نحن هنا وصف طريقة سريعة وبسيطة لقياس صلابة الخلية. المبدأ العام لهذا النهج هو لقياس تشوه الغشاء استجابة لضغوط واضحة المعالم من خلال تطبيق السلبية micropipette إلى سطح الخلية. هذا الأسلوب يوفر أداة قوية لدراسة خصائص النشاط الحيوي للخلايا الركيزة المرفقة.
عدد متزايد من الدراسات تبين أن خصائص النشاط الحيوي لخلايا الفرد تلعب دورا هاما في الوظائف الخلوية متعددة، بما في ذلك انتشار الخلايا، والتمايز، والهجرة والتفاعلات الخلية الخلية. المعلمتين الرئيسية الميكانيكا الحيوية الخلوية هي قابلية تغيير الشكل الخلوية أو تصلب وقدرة الخلايا للتعاقد وتوليد القوة. نحن هنا وصف طريقة سريعة وبسيطة لتقدير صلابة الخلايا عن طريق قياس درجة تشوه الغشاء استجابة لضغوط سلبية تطبقها micropipette الزجاج إلى سطح الخلية، وهي تقنية تسمى شفط Micropipette أو Microaspiration.
يتم تنفيذ Microaspiration عن طريق سحب الزجاج الشعرية لإنشاء micropipette مع طرف صغيرة جدا (2-50 ميكرون قطر تبعا لحجم الخلية أو عينة الأنسجة)، وهذا مرتبط ثم إلى هوائي محول الضغط وتسببت في إغلاق محيط خلية تحت المجهر. عندماغيض من ماصة يمس خلية، وهي خطوة من الضغط السلبي يتم تطبيقها على ماصة من محول الضغط الهوائية توليد ضغط واضحة المعالم على غشاء الخلية. في استجابة للضغوط، ويستنشق الغشاء في تشوه الغشاء ماصة وتقدمية أو "غشاء الإسقاط" في يقاس ماصة بوصفها وظيفة من الزمن. المبدأ الأساسي لهذا النهج التجريبي هو أن درجة تشوه الغشاء استجابة لقوة ميكانيكية محددة هي وظيفة من تصلب الغشاء. وصلابة غشاء هو، وأبطأ معدل تشوه الغشاء وأقصر لا يمكن أن يؤديها في length.The طموح ثابت للدولة على خلايا معزولة تقنية، سواء في التعليق والركيزة المرفقة، العضيات كبيرة، والليبوزومات.
يتم تنفيذ تحليل الغشاء من خلال مقارنة التشوهات القصوى تتحقق في ظل ضغط معين للسكان مختلفة من الخلايا أو الظروف التجريبية. A "معامل صلابة" هو EStimated من التآمر على طول يستنشق من تشوه الغشاء بوصفها وظيفة من الضغوط التي مورست. وعلاوة على ذلك، يمكن للبيانات لمزيد من التحليل لتقدير معامل يونغ في الخلايا (E)، المعلمة الأكثر شيوعا لوصف صلابة المواد. من المهم أن نلاحظ أن ويمكن الاطلاع الأغشية البلازما من خلايا حقيقية النواة ونظام ثنائي مكون حيث underlied الغشاء طبقة ثنائية المادة الدهنية من الهيكل الخلوي غشاء شبه وأنه هو الذي يشكل الهيكل الخلوي السقالة الميكانيكية للغشاء ويسيطر على قابلية تغيير الشكل من المغلف الخلوية. هذا النهج، لذلك، يسمح تحقق خصائص النشاط الحيوي من الهيكل الخلوي الفرعي الغشاء.
Microaspiration يوفر طريقة بسيطة للغاية وقابلة للتكرار لتقدير صلابة الخلية / قابلية تغيير الشكل عن طريق تطبيق الضغط السلبي إلى غشاء الخلية وغشاء قياس قابلية تغيير الشكل استجابة لضغوط واضحة المعالم. وقد وضعت لأول مرة من قبل وميتشيسون سوان (1954) لوصف خصائص المرونة من قنفذ البح?…
The authors have nothing to disclose.
Name of reagent | Company | Catalog/Model Number | Comments |
Sutter pipette puller | Sutter Instruments | P-97 | |
Microforge | Narishige | MF-830 | |
Inverted Fluorescent Microscope | Zeiss | Axiovert 200M | The microscope should be preferably equipped with 3D/deconvolution capabilities. |
Videocamera | Zeiss | AxioCam MRm | |
Image Acquisition sotware | Zeiss | AxioVision | |
Pneumatic Pressure Transducer | BioTek | DPM-1B | DPM1B Pneumatic Transducer Tester can now be found by FLUKE. |
Pipette glass | Richland | Customized glass | Pipettes were customized with a 1.2 inner diameter and 1.6 outer diameter. |
DiI Dye | Invitrogen | D282 | Dissolves well in DMSO |