Summary
Denna kirurgiska tekniken illustrerar injektion av genterapivektorer och stamceller i det subretinala utrymmet i musens ögat.
Abstract
Förlusten av synen drabbar cirka 3,4 miljoner personer i USA och förväntas öka under de kommande åren. 1 Nyligen har genterapi och stamceller transplantationer cell blir viktiga terapeutiska verktyg för att behandla blindhet till följd av retinala degenerativa sjukdomar. Flera former av autolog transplantation för åldersrelaterad makuladegeneration (AMD), som iris pigment epitelial celltransplantation, har genererat uppmuntrande resultat, och kliniska studier har börjat för andra former av gen-och stamcellsterapi. 2 Dessa inkluderar RPE65 gen utbyte hos patienter med Leber: s medfödda amauros och RPE celltransplantation med humana embryonala stamceller (ES-celler) i Stargardts sjukdom. 3-4 Nu när det finns genterapi vektorer och stamceller finns för behandling av patienter med retinal sjukdomar är det viktigt att kontrollera dessa potentiella behandlingar i djurmodeller tillämpas föreIng dem i humanstudier. Musen har blivit en viktig vetenskaplig modell för att testa den terapeutiska effekten av vektorer genterapi och stamcellstransplantation i ögat. 5-8 I denna video artikeln presenterar vi en teknik för att injicera genterapivektorer eller stamceller i det subretinalområdet av musen ögat samtidigt minimera skador på omgivande vävnad.
Protocol
1. Montera Anordningar för subretinal injektion
- Köpa eller göra en 100 nål xm diameter från en glaskapillärrör. Detta kan göras manuellt genom att använda en Sutter P-97 pipett avdragare eller annan liknande utrustning. Änden av kapillärröret kommer att värmas och dras tills den når den önskade diametern (100 | im). En mindre diameter hos nål kan användas för genterapivektorer, men detta är den rekommenderade diametern för cellinjektion utan skada på cellerna eller ögat. Jämfört med stålnålar, har glaskapillär nålen en mycket fin, men trubbig spets, för att möjliggöra visualisering av injektionsvätska och tillgång till det subretinala utrymmet utan att orsaka retinal bristning. Rengör dessa drog nålar om det behövs med 70% etanol, och förvara i en steril behållare. En 15 cm steril vävnadsodlingsskål med tejp för att hålla nålarna på plats är ett sätt på vilket att hålla injektionsnålarna omfattas och i en steril miljö. Vid denna punkt, komplETE etableringen inom den kirurgiska rum där förfarandet äger rum. Det är lättast att hålla all utrustning i den kirurgiska rummet vid alla tidpunkter för att det förblir sterila, särskilt om detta förfarande sker inom en barriär anläggning.
- Aspirera silikon i injektionsnålen och mata silikonen att lämna en beläggning längs de inre väggarna hos nålen. Silikonbeläggningen maximerar passage av celler och virus genom nålen hål, som annars skulle fastna på de inre glas kapillärväggarna.
- Skaffa en ca 8 cm lång steril plastslang genom att skära en 25 ¾-gauge blodinsamling set med Luer-lås vid den punkt direkt efter nålen (ta bort nålen från slangen).
- Fyll en 1 ml Sub-Q 26 5/8-gauge slip-tip spruta med steril koksaltlösning och ta bort nålen från sprutan.
- Fäst injektionsnålen på den avskurna änden av plaströret och fäst sprutan till Luer-låset på den andraslut.
- Aspirera steril saltlösning för att fylla det döda utrymmet i slangen och kapillära nålen, utstötning viss saltlösning genom nålen för att säkerställa att den är korrekt fäst utan något läckage. Därefter aspirera en liten, cirka 1 pl mängd luft, in i spetsen av injektionsnålen. Detta kommer att separera saltlösningen från injektionsvätska och ger en visuell signal som indikerar slutet av injektionen fluidet under den kirurgiska proceduren. Injektionsanordningen bör hållas på en ren yta torkas med 70% etanol under det kirurgiska ingreppet. Dessutom bör all utrustning som används vid det kirurgiska förfarandet rengöras både före och efter med 70% etanol, för undantag av injektionsnålarna som redan bör hållas steril och klar för användning. Dessa nålar ska kasseras efter operationen, och inte återanvändas.
