Heated Circulating Water Bath | PolyScience and Haake | Haake DC 10 |
Pipets | Frederick Haer & Co. | Capillary Tubing 2.0 mm OD x 1.0 mm ID (27-33-1) |
Pressure Monitor | World Precision Instruments | |
Water Jacketed Reservoir | Custom | |
External Light Source | World Precision Instruments | Novaflex |
Pipet Puller | MicroData Instruments | PMP102 Micropipet Puller |
Full complement of surgical tools | Fine Science Tools | Dumont |
Ultra Fine Forceps | Fine Science Tools | Inox #5 |
Silk Suture Thread | Ethilon | #10-0 or 9-0 |
Stereo Microscope | Olympus | Olympus SZ-11 |
Analog Video Calipers | Boeckeler | Via Controller (Via-100) |
High Resolution Analog Camera | Panasonic | GP-MF 602 |
Oxygen Tank | Regional | 21% balance nitrogen and 5% CO2 balance nitrogen |
Tubing | Tygon | |
Drain Pump | Cole Parmer Instrument Co. | |
Modified Rat PSS | See recipe below | |
Van Breemen’s Relaxant PSS | See recipe below |
Table 1. A list of the major components of isolated microvessel station setup presented in the Figures.
Modified Rat PSS Recipe | To make two liters of PSS | 20X Salt Stock (2L) | 20X Buffer Stock (2L) |
NaCl | 278.0 g | ||
KCl | 14.0 g | ||
MgSO4-7H2O | 11.5 g | ||
CaCl2-H2O | 9.4 g | ||
NaHCO3 | 80.8 g | ||
EDTA | 0.4 g | ||
NaH2PO4 | 0.28 g | ||
Glucose | 1.98 g | ||
20x Salt Stock | 100 mL | ||
20x Buffer Stock | 100 mL | ||
Distilled Water | 1800 mL |
Table 2. Recipe for standard physiological salt solution (PSS) used in the isolated microvessel protocols.
Comments on Recipe: Make 2 L of Salt Stock and 2 L of Buffer Stock. These can be refrigerated when not being used, but shake them well and often before preparing PSS. The additional ingredients are added at the time of preparation of final PSS.
Van Breemen’s Relaxant PSS | To make 2 liters of PSS | 20X Salt Stock (1L) | 20X Buffer Stock (1L) |
NaCl | 107.4 g | ||
KCl | 7.0 g | ||
MgSO4-7H2O | 5.76 g | ||
MgCl2-6H2O | 81.32 g | ||
NaHCO3 | 40.4 g | ||
EDTA | 0.2 g | ||
EGTA | 15.22 | ||
NaH2PO4 | 0.28 g | ||
Glucose | 1.98 g | ||
20x Salt Stock | 100 mL | ||
20x Buffer Stock | 100 mL | ||
Distilled Water | 1800 mL |
Table 3. Recipe for Van Breemen’s relaxant physiological salt solution (PSS) used in the isolated microvessel protocols under conditions of zero active tone.
Comments on Recipe: Make 1 L of Salt Stock and 1 L of Buffer Stock. These can be refrigerated when not being used, but shake them well and often before preparing PSS. The additional ingredients are added at the time of preparation of final relaxant PSS.