Summary
생체내 bioluminescence과 자기 공명 영상에서 (I), 그리고 (ii) 해부 histological 분석 :이 문서를 사용하여 쥐 두뇌에있는 세포 이식의 multimodal 이미징을위한 이벤트를 최적화된 순서를 설명합니다. 하나의 동물에서 이러한 이미징 modalities를 결합하면 높은 해상도, 민감도와 특이성과 세포 이식 평가를하실 수 있습니다.
Abstract
지난 10 년 동안 줄기 세포 이식은 잠복기 및 임상 연구에서 두 질환의 다양한 주 또는 보조 치료 양상 등의 증가하고 관심을 받고있다. 그러나, 기능적 결과 및 / 또는 조직 재생 다음과 줄기 세포 이식에 관한 결과가 매우 다양 날짜입니다. 일반적으로 임상 혜택은 기본 메커니즘 (들) 1의 깊은 이해없이도 관찰된다. 따라서 여러 노력은 정확하게 생존, 운명 및 이식할 줄기 세포 및 / 또는 그들의 마이크로 환경의 생리를 평가하는 데 궁극적인 목표로 이식 줄기 세포를 모니터링하는 다른 분자 이미징 modalities의 발전에 주도했습니다. 분자 이미징에 의해 결정 하나 이상의 매개 변수에서 관찰 변경 관찰된 임상 효과에 관한 수 있습니다. 이러한 맥락에서, 우리의 연구는 bioluminescence 이미징의 통합 이용 (BLI), 자기 공명 영상 (MRI) 및 histological analysi에 초점S는 이식 줄기 세포를 평가합니다.
BLI는 일반적으로 비 invasively 세포 루시페라제-리포터 유전자를 표현하는 생화 학적 반응을 바탕으로 이식 2-7, 다음 셀 추적을 수행하고 시간에 세포 생존을 모니터링하는 데 사용되는 것은 그것의 기판에 빛을 다음과 같은 상호 작용을 방출 수 있습니다 (예 : D- luciferin) 8, 9. 반면 MRI는 민감도가 높은 MRI 대비 에이전트와 함께 세포 라벨 이후에 생성되는 반면에 달려 있지만, 10 임상 적용하고 정확하게 매우 높은 해상도를 11-15로 세포 이식을 찾습니다하는 데 사용할 수있는 비침습 기술이다 . 마지막으로, 사후 histological 분석은 높은 해상도와 감도있는 비침습 방법으로 얻은 연구 결과를 확인하기 위해 선택한 방법입니다. 또한 엔드 포인트 histological 분석은 우리가 이식할 세포 및 / 또는 주변 조직, 바의 상세한 phenotypic 분석을 수행할 수 있습니다형광 기자 단백질 및 / 또는 특정 항체와 직접 셀 라벨링의 사용에 SED.
요약하면, 우리는 여기에 시각적으로 서로 다른 줄기 세포 및 / 또는 환경 관련 생쥐의 CNS에서 이식 줄기 세포에 따라 특성을 해명하는 BLI, MRI 및 조직학의 complementarities를 보여줍니다. 예를 들어, 뼈가 골수는-파생된 유전자 향상된 녹색 형광 단백질 (eGFP)와 반딧불 루시페라제 (fLuc) 및 청색 형광 마이크론 크기의 철 산화물 입자 (MPIOs)로 레이블을 표현할 수 있도록 설계 stromal 세포를,에 이식할 예정 면역 - 관할 마우스 및 결과의 CNS는 BLI, MRI 및 조직학 (그림 1)에 의해 모니터링됩니다.
Protocol
1. 셀 준비
- 실험은 유전자 루시페라제 및 eGFP 기자 단백질을 표현하는 설계 전직 생체내 교양 줄기 세포 인구를 사용하여 시작되어야합니다. 여기는 이전 Bergwerf 외. 2, 5에 기술된 / 루시페라제 eGFP - 표현 murine 골수 파생 stromal 세포 (BMSC-Luc/eGFP)을 사용합니다.