- Slutligen, aspirera injektionslösning innehållande den önskade förpackade genterapi virusvektor eller stamceller. Detta kan göras genomtar upp injektionslösningen i en steril pipettspets, därefter pipettera lösningen på ytan av en steril cellodling skålen. Lösningen kan nu lätt aspireras in injektionsnålen med sprutan. Den mängd som behövs kommer att variera beroende på ålder hos musen. För våra syften använder vi postnatala dag 5 möss, som kan injiceras med 0,5-0,8 il injektionsvätska. Mindre mängder, 0,5 pl eller mindre, kan användas för yngre möss och större mängder, såsom 1 pl, kan användas för vuxna möss. Den virala titern eller antalet celler måste bestämmas baserat på virus / cellerna injiceras och deras önskade målvävnaden, kan så alltför många virala partiklar eller celler i en liten volym leder till toxicitet för de retinala cellerna. I videon för visualisering ändamål har vi använt 1,5 pl, en större mängd färgämne än nödvändigt för att injicera in i ögat.
2. Åtkomst till subretinalområdet
- Inom det sterila kirurgiska rummet,stabilisera eller söva musen enligt lokalt godkänd djurhantering protokoll, som varierar efter ålder av musen. Gemensamt anestesi för vuxna möss inkluderar användning av isofluran gas eller en intraperitoneal injektion av 0,1 ml/10 g kroppsvikt av ketamin (100 mg / ml) och xylazin (20 mg / ml) i steril saltlösning. För perinatala möss, vanliga anestesi tekniker inkluderar användning av isofluran gas eller cryoanesthesia (hypotermi). Alla anestesi tekniker måste godkännas av din lokala IACUC kommitté före användning. Vi använder typiskt postnatal dag (P) 5 möss, även om liknande metoder kan appliceras på möss så unga som P0 eller till vuxna möss. Det kirurgiska ingreppet kan inte börja förrän musen har upphört att flytta armar och ben och inte längre svarar på tå klämmer. För perinatala möss, kommer de att bli märkbart ljusare i färgen eftersom blodflödet kommer att sakta ner, en annan nyckel till att veta att de är helt under narkos.
- I perinatala möss använder Vännäs raka sax till mTag en ungefärlig 1,5 mm snitt längs den slutna locket fissuren. Var noga med att skära i fördjupningen, där ögat kommer naturligtvis att öppna i framtiden. Detta säkerställer att locken läker och öppna ordentligt under utvecklingen av musen. En kirurgiskt blad kan användas för detta ändamål, även om vi föredrar Vännäs sax eftersom de minskar risken för punktering av ögat under denna procedur. I videon, var saxen användas för att direkt punktering och skär längs ögonlocket marginal. När lära denna teknik bör tång användas för att lyfta ögonlocket före skärning och minska risken för skador på ögat.
- Dra isär ögonlocken med böjda dressing pincett för att proptose ögat och klämma ögonlocken en aning under ögat för att hålla den proptosed för injektion. Om locket snitt i steg två är för stor, kommer ögat glida tillbaka under locken och förhindra adekvat exponering under injektionsproceduren. För vuxna möss med ett lätt tryck runt ögat med drEssing pincett kan hålla ögat proptosed för injektion.
