أسلوب مبسط لل Published: June 12, 2012 doi: 10.3791/3765

DOI

Automatic Translation

• English (Original)
• العربية (Arabic)
• 中文 (Chinese)
• dansk (Danish)
• Nederlands (Dutch)
• français (French)
• Deutsch (German)
• עברית (Hebrew)
• हिंदी (Hindi)
• italiano (Italian)
• 日本語 (Japanese)
• 한국어 (Korean)
• norsk (Norwegian)
• português (Portugese)
• русский (Russian)
• español (Spanish)
• svenska (Swedish)
• Türkçe (Turkish)

Mohit Parekh¹, Stefano Ferrari¹, Enzo Di Iorio¹, Vanessa Barbaro¹, Davide Camposampiero¹, Marianthi Karali², Diego Ponzin¹, Gianni Salvalaio¹

¹Fondazione Banca Degli Occhi del Veneto O.N.L.U.S., ²Telethon Institute for Genetics & Medicine (T.I.G.E.M.)

Summary

وتصف الورقة تقنية مبسطة لاستئصال القرنية وسلب أنسجة شبكية العين من الكرة الأرضية من الجهات المانحة جثي الإنسان. ووصف هذه التقنية هنا ستساعد على استئصال الأنسجة ذات نوعية جيدة لاستخدامها في زراعة الأعضاء، وأغراض الجراحية أو البحث دون الإضرار الأنسجة الأخرى من الكرة الأرضية العين.

