本稿では、消費税角膜に単純化した技術を説明し、人間の死体ドナーの眼の世界から網膜組織を骨抜きにする。ここで説明する手法は眼球の他の組織を損なうことなく移植、外科的または研究目的のために使用されて消費税質の良い組織に役立ちます。
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この記事について
サマリー
要約
摘出は世界の残りの部分が邪魔されずに残して死体ドナーから眼球を取得するプロセスです。切除は眼球からそれは別カットし、眼組織、特に角膜の取得を指します。内臓全摘術は、網膜としてここに呼ばれる内臓を除去するプロセスです。眼球、角膜、強膜、硝子体、レンズ、虹彩、網膜、脈絡膜、筋肉など（補遺図1）で構成されています。患者が角膜損傷に苦しんでいるときに、角膜を削除する必要があり、健全なものがkeratoplastic手術で移植しなければなりません。遺伝性疾患または網膜機能の欠陥は、視力を損なう可能性があります。人間の眼の地球儀は、眼組織にそのような目の銀行、人間の角膜または強膜の移植や研究など様々な外科手術に使用することができます。しかし、人間の角膜と網膜切除で利用可能な情報はほとんどおそらく、Lのためにありますヒトの組織にimitedアクセシビリティ。同様の手順を説明する研究のほとんどは、動物モデルで実行されます。研究者達は、人間の目の開発、恒常性と機能に関する知識を拡張するために適切に解剖し、よく保存された眼組織の可用性に依存しています。我々は彼らの約40％（ 表1）研究目的のために使用されているのうち眼地球儀の高い金額を受け取るように、我々は消費税に技術を定義し、これらの組織の実験の膨大な量を実行し、定期的にそれらを保存することができます。
角膜は網膜上に光の透過を可能にし、この目的のために、常に透明性の良好な程度を維持する必要があります血管組織である。角膜内に、幹細胞の貯水池である縁領域は、上皮細胞の再建を助け、角膜の透明性と明確性を維持する結膜の異常増殖を制限します。大きさや目それらのいずれかの変化が気を取られ、不明瞭なビジョンにつながるとして、角膜のicknessは、明確なビジョンのために重要である。角膜は5層から成り、内皮細胞）上皮、b）のボーマン層、c）の間質、d）はデスメ膜と、e）。すべての層は、明確なビジョン4,5,6を確保するため適切に機能する必要があります。脈絡膜は、ブルッフの膜でインテリアに囲まれた強膜と網膜の間の中間的なチュニックであり、そして目の血流を担当しています。脈絡膜はまた、網膜5,6の外側の層に温度と供給栄養を調整するのに役立ちます。受光部と非受容部：網膜は眼球（補遺図1）の背面をカバーし、2つの部分から構成され神経組織の層である。網膜は角膜とレンズからの光を受け取るために役立ち、最終的には視神経5,6の助けを借りて脳に伝達化学エネルギーに変換します。 ove_contentは、 ">この論文の目的は、人間の眼の地球儀から角膜と網膜組織の解剖のプロトコルを提供することです。隣接組織との交差汚染を回避し、RNAの完全性を維持するような組織が目的とした研究目的のために不可欠であるとして、基本的に重要である（i）で、再生医療プロジェクトのための幹細胞を単離、及び（iii）影響を受ける/健常者から組織間の組織の違いを評価する（II）、眼組織のトランスクリプトームを特徴づける。本論文で我々は現在、削除するために使用するテクニックについて説明します。角膜、眼球から脈絡膜と網膜組織。ここでは、人間の眼球の解剖と角膜と網膜組織の切除のための詳細なプロトコルを提供しています。付属のビデオは、研究者は、取得のために適切なテクニックを学ぶのに役立ちます定期的に見つけることが困難な貴重なヒト組織の。
プロトコル
1。角膜の上皮切除における眼のグローブから
- 約15分使用する前に、層流キャビネットのスイッチをオンにします。 70％イソプロピルアルコールを使用して、層流フードをきれいにします。そのような手術帽、マスクなどの個人防護服を着用します。手と前腕をスクラブし、滅菌タオルを使用して乾燥させます。無菌テクニックを使用して滅菌手袋とガウンまたはスリーブを着用してください。
- 無菌的に滅菌器具トレイを配置することにより、滅菌フィールドを設定します。楽器は無菌であることを確認します。滅菌器械パックを開き、すべての汚染を回避し、滅菌フィールドに反転させます。
- 彼らは、使いやすさのための滅菌フィールドの端に隣接しているように目の地球儀を含むボトル（目のjarファイル）と一緒にすべて滅菌材料、楽器（ 表2）を置きます。
- 表3に示すように、予め調製し保存/記憶媒体でボトルにラベルを付け、配置I-PVP（ポリビニルピロリドンヨウ素）、チオ硫酸ナトリウムと滅菌生理食塩水、PBS（リン酸緩衝生理食塩水）とともに、層流フードの表面上のメートル。
- 彼らは4℃で冷蔵庫内に保存される眼組織およびソリューションは、通常の室温に到達できるように繰り返される地球温暖化/冷却サイクルを避けることができます。ソリューションと、それぞれの瓶の隣に上向きに直面している内側の目の瓶の蓋を保持....