- Gör en liten skleral snitt vid eller posteriort världen ekvator genom att skrapa på ytan med en 15-graders mikrokirurgi blad. Detta snitt bör vara endast tillräckligt stor för att passera spetsen på injektionsnålen, men inte större än så. Om så önskas, kan en liten, vass nål, såsom en akupunktur nål användas för att göra detta snitt i det subretinala utrymmet i stället för bladet mikrokirurgi. I mörkt pigmenterade djur, kommer en mörk brun-pigmenterad vävnad (åderhinnan-retinalt pigmentepitel) blir synliga vid punkten för snittet. I lättare pigmenterade eller albinomöss, kan en kirurgisk märkpenna appliceras på spetsen av mikrokirurgi bladet att lämna en bläck plats indikerar snittstället. Om klara (glaskroppen) vätska refluxes från snittet webbplatsen, var bladet placerades för djupt och trädde i glaskroppen och den terapeutiska virus eller celler kan komma in i intravitreala utrymmet under injektion. För visualizatipå ändamål har vi gjort snittet till denna punkt i videon. Det är fortfarande möjligt att avsluta en subretinal injicering i detta fall, men näthinneavlossning på grund av närvaron av injektionsvätska inte helt läka i den här musen. Därför måste försiktighet iakttas för att skära endast den yttre ytan av ögat och inte genom näthinnan före injektion.
- Försiktigt in injektionsnålen i snitt webbplatsen och föra den parallellt med den yttre ögat väggen att komma in i subretinalområdet. Vidareutveckla alltför nära den yttre väggen eller alltför djupt inuti ögat kommer att leda injektion i fel plats. Den bästa metoden för att förstå om nålen är på rätt plats är att öva tekniken. Öva på lätt pigmenterade eller albino möss kan bidra till att göra exakta och korrekta injektioner i subretinalområdet. Detta beror på att nålen och injektionsvätska är synlig inuti dessa ögon.
- Tryck lätt sprutkolven och varagin injektion av den önskade fluiden. Om nålen är korrekt placerad i subretinalområdet kommer måttlig mottryck att märkas. Om nålen är inuti glaskroppen, kommer det att finnas avsevärt mindre mottryck och potentiellt del fluid återflöde under injektionen. Om det råder betydande mottryck, hålla nålen på plats för åtminstone ytterligare 15 sekunder innan du tar bort nålen långsamt. Detta kommer att möjliggöra högt intraokulärt tryck att utjämna stället för återloppskokning av injicerade virus eller celler tillbaka ut snittstället. Några av luft och saltlösning kan injiceras i det subretinala utrymmet på grund av den ökade tryck som krävs under injektionsproceduren. Försiktighet bör iakttas för att inte över-injicera luft eller saltlösning, eftersom den kan spola ut den injicerade virus eller celler från ögat. Det är också möjligt att orsaka permanent näthinneavlossning genom närvaron av för mycket vätska sprutas in i subretinalområdet. För visualisering ändamål var överskottsfärg och luft sprutas into subretinalområdet i videon. Det kan tydligt ses hur en del av färgämnet kommer att spolas tillbaka ut ur subretinalområdet om alltför mycket injiceras, utan också hur luftbubblan förblir inom det subretinala utrymmet och inte försvinner in i glaskroppen. Detta användes för att betona att dessa injektioner var alla i rätt läge i ögat, så att man kan visualisera hur nålen ska träda snittstället. Samtliga injektioner i subretinalområdet orsaka en tillfällig näthinneavlossning på grund av närvaron av injektionsvätskan. Om injektionen är avslutat korrekt, kommer denna tillfälliga näthinneavlossning läker inom 24 timmar och möss kan användas för alla ytterligare experiment. Ögat kan förbli mjuk för ungefär en vecka på grund av det kirurgiska ingreppet, så en andra injektion bör undvikas under denna tidsperiod.
- För neonatala möss, använd böjda dressing pincett för att försiktigt trycka ögat tillbaka bakom locken och in i omloppsbana. Det kan vara användbartatt vänta på en minut för att göra det möjligt för viruset att lösa inom det subretinala utrymmet och inte orsaka att spolas ut snittstället när försiktigt trycka ögat tillbaka till sin omloppsbana. Efter operation, en droppe 0,5% bupivakain (markain) utspädd till 0,25% i steril koksaltlösning från en 25-nål kan placeras vid injektionsstället. Möss visar inte uppenbara tecken på lidande efter subretinal kirurgi och användning av bupivakain som ett långtidsverkande lokalsmärtstillande har varit gott för de föregående tre åren. Möss ska alltid följas efter kirurgiskt ingrepp för att leta efter tecken på stress, såsom infektioner, svullnad eller en minskning av de vanliga dagliga aktiviteter musen. Om detta inträffar, ska veterinären meddelas och ytterligare smärtstillande läkemedel såsom buprenorfin (0,05 mg / kg) kan ges som en intraperitoneal injektion.