- 1 μg / ML의 Puromycine로 보충 15 ML 전체 확장 매체 (CEM)에 T75 문화 플라스크 당 8 × 10 5 세포의 밀도의 전지 라벨, 플레이트 BMSC-Luc/eGFP 세포 이틀전 일.
- 세포가 37에서 48 시간 동안 성장할 수 있도록 허용 ° C에서 5 % CO 2.
- 5 추가 X 10 6 빙하 블루 마이크론 크기의 철 산화물 입자 (GB MPIO) 성장 세포 배양에 당 ML 배지 (총 : 75 × 10 T75 문화 플라스크에서 15 ML 문화 매체 당 6 입자).
- endocytosis를 통해 입자 이해 가능하도록 16 시간 동안 알을 품다.
- 남은 입자를 멀리 씻으그리고 세포에 GB MPIO의 세포 confluency 및 균질 분포를 얻기 위해 추가로 24 시간 동안 성장할 수 있습니다.
- eGFP + 세포의 총 금액 eGFP + 및 GB MPIO + 세포의 비율을 계산하여 형광 현미경을 사용하여 시각적으로 입자 이해를 확인합니다.
- 워시 기가바이트 MPIO-라벨 BMSC-Luc/eGFP 전지 두번 트립신-EDTA (에틸렌 다이아 민 테트라 초산) 치료 (5 분 T75 문화 플라스크 당 5 ML)에 따라 10 ML PBS 및 수확 세포와.
- 133 X 10 6 세포 / PBS에서 ML의 최종 농도에서 수확한 세포 resuspend 씻으십시오.
- 이식까지 얼음 세포를 유지.
2. 마우스의 CNS의 세포 주입
- 300ml의 intraperitoneal 주사 (80 밀리그램 / ㎏) + xylazine (16 밀리그램 / ㎏) 혼합하여 쥐를 마취시키다.
- 쥐가 잠들 수 있도록 5 분 동안 기다리십시오.
- 멸균 조작을 할 수 있도록 마우스 머리를 면도.
- stereotactic 프레임에 마우스를 놓습니다.
- 를 Desinfect피부와 생쥐의 눈이 탈수를 방지하기 젖었어.
- 두개골을 노출하는 중간선 두피 절개를 만들고, 주어진 좌표에 치과 드릴 버를 사용하여 두개골에 구멍을 뚫을 : 후부 2mm와 Bregma 옆으로 2mm합니다.
- 간단히 와동 세포 현탁액을하고 주사기의 세포 현탁액을 기음.
- 경질 아래에 2.5 mm의 깊이에서 주사기 바늘을 넣고 1 분 압력 평형을 허용합니다.
- 자동화된 마이크로 주입 펌프를 사용하여 경질하에 2mm의 깊이에서와 0.70 μl / 분 속도로 3 μl 세포 현탁액 (4 × 10 5 세포)를 주사.
- 주입된 세포 현탁액의 역류를 방지하기 위해 추가로 5 분 기다리십시오.
- 천천히 바늘을 철회하고 피부를 suturing 전에 피부 테두리를 소독.
- 탈수를 방지하기 위해 subcutaneously 300 μl 0.9 % NaCl 용액을 주사하고, 마취로부터 회복하기 위해 히팅 램프 아래에 마우스를 놓습니다. P를 관리제도적 기준에 따라 OST-요원은 진통.
3. 생체내 Bioluminescence에서
- isoflurane과 산소 3%의 혼합물에 의해 생쥐를 마취시키다.
- 광자 영상기에서 쥐를 넣은 isoflurane과 산소 1.5 %로 마취 수준을 줄일 수 있습니다.
- 정맥 kg의 체중 당 150 MG D-luciferin을 주사.
- 사진 비전 소프트웨어를 사용하여 5 분 영상을 취득.