Protocol

1. في الاستئصال الموقعي للقرنية العين من الكرات

1. التبديل على تدفق الهواء الصفحي مجلس الوزراء حوالي 15 دقيقة قبل الاستخدام. تنظيف غطاء محرك السيارة باستخدام تدفق رقائقي ايزوبروبيل 70٪. ارتداء ملابس الوقاية الشخصية مثل قبعة الجراحية وقناع. فرك اليدين والساعدين وتجفيف باستخدام منشفة معقمة. ارتداء قفازات معقمة وثوب أو الأكمام باستخدام تقنية العقيم.
2. إعداد حقل معقمة عن طريق وضع صك علبة معقم جو معقم و مطهر. تحقق من أن الصكوك هي عقيمة. فتح حزمة الأدوات المعقمة والوجه إلى حقل معقمة تجنب أي تلوث.
3. وضع جميع المواد المعقمة والصكوك (الجدول 2) جنبا إلى جنب مع زجاجات (الجرار العين) التي تحتوي على الكرات العين بحيث تكون بالقرب من حافة مجال العقيمة لسهولة الاستخدام.
4. تسمية الزجاجات مع المحافظة أعدت سابقا / وسائط تخزين كما هو مبين في الجدول رقم (3) ووضعم عن سطح تدفق الهواء على طول غطاء محرك السيارة الصفحي مع PVP-I (بوفيدون اليود)، ثيوكبريتات الصوديوم ومحلول معقم المالحة في برنامج تلفزيوني (فوسفات المالحة عازلة).
5. السماح للأنسجة العين والحلول للوصول إلى درجة حرارة الغرفة العادية كما يتم الاحتفاظ بها في الثلاجات في 4 درجة مئوية. تجنب تكرار ظاهرة الاحتباس / التبريد دورات. الحفاظ على أغطية من الحل والجرار العين مع الجانب الداخلي متجهة لأعلى بجوار الجرار كل منهما.
6. إزالة الشاش والضمادات من جرة العين باستخدام ملقط معقم. تزج العالم في معقم 0.5٪ I-PVP لمدة 2 دقيقة لإزالة التلوث من الكرات بصري. ضع ملقط اثنين على غطاء علبة معقم، خارج مجال معقم. نقل في العالم في الصوديوم 0.1٪ ثيوكبريتات لمدة 1 دقيقة باستخدام زوج آخر من ملقط معقم. باستخدام ملقط نفسه، نقل العالم إلى زجاجة تحتوي على محلول ملحي معقم (PBS) وتركه حتى يتم تشغيله. كرر نفس الإجراء في العالم في العين الأخرى من تيهو المانح نفسه.
7. تعمل تحت غطاء محرك السيارة رقائقي تدفق الهواء، والتفاف العالم باستخدام شاش معقم (الضمادات) ترك القرنية والصلبة حوالي 5 ملم من القرنية وكشف. ويمكن لمبة العين عقد ببساطة في يد الحفاظ على ضغط كاف. يجب أن تبقى في الأنسجة رطبة أثناء عملية جراحية كامل.
8. وتستخدم جنبا إلى جنب مع مقص ملقط لإزالة كافة بقايا في نهاية المطاف في الملتحمة. الحفاظ على الأدوات المستخدمة في العملية المذكورة أعلاه منفصلة عن غيرها من الصكوك. استخدام شفرة المشرط لإجراء شق الصلبة من 3-4 ملم من منطقة حوف، ثم توسيع الشق من 360 درجة، وتجنب أن خرم الأنسجة الكامنة العنبي أو التسبب في أي تشويه للانحناء القرنية طبيعية. خفض 4 شقوق كبيرة ترك أربع فجوات صغيرة تجنب إفراز الجسم الزجاجي. يتم قطع كل الفجوات الأربع ضمان عدم إزالة أي نوع من الأنسجة الأخرى.
9. وجود لويحات الصلبة الصغيرة قد تعرقل عدة قطاعات، وذلك للتأكد من شركاتوليته في استئصال الصلبة مع مقص المجهرية. يجب أن يتم تنفيذ هذه العملية دون الإضرار هيئة المشيمية، الشبكية والجسم الزجاجي.
10. تفقد شق للتأكد من أنها كاملة. إذا كان قد تم تنفيذ شق بشكل صحيح corneo-الصلبة تلتزم حافة إلى الهيئات الهدبية فقط عند نقطة في المراسلات مع القرنية.
11. تعيين العالم بصري ملفوفة عليها بالقرب من وسط الميدان العقيمة. إتمام إزالة القرنية باستخدام ملقط لعقد حافة الصلبة الثابتة واليد تستخدم لاستئصال لسحب الجسم الهدبي، المشيمية الهبوط وبعيدا عن زر corneo-الصلبة.
12. فصل بلطف أي التصاقات المتبقية من زر corneo-الصلبة. لا سحب حافة corneo-الصلبة في الطريقة التي يمكن أن تسبب التوتر عبر القرنية ولا يسمح لها أن تنخفض مرة أخرى يسقط على الغرفة الأمامية.
13. يتم فحص كثافة الخلايا البطانية للقرنية باستخدام محلول ناقص التوتر ويتم التحقق من وفيات الخلية باستخدام فندق Trypثم يتم عد 1 تلطيخ الزرقاء لحوالي 1 دقيقة والخلايا تحت المجهر الضوئي وقياس مثل خلايا / مم ^2. يجب على الغرفة الأمامية مواجهة غطاء الخلفي في حين يجب ان يواجه الجزء السفلي من لوحة بيتري. يمكن الاعتماد على كثافة الخلية البطانية يدويا باستخدام الشبكة في موضوعي تحت التكبير 100X. الحد الأدنى لعدد خلايا المقبولة للزرع في إيطاليا 2200 الخلايا البطانية / مم ^2.
14. نقل حافة corneo-الصلبة باستخدام مخلب القرنية إلى معدة مسبقا وسائط تخزين القرنية الحفاظ على RT (درجة حرارة الغرفة) كما هو مبين في الجدول رقم 3.
15. دراسة لغرفة الخلفي عدسة البلورية الطبيعية. اذا كان مستعدا للالصلبة، وإزالة كافة المخلفات من العنبية والفكاهة زجاجي من العالم. بسط بعناية ويعود الجزء المتبقي الخلفي إلى جرة له عين كل منها، وذلك باستخدام تقنية العقيم. كرر الإجراء العالم الأخرى باستخدام أدوات جديدة. إصلاح الطرافة القرنيةح مخلب القرنية والحفاظ عليها في ظل وسائط التخزين (ثقافة الجهاز) في 31 درجة مئوية. ويمكن بعد ذلك القرنية استئصاله، كما هو مبين في الشكل 1A، أن تستخدم لالقرنية أو البحث.
16. تخلص من المواد غير الضرورية والحيوية للنفايات الخطرة في صناديق النفايات المناسبة. تنظيف منطقة العمل بمجرد الانتهاء من العمل باستخدام 70٪ رذاذ ايزوبروبيل.
17. إذا، بعد 28 يوما القرنية يحافظ على جميع المعلمات التقييم [مثل التشكل، عدد الخلايا، والشفافية، وسماكة واختبارات علم الأحياء الدقيقة - البكتيرية والفطرية باستخدام Bactec 9240 صك (بيكتون ديكنسون، ميلانو، ايطاليا)]، ويمكن بعد ذلك يتم نقلها إلى للمستشفيات باستخدام وسيلة النقل هو مبين في الجدول رقم 4. وينبغي إزالة القرنية وضعت من تخزين لنقل المتوسطة تحت الهواء الصفحي مجلس الوزراء تدفق.
18. كما، خلال التخزين، والقرنية يحصل على أكثر سمكا من حجمها المعتاد اللازمة لزراعة الأعضاء، وبنوك العيون استخدام دي تورم وكلاء للحد من سمك. نحناستخدام 6٪ ديكستران T500 للحصول على قرنية العين يعود إلى حجمه الطبيعي في وسط النقل. على الرغم من ويمكن استخدام 4-8٪ ديكستران T500، وقد عمل 6٪ أفضل بالنسبة لنا. هذا يجعل من الاسهل للجراحين زرع القرنية بمجرد الحصول عليها.