- Väck musen från narkos enligt lokalt godkänd djurhantering protokoll. Musen ska hållas på en uppvärmning pannonsen ska behålla normal kroppstemperatur när den vaknar från narkos. Det kirurgiska ingreppet bör ta mindre än fem minuter att slutföra, inte räknar tiden för musen att genomgå anestesi. Därför är en värmedyna inte nödvändig under själva förfarandet, men kan behövas när man lär sig teknik som förfarandet skulle kunna ta längre tid tid. Musen får inte placeras tillbaka i en ren bur tills det har börjat röra sig på egen hand. För nyfödda kommer mjuka tå klämmer hjälp för dem att återhämta sig helt från bedövningen, och de bör återfå sin rosa färg och rörelse innan de släpps tillbaka med mamman. Möss bör följas över tid för eventuella tecken på ångest som anges ovan.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
En ritning av musen ögat visas med stora strukturer märkta för referens, med pilar som visar platserna för både intravitreala och subretinal injicering kirurgiska ingrepp (pilspetsar, figur 1). Genterapi vektorer, såsom lacZ lentivirusvektorn (figur 2), kan injiceras med hjälp av dessa platser. Dessutom kan stamceller, såsom mus embryonala stamceller (figur 3), också transplanteras på dessa ställen i musens ögat.
1 pl av en lentiviral vektor som bär lacZ-reportergenen drivs av cytomegalovirus (CMV)-promotorn (1x10 8 TU / ml, Lentigen Corporation, figur 2A) injicerades i det subretinala utrymmet i C57BL/6J-möss. Ögon enukleation vid sex veckors ålder genom trubbig dissektion och nedsänktes i 1 mg / ml X-gal-lösning (5 mM K-3 Fe (CN) 6, 2 mM MgCl2, 0,02% NP 40, och 0.1% natriumdeoxikolat) över natten vid 37 ° C. Ögonen fixerades i 2% formaldehyde/0.2% glutaraldehyd under 30 minuter och sektionerades på en mikrotom. Detekterades som X-gal-produkt (blå) i ungefär 10% av fotoreceptorceller (figur 2B) LacZ-rapportörgen genexpression. Den intracellulära närvaro lacZ uttryck och de intakta omgivande vävnader indikerar den framgångsrika subretinala injektion i mus ögat.
C57BL/6J mus embryonala stamceller (ES-celler) märktes med ett grönt fluorescerande protein (EGFP, Wellcome Trust Sanger Institute). Dessa celler uppsamlades därefter och suspenderades i steril fosfatbuffrad saltlösning och transplanterades till subretinalområdet av postnatal dag (P) 5 C57BL/6J-möss, med cirka 1x10 5 celler injicerade per 1 pl. Ögon enukleation vid två veckors ålder genom trubbig dissektion, fast i en sackarosgradient och frystes i oktober inbäddningsmedium (Tissue-Tek). Ögon snittades och vis ualized enligt fluorescensmikroskopi (Zeiss). Närvaron av GFP-märkta ES-celler kan hittas inom det subretinala utrymmet av den injicerade mus ögat (figur 3A). Dessutom var C57BL/6J-Tyr c-2j / J (C2J) mus embryonala stamceller (ES-celler) elektroporerades med gul fluorescerande protein (YFP) och differentieras till retinala pigmentepitelceller (RPE)-celler in vitro. Efter en månad av differentiering, var YFP-märkta RPE-liknande C2J ES-celler suspenderades i steril fosfatbuffrad saltlösning och injiceras i det subretinala utrymmet i P5 C57BL/6J-möss. Vid 15 veckors ålder, var en mus visualiserades med levande-imaging autofluorescens för närvaron av YFP i retina (Spectralis Scanning Laser Confocal Oftalmoskop, Heidelberg Engineering, figur 3B).