- M3vision 소프트웨어를 사용하여 이미지 처리를 수행합니다. 관심 고정 영역을 사용하여 관찰된 신호를 계량.
4. 생체내 자기 공명 영상에서
- N 2 O (3시 7분) : O 2 혼합물의 isoflurane 3퍼센트로 쥐를 마취시키다.
- 수평 9.4T MR 시스템의 restrainer에 생쥐를 삽입하고 마취 수준 O 2 혼합물의 isoflurane 1 % 감소 : N 2 O (3시 7분을).
- dehydra을 방지하기 위해 생쥐의 눈을 물에 적셔기는 마우스 배꼽 아래에 센서를 배치하여 체온을 모니터하고 호흡 속도를 모니터링하는 직장 프로브를 연결합니다.
- 110 ± 분당 10 심호흡으로 호흡 율을 유지하고 ± 0.5가 ° C. 37 좁은 범위 내에서 체온이 일정하게 유지
- 마우스 머리와 자석의 중간 위치에 마우스를 위에 표면의 RF 코일을 배치합니다.
- 70 μm의 2 인 - 비행기 해상도로 줄기 세포 이주를 공부하기 위해 구체적인 해부 학적 정보 및 T2 *-가중 기울기 에코 (GE) 이미지를 취득하는 10 코로나 T2-가중 스핀 에코 (SE) 이미지 세트를 취득. 반복 시간 (TR)를 : 다음과 같이 순서대로 매개 변수를 설정 500 MS, 에코 시간 (TE) : 8 MS (GE 순서) 및 반복 시간 (TR) : 4,200 MS, 에코 시간 (TE) : 12.16 MS (SE 순서); 18x18 mm 2, 매트릭스 : 256x256, 1 밀리미터 슬라이스 두께 1mm 슬라이스 분리 (Paravision 5.1 소프트웨어) 뷰 (FOV)의 필드.
- 데이터 처리를 수행Amira 4.0 소프트웨어를 사용합니다.
5. 해부 조직학
- isofluorane (4 %), 산소 (0.5 L / 분)과 질소 (1 L / 분) 2 분 동안 혼합물을 흡입하여 매우 깊이 쥐를 마취시키다. 경추 탈구로 쥐를 희생.
- 두개골에서 마우스 두뇌를 제거하고 2 시간 PBS에서 4 % paraformaldehyde에서 뇌 조직을 흥분시키는.
- PBS의 20 % 자당의 하룻밤 PBS에서 10 %의 자당에 PBS, 2 시간의 5 % 자당에 2 시간 : 자당의 다양한 그라디언트 년 이후 두뇌를 배치하여 뇌 조직을 탈수.
- 액체 질소를 사용하여 뇌 조직을 고정시키고 sectioning 때까지 -80 ° C에서 조직을 저장합니다.
- 그라 이오 스탯을 사용하여 10 μm의 두께는 섹션의 섹션 뇌 조직.
- 화면에 GB MPIO 입자와 형광 현미경을 사용하여 eGFP 표현 세포에서 녹색 형광의 청색 형광을 위해 cryosections를 흠없는.
- 화면에 대한 cryosections를 흠없는염증성 세포에서 적색 / 녹색 배경 형광.
- 세포 이식은 상호 작용 내생 세포 인구를 (예 : microglia, astrocytes, T 세포, ...)를 식별하는 데 더욱 immunohistochemical 및 immunofluorescent stainings를 수행합니다.