2. سلب للشبكية العين من الكرة الأرضية بعد استئصال القرنية

1. بعد الاستئصال، يتم تحديد لعملية زرع قرنية أو البحوث على أساس التشكل، وكثافة الخلايا البطانية ويتم وضعها في التخزين أو المتوسطة المحافظة في 31 درجة مئوية. ثم تتم معالجة ما تبقى من العالم بصري لاستخدامها مرة أخرى مثل العزلة الصلبة للأغراض الجراحية، وشبكية العين للبحوث الخ.
2. قبل الختان في شبكية العين، تأكد من أن الكرة الأرضية العين غير سليمة والقرنية فقط مع جزء من الصلبة تتم إزالة. إذا كان الجسم الزجاجي هلامي هو إفراز من يصبح من الصعب إزالة أنسجة الشبكية.
3. إذا كانت الجهات المانحة هي أقل من 65 سنة من العمر، وغير الصلبةحفظت تحت برنامج تلفزيوني العقيمة للأغراض الجراحية بعد الاختبار المصلي. في هذه الحالة، لا يتم قطع الصلبة، تتم إزالة فقط الجسم الزجاجي ويتم الاحتفاظ الصلبة كله.
4. للختان في شبكية العين، وتبدأ مع قطع صغيرة أو شق من الجانب القرنية الصلبة من التحرك نحو العصب البصري باستخدام ملقط معقم، ومقص. عقد جزء من الصلبة باستخدام ملقط وقطع مع مقص مباشرة نحو العصب البصري قطع جزءا جزءا تفادي الأضرار التي لحقت الجسم الزجاجي.
5. يجب أن يتم فصل الصفائح المشيمية من الصلبة كما عالقون معا. قطع الصلبة كامل لفضح الأنسجة المشيمية. بمجرد أن يتم قطع تماما الصلبة، فصل الصلبة مع ما تبقى من الجسم الزجاجي بواسطة قطع عليه بالقرب من العصب البصري. سيكون لكرة كامل من الجسم الزجاجي مغطاة المشيمية تكون واضحة كما هو مبين في الشكل 2A.
6. باستخدام اثنين من ملقط معقم إزالة الطبقة المشيمية بلطف عن طريق التقاط أنه حتى مع واحدزوج من الملقط وإزالته مع الآخر. بدلا من ذلك، يمكن إزالة طبقة المشيمية باستخدام مقص ولكن ينبغي من الناحية المثالية هذا يمكن تجنبها لأنها قد تتسبب في الأضرار التي لحقت في شبكية العين. إزالة الطبقة المشيمية جزئيا وقطع عليه لتسهيل إزالة.
7. وبمجرد إزالة طبقة المشيمية، سوف ينظر طبقة شفافة من شبكية العين بشكل واضح كما هو مبين في الشكل 2B. طبقة المشيمية لديه غشاء 1 بروك الداخلية التي يمكن أيضا إزالة ولكن من الصعب تحديد ذلك مع بالعين المجردة.
8. وبالمثل، استخدام اثنين من الملقط لإزالة طبقة شبكية العين كما هو موضح في الشكل 2C. فمن السهل أن عزل كمية عالية من شبكية العين إذا رفعه بالقرب من العصب البصري. ويمكن جميع طبقات العين ينظر إليها الآن كما هو مبين في الشكل 2D.
9. مرة واحدة تمت إزالة أنسجة الشبكية، يمكن أن تستخدم لأغراض مختلفة، وبالتالي فإن الخطوات اللاحقة والظروف المستخدمة لحفظ قد تختلف وفقا لذلك. على سبيل المثال،يمكن وضعها في نسيج الشبكية التي تحتوي على الحمض النووي الريبي في أنابيب استقرار الكواشف (مثل RNAlater) أو تحلل عازلة (على الحمض النووي الريبي DNA أو الاستخراج)، dispase / التربسين (لعزل الخلايا)، وحلول تحديد (قبل تضمين الأنسجة في البارافين أو أكتوبر لل المناعية).
10. مسح كل منطقة عمل وتنظيف المنطقة باستخدام 70٪ رذاذ ايزوبروبيل.