4286fig1highres.jpg "/>
Figur 1. Schematisk av musen ögon. En tecknad ritning som visar strukturer musens ögat med platser för både intravitreala och subretinal märkta injektion förfaranden (pilspetsar).
Figur 2. Subretinal Injektion av en Gene Therapy virusvektor. A. Lentivirus vektor karta som visar lacZ-reportergenen drivs av cytomegalovirus (CMV)-promotorn. B. Expression av lacZ-reportergenen i näthinnan i en sex veckor gammal C57BL/6J mus efter subretinal injektion vid postnatal dag fem. RGC, näthinneganglieceller, INL, inre nukleära lagret, IS, fotoreceptor inre segment (pil), ENDA, yttre kärnskiktet (fotoreceptorer) (pilspets), OS, fotoreceptor yttre segment.
Figur 3. Subretinal Injektion av mus embryonala stamceller (ES-celler). A. En två veckor gammal C57BL/6J mus efter subretinal injektion av grönt fluorescerande protein (GFP)-märkta ES-celler vid postnatal dag fem. GFP-positiva celler är synliga inom det subretinala utrymmet i ögat injicerade med fluorescensmikroskopi (Zeiss). Grön, GFP-märkta ES-celler (pilar), RGL, retinala ganglion skikt, INL, inre kärnskiktet, ONL, yttre kärnskiktet (fotoreceptorer), IS / OS, inre och yttre segment fotoreceptor, RPE, pigmentepitelet. B. En 15 veckor gamla C57BL/6J mus näthinna visas med autofluorescens levande-bildåtergivning (Spectralis Scanning Laser Confocal Oftalmoskop, Heidelberg Engineering) för närvaron av gula fluorescerande protein (YFP)-märkta RPE-liknande C2J mus-ES-celler i näthinnan.Subretinal injektion av RPE-liknande YFP-ES-celler utfördes vid postnatal dag fem.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Denna video teknik ger anvisningar om hur man fyller det subretinala injektionen kirurgiska ingrepp framgångsrikt, och se till att genterapi vektor eller stamceller placeras på den plats som krävs för att effektivt behandla oftalmiska sjukdomen. Denna teknik möjliggör inriktning av retinala celler såsom RPE eller fotoreceptorer, eftersom det ger genterapivektorer eller stamceller härledda vävnader i närheten av dessa celler. Tidigare metoder som intravitreala injektioner, där vätskan är placerad inuti i glaskroppen och måste vandra genom näthinnan för att rikta dessa områden. Intravitreal injektion minskar transduktion av vektorer för genterapi som riktar fotoreceptorer eller RPE, eftersom inte alla viruspartiklar kommer att migrera till rätt plats. Vidare är stamceller blir allt populärare att ersätta sjuka RPE eller fotoreceptorer, och dessa differentierade celler måste transplanteras inom subretinal utrymme. 5
Det kritiska steget i denna procedur är inträde i subretinalområdet, eftersom detta säkerställer den korrekta placeringen av genterapivektorer eller stamceller härledda vävnader för att ha terapeutisk verkan, tillsammans med att minska risken för näthinneavlossning eller skador på omgivande ögat vävnad. Försiktighet måste vidtas för att felsöka i förväg, för att kunna hitta och injicera vätska i subretinalområdet. Detta kan ske genom praktik med färgat färgämne och albinomöss, som visas i videon, eftersom injektionsnålen inte syns i ögat av pigmenterade möss. Efter praktiken kommer forskaren lär sig att känna skillnaden i tryck när vätskan är korrekt placerad i subretinalområdet och vara bekväm med det kirurgiska ingreppet för att slutföra den i tid.