6. 대표 결과
우리는 여기서 시각 생쥐의 CNS에서 루시페라제 / eGFP-표현 (줄기) 세포 집단의 성공 multimodal 이미징을위한 이벤트를 최적화된 순서를 표현했습니다. 처음에는 쉽게 확인할 수 있습니다 BMSC-Luc/eGFP 세포의 효율 라벨에 설명된 기가바이트 MPIO의 라벨링 절차 결과는 형광 현미경 (그림 2A)를 사용. 다음으로, 기가바이트 엠피오의 접목에 따라 생쥐의 CNS에서 BMSC-Luc/eGFP이라는, 세포 이식의 생존은 루시페라제 활동 (그림 2B)을 기반으로 생체내 BLI에 의해 모니터할 수 있습니다. 또한, 이식할 세포의 정확한 지방화는 생체내에 의해 모니터할 수 있습니다 (그림 2C)의 철분 함유량을 기준으로 MRI. 마지막으로, histological 분석 BLI와 MRI로 확인한 결과의 검증을 허용합니다. 안정적인 생존은 시간에 안정 eGFP 표현 (그림 2D)에 의해 확인되었다. 본 내용의 colocalization eGFP은 - 표현 청색 형광 엠피오와 세포 것은 현지화 및 이식할 세포의 생존의 정확한 결정을 허용합니다. 또한, 줄기 세포의 이중 형광 라벨은 염증 세포가 5로 만든 배경 형광을 기반으로 거짓 긍정적인 결과를 관찰할 수있는 가능성을 줄여줍니다.
그림 1. 처리 순서의 개요
- 휴대폰 라벨 : BMSC-Luc/eGFP은 ML 문화 매체 당 5 × 10 6기가바이트 MPIO 입자로 분류된다. 16 부화의 시간과 24 시간의 다음과 같은 휴식 기간이 지난 후에 세포를 위해 수확하고했습니다만 주입.
- 세포 이식 : bregma -2 음, 경질 미만의 중간선과 2mm에서 2 밀리미터 오른쪽 : 기가바이트 엠피오는 BMSC-Luc/eGFP는 다음과 같은 좌표에서 마우스의 뇌에 이식할 있습니다 분류.
- 생체내 BLI 년 : 체중을 D-luciferin/kg 150 밀리그램의 아래에 정맥 주사 관리, 생성된 빛이 광자 영상기를 사용 오분 동안 획득한 것입니다.
- 생체내 MRI 년 : 70 μm의 2 인 - 비행기 해상도를 갖춘 10 개 코로나 T2-가중 스핀 에코 (SE) 영상과 T2 *-가중 기울기 에코 (GE)의 이미지 집합 인수되었다. 반복 시간 (TR)를 : 다음과 같이 시퀀스 매개 변수가 있었 500 MS, 에코 시간 (TE) : 8 MS (GE 순서) 및 반복 시간 (TR) : 4,200 MS, 에코 시간 (TE) : 12.16 MS (SE 순서); 18x18 mm 2, 매트릭스 : 256x256, 1 밀리미터 슬라이스 두께 1mm 슬라이스 분리 뷰 (FOV)의 필드.
- 사후 조직학 : 10μm 두께 cryosection는 표현 eGFP과 청색 fluorescently 분류 BMSC U 동안 상영되었다형광 현미경을 노래.
줄기 세포 이식의 그림 2. Multimodal 이미징
- 빙하 파란 (GB) 엠피오의 직접 immunofluorescence 현미경은 BMSC-Luc/eGFP을 분류.
- 4x10 5 주입된 생쥐의 생체내 BLI에서는 기가바이트 엠피오는 주 1 주입 후 주 2 시에 BMSC-Luc/eGFP 세포를 분류. 주 1, 주 2 사후 이식에서 발견 BLI 신호의 통계적 분석. 데이터가 5 분 기간 동안의 cm2 당 steradian 당 초 당 광자의 평균 개수 (산도 / S / SR / cm 2)로 표현됩니다 + / - 맑은 BLI 신호를 보여주는 생쥐의 관심을 고정 영역에서 계산된 표준 오차 사출 사이트.