3. ممثل النتائج

حافة corneo-الصلبة كما رأينا في الشكل 1A هو قرنية رفعه بشكل صحيح مع المبلغ المطلوب من حافة الصلبة والصرف البطانية، وهذا النوع من القرنية ويستخدم عادة لاختراق القرنية. في حالة تلف سدى الأمامي للقرنية استئصاله مع وجود غموض، يمكن أن تستخدم في القرنية لالقرنية البطانية / القرنية صفاحي الخلفي (البطانة مع جزء من سدى). في حين، في حالة تلف طبقة بطانة أو إذا كانت كثافة الخلية البطانية هو <2200 خلية / مم ² (وعليان قياسي)، يمكن أن تستخدم في القرنية لالقرنية صفاحي الأمامي (ظهارة مع جزء من سدى الأمامي). إذا كان عدد خلايا بطانة الأوعية الدموية أقل من المطلوب، يمكن أن تستخدم في القرنية لالقرنية صفاحي الأمامي أو الأبحاث في حين، في حالة تلف القرنية تماما، ويمكن استخدامه للبحث كما هو مبين في الشكل 1B، 3B و 3C أو التخلص منها. الأضرار التي يمكن أن تكون سببا في سوء النسيج، جراحة إعتام عدسة العين قبل مما أدى إلى ندوب البطانية اللحمية أو descemet، ووضع الأذى الجسدي خلال إلخ حياة المريض وبالتالي، يصبح من الضروري للتأكد من كل الأنسجة مع المصباح الشقي ثم تحت المجهر الضوئي لل غرامة ندوب / طيات / المفارز. يتم الاحتفاظ عادة القرنية تحت ظرفين مختلفين مثل ثقافة الأعضاء (حوالي 31 درجة مئوية) تستخدم عادة في البلدان الأوروبية أو شروط منخفض الحرارة (حوالي 4 درجات مئوية) عادة ما تستخدم في الولايات المتحدة. نحن نستخدم الثقافة الجهاز لأنه يساعد على تجديد السدالخلايا الظهارية المسنين، لإعادة تنشيط الخلايا البطانية شيك مع الوقت بعد الوفاة عالية، وفترة التخزين من 4 أسابيع الذي يعطي نافذة كافية للتخطيط لعملية جراحية، ويعطي وقتا كافيا لإجراء الاختبارات الميكروبيولوجية (البكتيرية والفطرية) والمصلية الخ القرنية ويمكن الحفاظ عليها بشكل جيد في وسيلة النقل لمدة 7 أيام.

ويمكن خفض الصلبة جزءا جزءا ضمان إزالة جميع لوحات لطيف من المشيمية. يمكن أن تفرز السائل الزجاجي عندما يتم قطع العصب البصري، المشيمية أو شبكية العين بشكل حاد كما هو مبين في الشكل (4). ينبغي الحفاظ على شبكية العين إذا رفعه لتحليل الحمض النووي الريبي في RNAlater حالما يتم رفعه للأنسجة. وعادة ما يتم استئصاله 1X1 سم من طبقة المشيمية والشبكية، وبعد حفظها في RNAlater لمدة 24 ساعة في 4 درجات مئوية تحت يتم الاحتفاظ -80 درجة مئوية في أنابيب إيبندورف الطازجة (آمن للانغلاق أنابيب، 2 مل) حتى المستخدمة أو التي يتم شحنها مع جاف الجليد. وينبغي استئصاله من الأنسجة الشبكية باستخدام اثنين من ملقط قرب العصب البصري بعيدا عن قزحيةأو هامش الهدبية لتجنب التلوث مع الهياكل الأخرى المصطبغة وينبغي نقلها إلى الحاوية الحفاظ على الفور كما يحصل على الحمض النووي الريبي غير مستقر في حين استرجاع شبكية العين.