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ディスカッション
温度変化や誤操作は、網膜組織の整合性が損なわれる可能性があり、一方そのようなデスメ襞の内皮損傷または高数としてマイナー欠陥が角膜の移植失敗につながることができますので、正しい切除と角膜と網膜組織の適切な保全の両方が重要です。本稿の目的は、角膜と網膜の組織が移植や研究目的の使用を危険にさらす可能性が損害の変化を誘発することなく、最適に分離することができる方法を示すことです。最低限必要な細胞密度（> 2200細胞/ mm 2）、そのような細胞の大きさとしてよい形態、構造、角膜の優れた透明性と適切な厚さと一緒に細胞間の境界線や筋ジストロフィーの不在の低変性のために組織が 適しています特徴です移植。手術用メスの刃が使用されている場合は大体、または他の楽器が激しく使用されている、それだけで角膜だけでなく、furtを作る硝子体に損傷を与えません。他の組織の彼女の切除が困難（ 図4）。網膜は透明な組織や硝子体の液体がそれにリリースされた場合、これは通常、より複雑な網膜組織の切除を行い識別することは困難である。硝子体を切除した場合は、網膜組織または抽出したRNAの品質は他の眼の部分と汚染.......
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開示事項
著者らは、利害の衝突はありません。
謝辞
この作品は、Regioneヴェネト州（未公表Sanitaria Finalizzata n.292/2008と未公表Sanitaria Finalizzata 2009年）の助成金によって部分的にサポートされていました。著者らは、人間の眼の地球儀の使用に関する2010分の2009、サマリー·データに博士C. Griffoniに感謝します。
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材料
角膜と網膜の切除のための材料。
| 名前 | 会社 | カタログ番号 | コメント |
|---|---|---|---|
| 製品記述 | 大きさ | 企業/研究所 | |
| 保護された使い捨てメス | ブレードサイズ15 | スワン·モートン | |
| 滅菌包帯 | は5cm x 5cm、8階層、5個 | Artsana | |
| 滅菌済みディスポーザブル医療タオル | 35 X 50センチメートル | U.Jet | |
| 滅菌はさみ | ブレード24ミリメートル/全体の長さ。無愛想な湾曲した95ミリメートル、 | e.janach | |
| 滅菌ピンセット | ステンレス鋼-100ミリメートル11 X 2は、0.70ミリメートルの歯によって支配さ | e.janach | |
| 角膜の爪 - 使い捨て医療機器 | NIIOS（Hippocratech） | ||
| 準備 | |||
| PBS | [10倍] 900ミリリットルD / W（蒸留水）100 mlのPBS | Sigma-Aldrich社 | |
| NA-チオ | PBS [1X]の1リットルの1 GMのNa-チオ | Sigma-Aldrich社 | |
| I-PVP | 1リットルD / Wの5、GM I-PVP | Sigma-Aldrich社 |
表2の表では、角膜と網膜の切除、それらがから受信されている会社のために使用される材料について説明します。
記憶媒体のための材料（2000ミリリットル）。
| コンポーネント | サプライヤー | カタログ番号 | 濃度 | 量 |
|---|---|---|---|---|
| MEM（1X）液体 | インビトロジェン | 32360-034 | 1900ミリリットル | |
| ピルビン酸ナトリウム | インビトロジェン | 11360-039 | 1mMの（10ミリリットル/リットル） | 20ミリリットル |
| L-グルタミン酸 | インビトロジェン | 25030-032 | 2mMの（10ミリリットル/リットル） | 20ミリリットル |
| 抗生物質/抗真菌剤 | Sigma-Aldrich社 | A5955-20mlの | 10ミリリットル/リットル | 20ミリリットル |
| 新生仔ウシ血清 | インビトロジェン | 26010から74 | 2％（20ミリリットル/リットル） | 40ミリリットル |
表3。記憶媒体のための材料。
記憶媒体の準備
瓶の上に与えられたとして、特定の濃度を用いてすべての材料を加え、よく混ぜる。それらをフィルタリングする蠕動ポンプの助けを借りて、0.2ミクロンのフィルター（ミリポア、ミラノ、イタリア）の細孔径を使用します。室温でボトルに培地を保持します。
輸送培地（2000 ml）のための材料。
| コンポーネント | サプライヤー | カタログ番号 | 濃度 | 量 |
|---|---|---|---|---|
| MEM（1X）液体 | インビトロジェン | 32360-034 | 1800ミリリットル | |
| ピルビン酸ナトリウム | インビトロジェン | 11360-039 | 1mMの（10ミリリットル/リットル） | 20ミリリットル |
| L-グルタミン酸 | インビトロジェン | 25030-032 | 2mMの（10ミリリットル/リットル） | 20ミリリットル |
| 新生仔ウシ血清 | インビトロジェン | 26010から74 | 2％（20ミリリットル/リットル） | 40ミリリットル |
| デキストランT500 | Pharmacosmos | 551005004007 | 6％（60グラム/リットル） | 120グラム/リットル |
表4。輸送媒体のための材料。
輸送培地の調製
MEMの〜1.5リットルのデキストラン6％を追加し、一晩そのままにしておきます。真空ポンプを用いて0.2ミクロンのフィルター（ミリポア、ミラノ、イタリア）を使用して、メディアやフィルターの成分の残りの部分を追加します。室温でボトルに培地を保持します。
参考文献
- Fay, A. Diseases of the visual system. Cecil Medicine. Goldman, L., Ausiello, D. , 23rd ed, Saunders Elsevier. Philadelphia, Pa. (2007).
- Parekh, M., Megaw, R., Ray-Chaudhuri, A., Ahmad, S. Patents in Limbal Stem Cell Biology. Recent patents on Regenerative Medicine. 1, 207-212 (2011).
- Pharm, U. S.
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再版と許可