- 그리고 레이블이 지정되지 않은 BMSC-L : 기가바이트 MPIO의 코로나 2 차원 MRI는 BMSC-Luc/eGFP를 ((I) T2-가중 스핀 에코 이미지 그리고 (ii) T2 *-가중 기울기 에코 영상 왼쪽 패널)로 분류UC / eGFP (오른쪽 패널 : (3) T2-가중 스핀 에코 영상과 (VI) T2 *-가중 기울기 에코 이미지) 마우스 뇌에 이식.
- 기가바이트 MPIO의 Histological 분석은 주 2 사후 주입에 BMSC-Luc/eGFP 이식이라는. eGFP - 표현 및 GB MPIO 분류 BMSC-Luc/eGFP 이식술의 지방화를위한은 (i) 직접 immunofluorescence 분석. 의 (2) 높은 배율 세부 사항은 (i). 기가바이트 MPIO의 주변에서 astrocytic 반흔 조직의 발전을 나타내는 GFAP 항원에 대한 (3) Immunofluorescent 염색법은 BMSC-Luc/eGFP 라벨. Iba-1 항원에 대한 (VI) Immunofluorescent 염색법, 침략을 나타내는 및 GB MPIO의 주변은 microglia 의해 BMSC-Luc/eGFP이라는.
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Discussion
이 보고서에서는 면역 관할 생쥐의 CNS의 세포 이식의 세부 특성화 세 보완 이미징 modalities의 조합 (BLI, MRI 및 조직학)에 최적화된 프로토콜을 설명합니다. 리포터 유전자 반딧불 루시페라제 및 eGFP, 및 GB 엠피오와 직접적인 셀 라벨과 유전자 조작을 바탕으로 세포의 리포터 유전자 라벨,의 조합이 생체내에서 줄기 세포 이식의 정확한 평가로 안내합니다.
BMSC의 입자 라벨은 음이온 표면 (카르 복실 대체)와 함께 기가바이트 MPIO 입자 크기 (1.63μm)이 아닌 phagocytic 세포 16-18하여 이러한 입자 endocytotic 이해를 촉진하기 위해 제안합니다. 그러나, 높은 상표 효율을 얻을 배양 시간이 셀 타입에 의존 것을 언급해야합니다. 예를 들어, phagocytic 세포 (macrophages 및 돌기 세포 등)보다 신속하게 이러한 입자를 internalize 수 있습니다 (0.5의 배양 시간 - 1 시간) 효율적인 라벨링을위한 최소 16 시간의 배양 시간이 필요하지 않은 phaghocytic 세포 유형 (BMSC 또는 신경 줄기 세포와 같은)에 비해. 이것은 세포 라벨링 실험과 라벨의 효율성을 수행하는 동안 항상 형광 현미경 및 / 또는 흐름 cytometric 분석을 이용하여 사전에 결정되어야 고려되어야합니다. 기가바이트 MPIOs과 세포 집단으로 레이블링하는 세포 생존, 세포 증식이나 세포 표현형 5 영향을 미치지 않습니다로서,이 입자의 철 산화물과 형광단의 조합 따라서 모두 MRI 및 광학 영상으로 그들을 시각화하기위한 절호의 기회를 만듭니다. 또한, 높은 철분 함량 및 대형 입자 크기로 인해, MPIO 입자가 MRI에 단세포 12,19,20 및 단일 입자 이미징 21 사용될 수 있습니다. 그것이 하나의 세포를 관찰할 수로 세포 마이 그 레이션을 공부하고 오실 때 이것은 매우 흥미롭습니다. 그러나, 사용 기가바이트 MPIO의 높은 철분 함량MRI에 의한 그라 프트 사이트의 정확한 크기를 윤곽을 그리다을 목표로했을 때 입자는 또한 특정 단점이 있습니다. MPIOs의 매우 높은 철 내용 보형물 사이트 볼륨과 이식 세포와 주변 조직 간의 덜 정확 차별의 과대 평가 결과, 세포 이식의 주변에서도 보형물 사이트에서 자기 inhomogeneities를 만들지만 아니라. 따라서 입자의 종류는 셀 라벨에 필요한, 연구 설계에 따라 달라집니다. 줄기 세포 이주, 매우 높은 감도 때문에 MPIOs이 필요한 것입 포함하는 높은 철분을 결정하는 것을 목표로합니다. 