الشكل 1 مقارنة بين الجيد والقرنية نوعية رديئة: أ) قرنية رفعه بشكل صحيح. يتم الاحتفاظ عادة مثل هذه القرنية تحت ثقافة الجهاز لمدة 4 أسابيع. يتم تنفيذ الميكروبيولوجية (باستخدام أداة Bactec 9240)، والمورفولوجية (تلطيخ الخلايا مع أزرق التريبان لتحديد معدل الوفيات الخلية ومراقبة الخلايا تحت المجهر الضوئي مع التكبير 100X) فحص قبل نقله إلى المستشفى (الشكل 3A)؛ ب) قرنية عازمة ، الأمر الذي يؤدي في نهاية المطاف إلى رفض الطعم بسبب طيات descemet عالية وعالية تلف الخلايا البطانية دراسة باستخدام مجهر المصباح الشقي. وعادة ما تستخدم مثل هذه القرنية عن الدقةيتم تجاهل أو earch.

الشكل 2. الطريقة المستخدمة لضمان الاستئصال الدقيق للأنسجة الشبكية. أ) تشريح الصلبة العينية من العين في العالم باستخدام شفرة 24MM مع 95 مم المنحني أو مقص نهاية حادة معقمة و11X2 100 ملم يحكمها 0،70 ملم أسنان ملقط معقم. وينبغي قطع الصلبة من خلال عقد جانب واحد مع ملقط قطع عليه مباشرة نحو العصب البصري باستخدام مقص. والآن طبقة المشيمية أن ينظر إليه بسهولة؛ ب) استخدام 2 11X2 100 ملم يحكمها أسنان مم 0،70 ملقط معقم، تتم إزالة المشيمية من قبل تمزيقه، الذي يكشف عن الكامنة وراء طبقة الشبكية شفافة؛ ج) يتم استئصاله طبقة الشبكية شفاف بعناية فائقة قرب العصب البصري دون إفراز السائل الزجاجي باستخدام ملقط نفسه. وينبغي على كل من ملقط عقد كل جانب من شبكية العين، وينبغي أن بلطف الأنسجة يمكن إزالتها startinز بالقرب من العصب البصري يتجه نحو القرنية، للحصول على كمية لا بأس بها من أنسجة الشبكية. يمكن قطع نسيج إلى أحجام مختلفة وتستخدم لتحليل التجارب د) يمكن الاطلاع على طبقات مختلفة في العين بعد إزالة القرنية في هذا الرقم. تتم إزالة الجسم المشيمية أولا تليها شبكية العين دون الإضرار أجزاء أخرى من العين.

الشكل 3. مقارنة بين أنواع مختلفة من كثافة الخلايا والصرف ينظر تحت التكبير 100X من المجهر الضوئي. أ) جيد كثافة الخلايا البطانية (> 2200 خلية / ملم ²⁾ والتشكل (أقل تعدد الأشكال، انحطاط منخفضة، وضمور لا و 0٪ معدل وفيات) في قرنية العين التي هي مناسبة لزرع ب) ضعيف كثافة الخلية البطانية (1200 تقريبا - 1400 خلية / ملم ²⁾ ومورفولوجية (تعدد الأشكال عالية جدا وديجينويلاحظ مواصلة النظر الخلايا) جنبا إلى جنب مع معدل الوفيات 30-40٪ تقريبا العام للدورة بعد تلطيخ أزرق التريبان ج) في حالة تلف جزء من الخلايا البطانية بسبب انفصال ورقة البطانية أثناء استرداد القرنية من العالم بصري. ويتأكد هذا من خلال مراقبة وفيات من الخلايا في المنطقة من خلال ملون أزرق التريبان د) تتشكل الطيات وdescemet وبسبب سوء التعامل من القرنية عن طريق الانحناء، وخلق التوتر عبر القرنية، وذلك باستخدام الأدوات وغيرها بشكل مكثف في وقت الختان. هذا الرقم يدل على سميك طيات علاجي المنشأ نموا وجدت بين المحيط والمنطقة البصرية للقرنية.

الشكل 4. إلى إلحاق أضرار المشيمية والأنسجة الشبكية في حين استئصال القرنية يؤدي في النهاية إلى إفراز السائل الزجاجي. يحصل على المتورطين في شبكية العين في الجسم الزجاجي مما يجعل من الصعب استئصال نسيج نوعية جيدة وايthout تلوث.

