アレルギー性喘息の実験モデルマウスは、疾患の病因を研究し、新しい治療法を開発するための新たな可能性を提供します。これらのモデルはよくアレルギー性免疫応答、気道炎症、肺病態生理を支配する因子を測定するのに適しています。
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この記事について
サマリー
要約
喘息は世界中で約300万人に影響を与え、罹患率および死亡率の主要な原因である。米国の人口の1以上の8％が罹患率が増加すると、喘息を持っています。2を大幅に促進する他の疾患、アレルギー性気道疾患の動物モデルと同様に基本的な病態の理解は、潜在的な治療標的を特定するのに役立ち、可能な新しい治療法の前臨床試験を許可します。アレルギー性気道疾患のモデルは、いくつかの動物種で開発されたが、マウスモデルは、低コスト、準備ができて可用性、およびこれらの動物のよく特徴付けられた免疫システムに起因する、特に魅力的である。トランスジェニック系統の様々な3の可用性がさらに魅力を増加されましたここではこれらのモデルの4我々は、アレルギー性気道疾患の2マウスモデル、抗原として用いた卵白アルブミンの両方を説明します。腹腔内注射による初期作、一つのモデル配送は以下の噴霧による抗原チャレンジ、気管内送達による他はERS。これらの2つのモデルは、それぞれが人間の喘息の主要な機能を模倣して、相補的な利点を提供します。5
と好酸球豊富な気道の炎症、急性喘息の主要な機能は、メタコリン（AHR気道過敏性）などの刺激に対する誇張された気道の応答が含まれています。また、これらは私たちのマウスモデルにおけるアレルゲンチャレンジの顕著な効果、5,6であり、私たちはそれらを測定し、従って、実験操作の効果を評価するための手法について説明します。具体的には、気道過敏性を測定するだけでなく、気道や肺に炎症細胞の浸潤を評価するためのメソッドの両方7侵襲的および非侵襲的な8のテクニックを説明します。肺組織病理学は、臓器全体に炎症のマーカーを評価するために使用されている間に気道の炎症性細胞は、気管支肺胞洗浄によって収集されます。これらの技術は人間では不可能な方法で喘息を研究するための強力なツールを提供しています。
プロトコル
I.アレルゲンの感作とチャレンジ（ 図1を参照）
気管内チャレンジA.
- 初期作では、卵白アルブミン20μgの（; Sigma-Aldrich社、セントルイス、MO OVA）を0日目にして、再度7日目の雄または雌C57BL / 6またはBALB / cマウス（6-8週齢）腹腔内に注入する2水酸化アルミニウムのミリグラム（Sigma-Aldrich社）またはコントロールとして滅菌PBS 0.2ml中2mgの水酸化アルミニウムとを含む緩衝生理食塩水（PBS）滅菌リン酸0.2 mlで乳化した。
- 適切な抗原とチャレンジ（例えば、日14、16、18、20ページ）。チャレンジ手順は次のとおりです。
- ケタミン（90 mg / kg）及びキシラジン（10 mg / kg）の混合物の腹腔内（ip）注射でマウスを麻酔。マウスは、少なくとも10分間完全に麻酔であることを確認します。
- 45度以上の角度で操作面。この上向きの腹側を保持面と上部の頭の上に置いてマウス。
- フックトン後頭部を保持するために、フロント歯下hread。レベル気管がまっすぐであることを確認して足を保持するためにラベル·テープを使用するには、互いに足。 70パーセントエタノールと綿棒で手術部位を浸す。
- 切開部位に局所的にbupivicaine（0.25％溶液0.1〜0.2ml）を適用します。 <....
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ディスカッション
アレルギー性気道疾患の動物モデルは、臨床的喘息に関連する研究のための重要なツールを提供しています。様々な種や抗原を用いて様々なモデルの数は、開発されている。マウス、魅力的で、頻繁に使用される実験動物はまた、アレルギー性気道疾患のモデルに対して多くの利点を提供しています。9,10このようなモデルが再現することが特に困難である慢性疾患の側面とあらゆる点で喘息、11を模倣していませんが、 12,13私たちは主要な機能の多くが再現されていることをここで確認してください。我々はまた、ヒトの喘息のように、これらの機能は血清およびBAL液の両方の抗原特異的IgEの増加に関連付けられている、ことを示している。我々は、抗原としてOVAを採用したが、別のチャレンジ技術を利用して、両方の、二つのマウスモデルを提示します。気管内投与はやや複雑で時間がかかりますが、直接抗原の既知量を提供するという利点があります肺。それは、このメソッドは、DOの選択肢よりも肺に深く抗原を提供することも可能である。我々は、気管内送達のための侵襲的な方法について説明しますが、抗原はまた、口.......
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開示事項
動物実験は、プロトコル＃V010-10でアトランタVAMC IACUC委員会が定めたガイドラインと規則に従って行われた。
謝辞
この作品は、NIHグラントHL093196（RCR）とアトランタ研究·教育財団（AREF）によってサポートされていました。
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材料
| 名前 | 会社 | カタログ番号 | コメント |
|---|---|---|---|
| 材料名 | 会社 | カタログ番号 | コメント |
| オボアルブミン | Sigma-Aldrich社 セントルイス、ミズーリ | A5503 | |
| 水酸化アルミニウム | Sigma-Aldrich社 | 239186 | |
| アセチル-β-methylcholine塩化 | Sigma-Aldrich社 | A2251 | |
| ペントバルビタールナトリウム塩 | Sigma-Aldrich社 | P3761 | |
| 全身プレチスモグラフィー （WBP）システム | Buxco研究システム ウィルミントン、ノースカロライナ州 | http://www.buxco.com | |
| FlexiVent | SCIREQ株式会社 モントリオール、カナダ | http://www.scireq.com | |
| 光学顕微鏡 | ライカマイクロシステムズ株式会社 バッファローグローブ、イリノイ州 | ||
| サイトスピン4 | サーモフィッシャーサイエンティフィック アッシュビル、ノースカロライナ州 | ||
| をDiff-Quick染色 | ジーメンス ニューアーク、デラウェア州 | B4132-1A | |
| 反復的なピペット | Tridak トリントン、コネチカット州 | STP4001-0025 |
参考文献
- Braman, S. S. The global burden of asthma. Chest. 130, 4S-12S (2006).
- Akinbami, L. J., Mooman, J. E., Liu, X. Asthma Prevalence, Health Care Use, and Mortality: 2005-2009. National Health Statistics Reports. 32, National Center for Health Statistics. Hyattsville, MD. 2005-2009 (2011).
- Bates, J. H., Rincon, M., Irvin, C. G.
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再版と許可