한편, 낮은 철분과 줄기 세포 이식술, 작은 SPIOs의 정확한 지방화를 목표로 할 때하는 것은 바람직 대안 22 살이되어 있습니다. 또한, 철 입자는 이식 세포 사이의 차별에 관한와 접목에 따라 세포를 받긴했지만 또 다른 문제를 소개하는 부정적인 대조를 생성합니다. 따라서 연구가 많은 것셀 라벨에 대한 긍정적인 대비 요원의 사용 방향에. 입자 유형 옆의 MRI 인수에 사용되는 시퀀스의 유형은 또한 연구의 목적에 따라 달라집니다. 그것을 높은 정밀도로 해부 학적 정보를 제공로서 MRI는 보형물의 위치와 보형물 볼륨, T2 순서에 대한 정확한 정보를 얻기 위해 보형물을 윤곽을 그리다하는 데 사용되는 경우 (스핀 에코) 유리한 것입니다. 한편, T2 * 시퀀스 (기울기 에코)이 시퀀스 계정으로 자기장에 영향을 미치는 화합물에 대한 높은 감도를 렌더링 자장의 모든 inhomogenities 소요로 이식할 세포의 가능한 마이 그 레이션을 공부하는 데 사용되는 시퀀스입니다. 이것은 이식 지역 밖으로 이전했을 수도 셀 소량의 검출에있어서 이러한 시퀀스는 절대적으로 필요하다. 이 순서를 사용하여 우리는 BMSC-Luc/eGFP 세포가 생쥐의 CNS에서 striatal 주입 후 마이 그 레이션하지 않는 것이 결론 수있었습니다.
동안MRI는 세포 주입 지방화에 관한 데이터를 제공, 추가 BLI 분석은 세포 임플란트 생존 2,4,11에 관한 데이터를 제공합니다. 루시페라제 효소와 기판 luciferin 간의 효소 반응은 O 2와 ATP의 존재를 필요로로서 세포 생존을 공부하기 위해 신뢰할 수있는 기술입니다. 괴사성 세포 루시페라제 효소없이 O 2를 표현하지 않으며 ATP가 존재합니다. 또한, 루시페라제 효소를 표현하는 유일한 세포 기술의 고감도 비슷한 빛의의 생산 결과, 반응을 catalyze 수 있습니다. 생산되는 빛의 양이 루시페라제 - 표현 세포의 금액과 비례하기 때문에 BLI는 정량 방식으로 수행할 수 있습니다. 그러나, 중요한 고려 사항 세포 금액 이외의 여러 요인 루시페라제의 표현 수준이나 감지된 빛의 양에 영향을 미칠 수있는 정량적 BLI을 수행하는 동안 고려해야합니다. 예를 들어, anesthesi수준은 루시페라제 효소 및 / 또는 luciferin 가능한 23 영향을 미칠 수 다른 요인과 화합물은 신호 출력의 차이가 발생, 기판 가용성 및 / 또는 이해 24-26이나 27-30 발기인 활동에 영향을 미칠 수있다. 기술은 빛의 낮은 조직 침투로 제한되어 있기 때문입니다 더욱이 BLI의 사용은 작은 동물로 제한됩니다. 따라서, 모든 매개 변수는 가능한 신호 변형에 영향을 미치는, 이식 후 세포의 생존을 따르도록 양적 BLI을 수행하는 것을 목표로 할 때 가능한 한 표준으로 보관해야합니다. 예를 들어, 세포 이식, 마취 수준 및 관리 경로 / BLI 취득하기 전에 실시 기판의 크기, 동물의 피부의 적절한 면도기 등 주입 깊이
분자 이미징의 설명 장점과 단점 위의 고려, 얻은 결과는 항상 histological 분석하여 검증해야합니다. 이로써 vario우리 세포 phenotypes와 다양한 세포 유형 간의 상호 작용은 세포의 높은 감도 해부와 시각이 될 수 있습니다. 이 기술 선택의 검증 도구 및 / 또는 그라 프트 사이트를 침해 이것이 거짓 긍정적인 결과로 이어질 수도로 간주되어야 주변의 염증 세포에 의해 만들어진 배경 형광의 존재는 사실에도 불구하고. 그러나 이러한 기가바이트 엠피오 등 eGFP 같은 형광 리포터 유전자, 그리고 형광 프로브, 가진 이중 라벨의 사용은 오인의 가능성 (즉, 이식할 세포가 관련성이없는 빛 가운데 배경 형광을 표시하지 않고, 모두 특정 fluorescences이 표시됩니다 감소 채널).