الجدول رقم 1. ملخص مجموعة من الأنشطة التي تقوم باستخدام الكرات بصري الإنسان خلال عامي 2009 و 2010 في بانكا Fondazione ديغلي Occhi (فينيسيا، إيطاليا). واستخدمت ما يقرب من 60٪ من أنسجة للزرع، وبالتالي ترك عدد كبير من الكرات بصري (حوالي 40٪) للبحوث العلمية والطبية.

الشكل التكميلية 1. تشريح العين البشرية ^5. يشار إلى أجزاء مختلفة من العين البشرية في هذا الشكل، وتستخدم لمتابعة الموقف الدقيق للأنسجة.

Discussion

كلا، الختان الصحيح والسليم لحفظ الأنسجة القرنية والشبكية حاسمة كما وجود بعض العيوب البسيطة مثل تلف بطانة الأوعية الدموية أو عدد كبير من طيات descemet ويمكن أن يؤدي إلى فشل الكسب غير المشروع للقرنية في حين التعديلات درجة الحرارة أو سوء يمكن ان تعرض للخطر سلامة أنسجة الشبكية. والهدف من هذه الورقة هو لاظهار كيف يمكن أن تكون معزولة الأنسجة القرنية والشبكية على النحو الأمثل، من دون إحداث أضرار أو التعديلات التي يمكن أن تضر استعمالها للزراعة أو لأغراض البحوث. الخلية الحد الأدنى المطلوب كثافة (> 2200 خلية / ملم ^2)، مورفولوجيا جيدة مثل حجم الخلية، وهيكل، انحطاط منخفض من الحدود بين الخلايا وعدم وجود ضمور جنبا إلى جنب مع الشفافية جيدة وسمك مناسب للقرنية هي السمات المميزة التي تجعل من أنسجة مناسبة لل زرع. إذا تم استخدام شفرة مشرط تقريبا أو تستخدم أدوات أخرى بشكل مكثف، فإنه لا يضر فقط في القرنية، ولكن أيضا في الجسم الزجاجي الذي يجعل furtالختان لها من الأنسجة الأخرى أكثر صعوبة (الشكل 4). الشبكية هي عبارة عن نسيج شفاف وبالتالي يصعب تحديد إذا كان إطلاق السائل الزجاجي مع ذلك، وهذا يجعل من عادة الختان من أنسجة الشبكية أكثر تعقيدا. إذا رفعه مع الجسم الزجاجي، ونوعية الأنسجة الشبكية أو الحمض النووي الريبي المستخرج تكون سيئة للغاية بسبب التلوث مع أجزاء العين الأخرى. وبالتالي، تقنية مناسبة لقرنية العين 1 المكوس أو شبكية العين من المهم جدا لاسترداد الأنسجة عالية الجودة.

بياناتنا السابقة من خلال العامين الماضيين (الجدول 1) تشير إلى أن ما يقرب من 60٪ من القرنيات التي نجمعها من الكرات العين هي مناسبة لأنواع مختلفة من الزرع. وهذا هو دليل آخر على أن تقنية استئصال القرنية وصفها في هذه الورقة هي وسيلة جيدة لجمع أنسجة القرنية عالية الجودة من الكرات بصري. قد القرنيات، بالطبع، أن تكون غير صالحة للزراعة بسبب غيرها من المعلمات قاوك كما شذوذ اللحمية، والتلوث، وكثافة البطانية / المورفولوجيا ومدى ملاءمتها للمانحين والصدمات الميكانيكية / المادية الناجمة مع الحفاظ على القرنية. ومع ذلك، إذا المعلمات أعلاه على ما يرام، والتقنية التي وصفناها هنا يسمح لاستخدامها استرداد من الأنسجة ذات نوعية جيدة للزرع في المرضى الذين يعانون من أمراض سطح العين.

