כאן אנו מתארים שיטה פשוטה ומהירה למדידת נוקשות תא. העיקרון הכללי של גישה זו הוא למדוד עיוות קרום בתגובה ללחץ שלילי מוגדר היטב ליישם באמצעות micropipette על פני התא. שיטה זו מספקת כלי רב עצמה כדי לחקור את התכונות של תאי מצע biomechanical-מצורפים.
מספר גדל והולך של מחקרים מראה כי מאפיינים ביומכניים של תאים בודדים לשחק תפקידים מרכזיים בתפקודים תאיים רבים, כולל תרבות של תאים, התמיינות, הגירה ואינטראקציות תא סלולרי. שני הפרמטרים המרכזיים של ביומכניקה הסלולרית הם deformability סלולרי או קשיחות והיכולת של התאים להתכווץ ולייצר כוח. כאן אנו מתארים שיטה מהירה ופשוטה להערכת נוקשות תא על ידי מדידת מידת עיוות קרום בתגובה ללחץ שלילי מיושם על ידי micropipette זכוכית לתא השטח, טכניקה שנקראת איפת micropipette או Microaspiration.
Microaspiration מתבצע על ידי משייכת זכוכית נימים ליצור micropipette עם טיפ קטן מאוד (2-50 קוטר מיקרומטר תלוי בגודל של תא או דגימת רקמה), אשר לאחר מכן הוא מחובר למתמר לחץ פנאומטי והביא לסיומו קרבת תא מתחת למיקרוסקופ. כאשרקצה פיפטה נוגע תא, שלב של לחץ שלילי יוחל על פיפטה ידי מתמר לחץ פנאומטי יצירת לחץ מוגדר היטב על קרום התא. בתגובה ללחץ, הממברנה להישאף לעיוות קרום פיפטה ומתקדמת או "היטל קרום" לתוך פיפטה נמדדת כפונקציה של זמן. העיקרון הבסיסי של גישה ניסויית זה הוא שמידת עיוות קרום בתגובה לכוח מכאני מוגדר היא פונקציה של קשיחות הממברנה. הקרום הוא נוקשה, השיעור האיטי יותר של עיוות קרום וטכניקת length.The שאיפת המצב יציב ניתן לבצע קצר בתאים מבודדים, היא בהשעיה ומצע-מצורפי האברונים, גדולים, וליפוזומים.
ניתוח מתבצע על ידי השוואת דפורמציות קרום מקסימליים שהושגו תחת לחץ נתון לאוכלוסיות תאים שונים או בתנאי ניסוי. "מקדם קשיחות" הוא estimated ידי התוויית האורך נשאף, של עיוות הממברנה כפונקציה של לחץ המופעל. יתר על כן, את הנתונים ניתן לנתח נוסף להעריך מודולוס של יאנג של התאים (ה '), הפרמטר הנפוץ ביותר לאפיון קשיחות של חומרים. חשוב לציין כי קרום פלזמה של תאים האיקריוטים יכול להיחשב כמערכת דו מרכיב בי bilayer שומני הממברנה underlied ידי cytoskeleton-קרום משנה ושזה cytoskeleton המהווה הפיגום המכאני של הקרום ושולט deformability של מעטפת התאים. גישה זו, אם כן, מאפשרת לחקור את התכונות של biomechanical cytoskeleton משנה הממברנה.
Microaspiration מספק שיטה פשוטה ולשעתק מאוד להעריך נוקשות תא / deformability על ידי הפעלת לחץ שלילי על קרום תא ומדידת deformability קרום בתגובה ללחץ מוגדר היטב. היא פותחה לראשונה על ידי Mitchison וסוואן (1954) כדי לאפיין את תכונות האלסטיות של ביצי קיפודי ים כדי לספק תובנה לתוך מנגנוני חלוקת תא <su…
The authors have nothing to disclose.
Name of reagent | Company | Catalog/Model Number | Comments |
Sutter pipette puller | Sutter Instruments | P-97 | |
Microforge | Narishige | MF-830 | |
Inverted Fluorescent Microscope | Zeiss | Axiovert 200M | The microscope should be preferably equipped with 3D/deconvolution capabilities. |
Videocamera | Zeiss | AxioCam MRm | |
Image Acquisition sotware | Zeiss | AxioVision | |
Pneumatic Pressure Transducer | BioTek | DPM-1B | DPM1B Pneumatic Transducer Tester can now be found by FLUKE. |
Pipette glass | Richland | Customized glass | Pipettes were customized with a 1.2 inner diameter and 1.6 outer diameter. |
DiI Dye | Invitrogen | D282 | Dissolves well in DMSO |