Det finns några tänkbara ändringar för detta kirurgiska ingrepp. Dessa injektioner kan utföraed på möss i olika åldrar, även om mängden genterapivektorer eller injiceras stamceller som härrör vävnader kan variera beroende på ålder av musen. Försiktighet bör vidtas för att avgöra hur mycket vätska kommer att främja behandling för oftalmisk sjukdom, men inte förlänga avskildhet och skador på näthinnan. De drog kapillära nålen kan modifieras för att ha olika diametrar. Rundst är tillräckliga för virala injektioner, men större diametrar kan vara bättre för cellulär transplantation. Dessutom, kan operationen utföras på vuxna möss. Ögat vävnadsdensitet kommer att bli mycket större, är så färska, skarpa kirurgiska blad som krävs för att tränga in i subretinalområdet. I samtliga fall kan ändringar göras baserat på detta protokoll för att genomföra en lyckad subretinal injektion av en genterapi vektor eller stamceller som härrör vävnad.
Samtliga subretinal injektioner kommer att orsaka en tillfällig näthinneavlossning på grund av närvaron av den injicerade fluiden inutisubretinalområdet, men lossnar bör läka inom 24 timmar det kirurgiska ingreppet. Möss kan kontrolleras noggrant under mikroskop för kvarvarande avskildhet. Det är möjligt att vissa möss inte läka naturligt även efter en välplacerad injektion. Alla möss kan undersökas och experiment efter denna 24-timmars-period, men ögat kan vara mjuk på grund av en förändring i tryck från injektionsproceduren upp till en vecka. Därför är en begränsning av denna teknik förmågan att utföra sekundära injektioner under den första postoperativa veckan. Annan injektion kan inte vara möjligt under den omedelbara postoperativa perioden, eftersom förekomsten av näthinneavlossning som inte läker efter kirurgi ökas. Det rekommenderas att vänta under en längre tidsperiod, så länge som en månad, innan de injicerar musen ögat.
Musen har blivit en viktig modell organism att studera oftalmisk sjukdom och potentiella terapier thatt kommer att leda till kliniska prövningar. 9-12 En andra begränsning av detta förfarande är att inte alla celler transfekteras med DNA-vektorer efter subretinal injektion, eftersom de skulle vara i en transgen musmodell. Detta förfarande kan närmare ungefärliga en klinisk procedur hos människor där inte varje cell transfekteras. Således kan denna teknik bidra till att skapa förutsättningarna för att genomföra virala genterapi vektorer eller stamceller som härrör vävnadstransplantation terapi för att behandla åldersrelaterad makuladegeneration och andra vitreoretinala sjukdomar hos människor. Framtida tillämpningar kan innefatta användning av olika retinala celler initiativtagare och differentierade stamceller, eller ens flera injektioner med en kombination av behandlingar.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Inga intressekonflikter deklareras.
Acknowledgments
Forskning för att förhindra blindhet, Experimentell hjälp från Takayuki Nagasaki, Denna forskning uppfyller ARVO uttalande för användning av djur i Ophthalmic och Visual Research. KJW stöds av NIH bidrag 5T32EY013933 och 5T32DK007647-20. VBM stöds av NIH bidrag K08EY020530.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 0.8-1.10 x 100 mm Capillary Tube (glass) | Kimble Glass, Inc. | 34502 99 | |
| Flaming/Brown Micropipette Puller | Sutter Instrument | P-97 | Narishige microforge can be used instead. Catalog #MF-900 |
| Sigmacote | Sigma Aldrich | SL2-25ML | Silicone |
| Dubecco's Phosphate Buffered Saline with Calcium Chloride and Magnesium Chloride | Gibco-Invitrogen | 14040-133 | |
| Safety-Lok 25 3/4G x 12"; Blood Collection Set | B-D Vacutainer | 367298 | |
| 1 ml Sub-Q 26 5/8G Slip-Tip Syringe | Becton-Dickinson | 309597 | |
| 0.5-10 μl Finnpipette II Adjustable-Volume Pipetter | Fisherbrand | 21-377-815 | |
| 1-200 μl Natural Beveled Tips | USA Scientific, Inc. | 1111-1700 | |
| Discovery.V8 Stereo Microscope | Zeiss | MC1500 | |
| 60 mm x 15 mm Style Treated Polystyrene Cell Culture Dish | Corning Incorporated | 430166 | |
| Vannas Straight Scissors | Storz Ophthalmics | E3383 S | |
| Curved Dressing Forceps with Serrations Delicate | Storz Ophthalmics | E1408 | |
| 15 Degree Microsurgery Knife | Wilson Ophthalmic Corp. | 091204 | |
| Ketamine | Ketaset III | NADA #45-290 | |
| Xylazine | Lloyd Laboratories | NADA #139-236 | |
| Bupivacaine (Marcaine) | AstraZeneca | N/A | |
| Buprenorphine | Sigma Aldrich | B9275 |
References
- Prevalence of Blindness Data Tables [NEI Statistics and Data]. , National Eye Insitute. Available from: http://www.nei.nih.gov/eyedata/pbd_tables.asp (2011).
