El uso de modelos animales de sepsis para evaluar nuevas terapias a base de plantas

Summary

La sepsis se refiere a un síndrome de respuesta inflamatoria sistémica resultante de una infección microbiana, y puede ser simulado por una técnica quirúrgica denomina ligadura cecal y punción (CLP). Aquí se describe un método para utilizar CLP inducida modelo animal para cribar hierbas medicinales para agentes terapéuticos.

Abstract

La sepsis se refiere a un síndrome de respuesta inflamatoria sistémica que resulta de una infección microbiana. Ha sido rutinariamente simulada en animales mediante varias técnicas, incluyendo la infusión de la toxina bacteriana exógena (endotoxemia) o bacterias (bacteriemia), así como la perforación quirúrgica del ciego por ligadura cecal y punción (CLP) ^1-3. CLP permite derrame bacterias y la contaminación fecal de la cavidad peritoneal, imitando la enfermedad humana clínico de apendicitis perforada o la diverticulitis. La severidad de la sepsis, como se refleja en las tasas de mortalidad eventuales, se puede controlar quirúrgicamente variando el tamaño de la aguja utilizada para la punción cecal ^2. En los animales, induce CLP hemodinámico, bifásica respuestas cardiovasculares, metabólicas e inmunológicas como se observó durante el curso clínico de la sepsis humana ^3. Así, el modelo CLP es considerado como uno de los modelos más clínicamente relevantes para la sepsis experimental ^1-3. </ P>

Varios modelos animales han sido utilizados para aclarar los mecanismos que subyacen intrincados la patogénesis de la sepsis experimental. La consecuencia letal de la sepsis es atribuible en parte a una acumulación excesiva de citoquinas tempranas (como el TNF, IL-1 e IFN-γ) ^4-6 y mediadores proinflamatorios finales (por ejemplo, HMGB1) ^7. En comparación con las primeras citocinas proinflamatorias, a finales de los mediadores de acción tienen una ventana terapéutica amplia para aplicaciones clínicas. Por ejemplo, la administración retardada de HMGB1 anticuerpos neutralizantes comenzando 24 horas después de CLP, siendo rescatado ratones de letalidad ^8,9, estableciendo HMGB1 como un mediador tardío de la sepsis letal. El descubrimiento de HMGB1 como mediador a fines de acción ha puesto en marcha un nuevo campo de investigación para el desarrollo de terapias que utilizan la sepsis Medicina Herbal Tradicional China. En este trabajo se describe un procedimiento de la CLP-inducida por la sepsis, y su uso en el cribado de la medicina herbaria para HMGB1 de metas de terapias.

Protocol

1. Establecimiento de modelo animal de sepsis Los ratones se anestesiaron con cetamina (75 mg / kg, por vía intramuscular, im) y xilazina (10 mg / kg, im), y se colocó en posición supina. Fijar los pies del ratón con cinta adhesiva para asegurar una posición estable. Limpie el abdomen con 3 matorrales alternas de betadine o desinfectante de la piel al otro y el alcohol. Luego, haga una incisión de 15 mm para exponer el ciego. Ligar el ciego con una sutura de seda 4-0 aproxi…

Discussion

En el laboratorio, varios modelos animales de sepsis se han empleado para entender la patogénesis de la sepsis con el fin de desarrollar terapias potenciales novedosas. Su relevancia clínica sigue siendo un tema de debate antes de la traducción exitosa de los estudios en animales a las aplicaciones clínicas de la sepsis. Aunque los anticuerpos neutralizantes contra citoquinas tempranas (por ejemplo, TNF) tenían un efecto protector en modelos animales de bacteriemia / endotoxemia ^17,18, en realidad empeor…

Materials

Name of the reagent	Company	Catalogue number
Betadine	Purdue Products L.P.	25655-41-8
imipenem	Merck & Co., Inc.	9882821
Ketamine HCl	Hospira Inc.	RL-0065
Xylazine	Lloyd Laboratories	4821
Autoclip	Becton Dickinson	427631
4-0 silk suture	Roboz	SUT-15-2
Surflo I.V. Catheter	Terumo	SR*OX2419CA
RayBio mouse cytokine antibody array	RayBiotech, Inc.	AAM-CYT-3
Thioglycollate	Becton Dickinson	211716