Un<em> Ex vivo</emPreparación> se describe para el aislamiento de las arteriolas de resistencia del músculo gracilis más grandes para los interrogatorios tanto de las respuestas vasculares a los estímulos vasoactivos y la evaluación de las propiedades básicas estructurales a través de la mecánica de la pared pasivos.
La preparación microvasos aislado es una preparación ex vivo, que permite el examen de las contribuciones de diferentes factores que diámetro de control del buque, y por lo tanto, la resistencia a la perfusión 1-5. Esta es una preparación clásica experimental que fue, en gran medida, descrita inicialmente por Uchida et al. 15 hace varias décadas. Esta descripción inicial sirvió de base para las técnicas que se ha modificado y mejorado ampliamente, principalmente en el laboratorio del Dr. Brian Duling en la Universidad de Virginia, 6-8, y se presenta un enfoque actual en las páginas siguientes. Esta preparación se referirá específicamente a la arteriola gracilis en una rata como la microvasos de elección, pero la preparación de base pueden aplicarse fácilmente a los buques aisladas a partir de casi cualquier otro tejido u órgano a través de especies 9-13. Mecánica (es decir, dimensiones) cambios en la microvasculatura aislado puede ser evaluado fácilmenteen respuesta a una amplia gama de fisiológico (por ejemplo, presión hipoxia, intravascular, o cizallamiento) o retos farmacológicos, y puede dar una idea de elementos mecánicos que comprenden las respuestas integradas en una intacta, aunque ex vivo, el tejido. La importancia de este método es que permite la fácil manipulación de las influencias sobre la regulación integrada del diámetro de los microvasos, mientras que también permite el control de muchas de las contribuciones de otras fuentes, incluyendo la presión intravascular (miogénica), inervación autónoma, hemodinámica ( por ejemplo, el esfuerzo cortante), estímulos endoteliales dependientes o independientes, hormonales e influencias del parénquima, para proporcionar una lista parcial. Bajo condiciones experimentales adecuadas y con objetivos adecuados, esto puede servir como una ventaja sobre in vivo o in situ tejido / órgano preparaciones, que no permiten fácilmente para el control fácil de amplios variables sistémicas.
La maJor limitación de esta preparación es básicamente la consecuencia de sus puntos fuertes. Por definición, el comportamiento de estos buques se está estudiando en condiciones en muchos de los que más contribuyen a la regulación de la resistencia vascular se han eliminado, incluso neuronales, humorales, metabólicas, etc Por lo tanto, el investigador recibe una tarjeta amarilla para evitar la sobre- interpretación y extrapolación de los datos que se recogen la utilización de esta preparación. La otra área importante de preocupación con respecto a esta preparación es que puede ser muy fácil de dañar los componentes celulares, tales como el revestimiento endotelial o el músculo liso vascular, de tal manera que la fuente variable de error puede ser introducido. Se recomienda encarecidamente que el investigador individual utilizan las medidas apropiadas para garantizar la calidad de la preparación, tanto en el inicio del experimento y periódicamente durante el curso de un protocolo.
El protocolo presentado describe la canulación de aislamiento, la eliminación y de un doble microvasos del músculo esquelético, aunque esta técnica general puede aplicarse fácilmente a la mayoría de los tejidos. Para el manuscrito actual, el término "arteriola" ha sido utilizado por los autores para describir a un buque de la resistencia que oscila entre 70-120 micras de diámetro, bajo tono activo de reposo, que es también una importante contribución a la regulación de la resistencia a la perfusió…
The authors have nothing to disclose.
Este trabajo fue apoyado por la American Heart Association (EIA 0740129N) y NIH HL90610 T32.
Reagents and Equipment | Company | Comments/Catalogue # |
Vessel Chamber | Custom | Dave Eick (MCW) |
Heated Circulating Water Bath | PolyScience and Haake | Haake DC 10 |
Pipets | Frederick Haer & Co. | Capillary Tubing 2.0 mm OD x 1.0 mm ID (27-33-1) |
Pressure Monitor | World Precision Instruments | |
Water Jacketed Reservoir | Custom | |
External Light Source | World Precision Instruments | Novaflex |
Pipet Puller | MicroData Instruments | PMP102 Micropipet Puller |
Full complement of surgical tools | Fine Science Tools | Dumont |
Ultra Fine Forceps | Fine Science Tools | Inox #5 |
Silk Suture Thread | Ethilon | #10-0 or 9-0 |
Stereo Microscope | Olympus | Olympus SZ-11 |
Analog Video Calipers | Boeckeler | Via Controller (Via-100) |
High Resolution Analog Camera | Panasonic | GP-MF 602 |
Oxygen Tank | Regional | 21% balance nitrogen and 5% CO2 balance nitrogen |
Tubing | Tygon | |
Drain Pump | Cole Parmer Instrument Co. | |
Modified Rat PSS | See recipe below | |
Van Breemen’s Relaxant PSS | See recipe below |
Table 1. A list of the major components of isolated microvessel station setup presented in the Figures.
Modified Rat PSS Recipe | To make two liters of PSS | 20X Salt Stock (2L) | 20X Buffer Stock (2L) |
NaCl | 278.0 g | ||
KCl | 14.0 g | ||
MgSO4-7H2O | 11.5 g | ||
CaCl2-H2O | 9.4 g | ||
NaHCO3 | 80.8 g | ||
EDTA | 0.4 g | ||
NaH2PO4 | 0.28 g | ||
Glucose | 1.98 g | ||
20x Salt Stock | 100 mL | ||
20x Buffer Stock | 100 mL | ||
Distilled Water | 1800 mL |
Table 2. Recipe for standard physiological salt solution (PSS) used in the isolated microvessel protocols.
Comments on Recipe: Make 2 L of Salt Stock and 2 L of Buffer Stock. These can be refrigerated when not being used, but shake them well and often before preparing PSS. The additional ingredients are added at the time of preparation of final PSS.
Van Breemen’s Relaxant PSS | To make 2 liters of PSS | 20X Salt Stock (1L) | 20X Buffer Stock (1L) |
NaCl | 107.4 g | ||
KCl | 7.0 g | ||
MgSO4-7H2O | 5.76 g | ||
MgCl2-6H2O | 81.32 g | ||
NaHCO3 | 40.4 g | ||
EDTA | 0.2 g | ||
EGTA | 15.22 | ||
NaH2PO4 | 0.28 g | ||
Glucose | 1.98 g | ||
20x Salt Stock | 100 mL | ||
20x Buffer Stock | 100 mL | ||
Distilled Water | 1800 mL |
Table 3. Recipe for Van Breemen’s relaxant physiological salt solution (PSS) used in the isolated microvessel protocols under conditions of zero active tone.
Comments on Recipe: Make 1 L of Salt Stock and 1 L of Buffer Stock. These can be refrigerated when not being used, but shake them well and often before preparing PSS. The additional ingredients are added at the time of preparation of final relaxant PSS.