- Abe, T. Regeneration of the retina using pigment epithelial cell transplantation. Nihon Ganka Gakkai Zasshi. 106, 778-803 (2002).
- Jacobson, S. G., Cideciyan, A. V., Ratnakaram, R., Heon, E., Schwartz, S. B., Roman, A. J., Peden, M. C., Aleman, T. S., Boye, S. L., Sumaroka, A., et al. Gene therapy for Leber congenital amaurosis caused by RPE65 mutations: safety and efficacy in 15 children and adults followed up to 3 years. Arch. Ophthalmol. 130, 9-24 (2011).
- Schwartz, S. D., Hubschman, J. P., Heilwell, G., Franco-Cardenas, V., Pan, C. K., Ostrick, R. M., Mickunas, E., Gay, R., Klimanskaya, I., Lanza, R. Embryonic stem cell trials for macular degeneration: a preliminary report. Lancet. 379, 713-720 (2012).
- Wang, N. K., Tosi, J., Kasanuki, J. M., Chou, C. L., Kong, J., Parmalee, N., Wert, K. J., Allikmets, R. Transplantation of reprogrammed embryonic stem cells improves visual function in a mouse model for retinitis pigmentosa. Transplantation. 89, 911-919 (2010).
- Song, B. J., Tsang, S. H., Lin, C. -S. Genetic models of retinal degeneration and targets for gene therapy. Gene Ther. Mol. Biol. 11, 229-262 (2007).
- Tosi, J., Sancho-Pelluz, J., Davis, R. J., Hsu, C. W., Wolpert, K. V., Sengillo, J. D., Lin, C. S., Tsang, S. H. Lentivirus-mediated expression of cDNA and shRNA slows degeneration in retinitis pigmentosa. Exp. Biol. Med. 236, 1211-1217 (2011).
- Tucker, B. A., Park, I. H., Qi, S. D., Klassen, H. J., Jiang, C., Yao, J., Redenti, S., Daley, G. Q., Young, M. J. Transplantation of adult mouse iPS cell-derived photoreceptor precursors restores retinal structure and function in degenerative mice. PLoS One. 6, e189992 (2011).
- Mahajan, V. B., Mondino, B. J., Tsang, S. H. A high-throughput Mouse Eye Phenomics System. , Cold Spring Harbor Laboratories. (2010).
- Chang, B., Hawes, N. L., Hurd, R. E., Davisson, M. T., Nusinowitz, S., Heckenlively, J. R.
- Hawes, N. L., Smith, R. S., Chang, B., Davisson, M., Heckenlively, J. R., John, S. W. Mouse fundus photography and angiography: a catalogue of normal and mutant phenotypes. Mol. Vis. 5, 22 (1999).
- Won, J., Shi, L. Y., Hicks, W., Wang, J., Hurd, R., Naggert, J. K., Chang, B., Nishina, P. M. Mouse model resources for vision research. J. Ophthalmol. 2011, 391384 (2011).