BLI는 매우 높은 감도 있지만 낮은 해상도를 가진 정량적인 방법으로 시간에 세포의 생존을 모니터링하는 독특한 기법 반면, 요약, MRI는 BLI으로 얻은 낮은 해상도를 극복하기위한 선택의 기술입니다. 생체내 techni 이들의 조합ques은 생존과 비침습적인 방법으로 생체내에 이식할 세포의 지방화에 관한 충분한 정보를 렌더링. 마지막으로, 주변 조직 및 / 또는 내생 염증성 세포와 세포 이식 상호 작용을 쉽게 조직학를 사용하여 해부 모니터링할 수 있습니다. 순간, 후자가 여전히 histological 분석에 의해 수행되어야,하지만, 미래에 대한 주요 도전 얻은으로 유사한 해상도와 감도와 매개 변수의 실시간 평가에 사용하도록 생체내 분자 이미징 modalities에 기존 개선하는 것입니다 histological 분석.
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Disclosures
저자는 이익 갈등을 선언 없습니다.
Acknowledgments
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| IMDM | Lonza Inc. | BE12-722F | Component of the cell growth medium CEM |
| Fetal bovine serum | GIBCO, by Life Technologies | 10270-106 | Component of the cell growth medium CEM |
| Horse serum | GIBCO, by Life Technologies | 1605-122 | Component of the cell growth medium CEM |
| Penicillin-streptomycin | GIBCO, by Life Technologies | 15140 | Component of the cell growth medium CEM |
| Fungizone | GIBCO, by Life Technologies | 15290-018 | Component of the cell growth medium CEM |
| PBS | GIBCO, by Life Technologies | 14190 | |
| Puromycine | Invitrogen | ant-pr-1 | |
| trypsin | GIBCO, by Life Technologies | 25300 | |
| GB MPIO | Bangs Laboratories | ME04F/7833 | |
| D-luciferin | Promega Corp. | E1601 | |
| Ketamine (Ketalar) | Pfizer Pharma GmbH | ||
| Xylazine (Rompun) | Bayer AG | ||
| Isoflurane | Isoflo | 05260-05 | |
| 0.9% NaCl solution | Baxter Internationl Inc. | ||
| paraformaldehyde | Merck & Co., Inc. | 1.04005.1000 | |
| sucrose | Applichem | A1125 | |
| Micro-injection pump | KD scientific | KDS100 | |
| Photon imager | Biospace Lab | ||
| 9.4T MR scanner | Bruker Corporation | Biospec 94/20 USR | |
| BX51 microscope | Olympus Corporation | BX51 | |
| Mycrom HM cryostat | Prosan | HM525 | |
| syringe | Hamilton Co | 7635-01 | |
| 30 gauge needle | Hamilton Co | 7762-03 | |
| Photo Vision software | Biospace Lab | ||
| M3vision software | Biospace Lab | ||
| Paravision 5.1 software | Bruker Corporation | ||
| Amira 4.0 software | Visage Imaging |
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