Uso de Modelo Animal de Sepse para avaliar novas terapias à base de plantas

Summary

Sepse se refere a uma síndrome de resposta inflamatória sistêmica resultante de uma infecção microbiana, e pode ser simulado por uma técnica cirúrgica chamada ligadura e perfuração cecal (CLP). Aqui nós descrevemos um método para usar CLP-induzida modelo animal para a tela ervas medicinais para agentes terapêuticos.

Abstract

Sépsis refere-se a uma síndrome de resposta inflamatória sistémica resultante de uma infecção microbiana. Tem sido rotineiramente simulado em animais por várias técnicas, incluindo a infusão de toxina bacteriana exógena (endotoxemia) ou bactérias (bacteremia), bem como a perfuração cirúrgica do ceco por ligação e perfuração cecal (CLP) ^1-3. CLP permite que as bactérias derramamento e contaminação fecal da cavidade peritoneal, imitando a doença humana clínico de apendicite perfurada ou diverticulite. A gravidade da sépsis, tal como reflectido pelas taxas de mortalidade eventuais, podem ser controlados cirurgicamente variando o tamanho da agulha usada para punção cecal ^2. Em animais, a CLP induz hemodinâmica, similar bifásico respostas cardiovasculares, metabólicas e imunológicas, como observado durante a evolução clínica da sepse humana ^3. Assim, o modelo CLP é considerado como um dos modelos mais clinicamente relevantes para sépsis experimental ^1-3. </ P>

Vários modelos animais têm sido utilizados para elucidar os mecanismos subjacentes à intrincados patogénese da sépsis experimental. A consequência letal de sépsis é atribuível parcialmente a uma acumulação excessiva de citocinas iniciais (tais como TNF, IL-1 eo IFN-γ) ^4-6 e mediadores pró-inflamatórios tardia (por exemplo, HMGB1) ^7. Comparado com os primeiros citocinas pró-inflamatórias, de ação tardia mediadores têm uma ampla janela terapêutica para aplicações clínicas. Por exemplo, a administração retardada de HMGB1 anticorpos neutralizadores começando 24 horas após CLP, ainda resgatado a partir de ratinhos letalidade ^8,9, estabelecendo HMGB1 como um mediador tardia da sépsis letal. A descoberta de HMGB1 como um mediador de ação tardia deu início a um novo campo de investigação para o desenvolvimento de terapias que utilizam sepse medicina tradicional chinesa. Neste artigo, descrevemos um procedimento de CLP-induzida a sepse, e seu uso na seleção de ervas medicinais para a HMGB1 de metas terapêuticas.

Protocol

1. Estabelecimento de Modelo Animal de Sepse Os ratos são anestesiados com cetamina (75 mg / kg, por via intramuscular, im) e xilazina (10 mg / kg, im), e colocado em decúbito dorsal. Fixe os pés do mouse com fita, para garantir uma posição estável. Limpe o abdômen com 3 esfrega alternadas de betadine ou outro desinfetante da pele e do álcool. Em seguida, fazer uma incisão na linha média 15 milímetros para expor o ceco. Ligar o ceco com uma sutura de seda 4-0 a cerca d…

Discussion

No laboratório, vários modelos animais de sépsis têm sido empregues para compreender a patogénese da sépsis, a fim de desenvolver novas terapias potenciais. Sua relevância clínica continua a ser um objecto de debate antes da tradução bem sucedida de estudos em animais para aplicações clínicas de sepse. Embora os anticorpos neutralizantes contra o citocinas precoces (por exemplo, o TNF) foram protector em modelos animais de endotoxemia / bacteremia ^17,18, eles piorar a sobrevivência em modelo ani…

Materials

Name of the reagent	Company	Catalogue number
Betadine	Purdue Products L.P.	25655-41-8
imipenem	Merck & Co., Inc.	9882821
Ketamine HCl	Hospira Inc.	RL-0065
Xylazine	Lloyd Laboratories	4821
Autoclip	Becton Dickinson	427631
4-0 silk suture	Roboz	SUT-15-2
Surflo I.V. Catheter	Terumo	SR*OX2419CA
RayBio mouse cytokine antibody array	RayBiotech, Inc.	AAM-CYT-3
Thioglycollate	Becton Dickinson	211716