في حين أن المعلومات عن سلب من أنسجة الشبكية من النماذج الحيوانية متاحة على نطاق واسع ^11،12، على حد علمنا أن هذه هي المرة الأولى التي وصفت مثل هذا الأسلوب لعزل أنسجة الشبكية من الكرات العين البشرية. في الواقع، والبحث في الأدب، لم تسفر عن أي نتيجة على أوراق مناقشة هذا الموضوع. نحن نعتقد أنه إذا كان يتم تشريح الإنسان العالم خارج العين كما هو موضح، وعلماء البحوث سوف تكون قادرة على أنسجة من نوعية جيدة لاستخدامها في مشاريع أبحاثهم. بنوك العيون كثيرة في مختلف أنحاء العالم من المرجح أن تلقي المصابيح العين (ولكن أيضا القرنيات) التي لا Suitable للزرع. في حالتنا، يمكن أن ما يقرب من 40٪ من القرنيات (والمصابيح العين) التي نجمعها وعملية لا يمكن زرع (نتيجة لمجموعة واسعة من الأسباب)، ولكن ما زال من الممكن استخدامها لأغراض البحث العلمي. تقنية وصفها في هذه الورقة لا تسمح لجمع الأنسجة ذات جودة عالية. وقد تجلى هذا في الآونة الأخيرة من قبل مجموعتنا عند تحليل الحمض النووي الريبي مع T <24hrs المستخرجة من أنسجة الشبكية التي تم حصادها باستخدام تقنية الموضحة في هذه الدراسة ^10. نعتقد يمكن أن تستخدم نفس الأسلوب لعزل الأنسجة الشبكية لأغراض كثيرة مختلفة أخرى مثل (ط) للدراسات transcriptome الشبكية، (الثاني) لدراسة وتطوير واستخدام فعل الإنسان الخلايا الجذعية المحفزة في مجال الطب شخصية ^8، (ثالثا ) لوضع أطلس RNA التعبير للجينات التهاب الشبكية الصباغي في شبكية العين البشرية ^9، (رابعا) لتحسين طريقة استخراج الحمض النووي الريبي، (V) دراسات الخلايا الجذعية لتجديد أنسجة الشبكية، الخ.

هذه التقنية ثيكون سوء مفيد بالنسبة لأولئك الذين يريدون أن يمارسن الختان أو تلك التجارب ولكن لديها معلومات محدودة عن طريقة لاستخدام القرنيات البشرية أو شبكية العين.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Materials for excision of cornea and retina.
Guarded disposable scalpel	Blade size 15	Swann-Morton
Sterile bandages	5 cm X 5 cm, 8 layered, 5 pcs	Artsana
Sterile disposable medical towel	35 X 50 cm	U.Jet
Sterile scissors	Blades 24 mm / overall length. 95 mm curved, blunt	e.janach
Sterile forceps	Stainless steel -100 mm 11 X 2 ruled by 0.70 mm teeth	e.janach
Corneal claw – Disposable medical device		NIIOS (Hippocratech)
PBS	100 ml PBS [10x] in 900 ml d/w (distilled water)	Sigma-Aldrich
Na-thiosulphate	1 gm Na-thiosulphate in 1 litre of PBS [1x]	Sigma-Aldrich
I-PVP	5 gm I-PVP in 1 litre d/w	Sigma-Aldrich
Table 2. The table describes the materials used for excision of cornea and retina and the company they are received from.
Materials for storage medium (2000 ml).
MEM (1X) liquid	Invitrogen	32360-034
Sodium pyruvate	Invitrogen	11360-039	1mM (10ml/l)
L-glutamine	Invitrogen	25030-032	2mM (10ml/l)
Antibiotic/antimycotic	Sigma-Aldrich	A5955-20ML	10ml/l
Newborn calf serum	Invitrogen	26010-74	2% (20 ml/l)
Table 3. Materials for storage medium.
Preparation of storage medium
Add all the ingredients using the specific concentrations as given above in a jar and mix well. Filter them using pore size of 0.2 micron filter (Millipore, Milan, Italy) with help of a peristaltic pump. Preserve the medium in the bottles at RT.
Materials for transport medium (2000 ml).
MEM (1X) liquid	Invitrogen	32360-034
Sodium pyruvate	Invitrogen	11360-039	1mM (10 ml/l)
L-glutamine	Invitrogen	25030-032	2mM (10 ml/l)
Newborn calf serum	Invitrogen	26010-74	2% (20 ml/l)
Dextran t500	Pharmacosmos	551005004007	6% (60 gm/litre)
Table 4. Material for transport medium.
Preparation of transport medium
Add Dextran 6% in ~ 1.5 litre of MEM and leave it overnight. Add the rest of ingredients in the media and filter using 0.2 micron filter (Millipore, Milan, Italy) using a vacuum pump. Preserve the medium in the bottles at RT.