ヒト乳腺外科廃棄材料を処理する方法が記載されている。オルガノイドの形で処理された組織は、無期限に凍結したり、長期的な成長のための文化に入れ保存することができます。この方法は、実験的な正常なヒト上皮細胞生物学の検査、および外因性の摂動の効果を可能にします。
正常ヒト乳腺上皮細胞(HMEC)の動作方法と、正常な細胞が異常な性質を獲得の実験的検討では、in vivoで生物学のそれより正確にモデルのin vitro培養系によって促進することができる。細胞分化を研究するためのヒト由来の材料を使用することは、加齢、老化、および不死化は1-2人間と一般的に利用さげっ歯類の細胞間で、これらのプロパティの多くの重要な分子の違いが与えられたが特に有利で ある。正常と異常組織が大量に削減乳房形成や乳房切除手術の周波数による使用可能であるため、乳腺細胞が便利なモデルシステムを提示する。
乳腺は、多くの異なる細胞型、 例えば 、上皮細胞、脂肪、間葉、内皮の複雑な混合で構成されています。上皮細胞は、泌乳期乳腺の分化機能を担当しているまた、ヒト乳癌の大部分の起源である。私たちは純粋な上皮成分にだけでなく、間葉系細胞を3乳腺外科廃棄組織を処理する方法を開発した。処理された材料は、無期限に凍結保存、または初代培養に開始することができます。外科廃棄材料が実験室に輸送して、手動で上皮含有組織を濃縮するために解剖されています。基底膜における上皮からコラゲナーゼ、ヒアルロニダーゼストリップ間質材料を用いた解剖組織のその後の消化。上皮ツリーの結果小片(オルガノイド)は、固定孔径のメンブレン上の順次濾過により消化ストロマから分離することができる。細孔の大きさに応じて、画分を大きく肺胞/腺管部分、小さい歯槽クラスタ、または間質細胞から成る得ることができます。培養はオルガノイドとしてではなく、DISとして開始されたときに我々は優れた成長を観察しているsociated単一細胞。低応力誘導培地を用いて培養におけるオルガノイドの配置では、複数の系統型(筋上皮、管腔、前駆)4-5のマーカーを用いて正常なHMECの長期的な成長をサポートしています。細胞が十分な数は、広範な実験的な標準化された細胞のバッチを使用して検査だけでなく、高スループットのモダリティを用いた尋問を許可するために1個の組織から得ることができる。
培養HMECは正常な成長、分化、老化、老化を支配するプロセス、およびどのようにこれらの通常のプロセスは不滅と悪性形質転換4-15,16時に変更されているを調べる研究のさまざまな分野で用いられてきた。細胞外マトリックス物質の存在下で成長、他の細胞型、および/ または3D文化の影響は、プラスチック5,15上での成長と比較することができます。培養HMECは、正常細胞から始まり、その要因を調べるために実験的に扱いやすいシステムを提供人間の老化と発癌を推進または防ぐかもしれません。
ここに提示され、人間の乳房組織の処理方法は、人間の乳房の細胞型の異種混合物から純粋な乳腺上皮細胞を得ることができます。固定サイズの孔を通って濾過が消化された間質マトリックスから乳腺の異なる画分( 例えば 、乳管や膵管-歯槽対肺胞)を分離することができます。同質乳腺線維芽細胞は、上皮細胞に一致するように求めることができる。凍結消化された物質は、30年以上に渡って良好な生存能力を保持しています。このメソッドは、すべてが、非常に繊維質の乳腺組織で正常に働いて、実行するのは簡単ですしています。乳腺組織の処理の他のバリエーションは、現実的な、きれいな、または分離されている上皮画分を提供していませんが存在しています。そのようなM87Aなどの低応力誘発メディアと文化の中で処理さオルガノイドの配置は複数系統マーカーでHMECの長期的な成長を可能にします。まだ属する能力を保持しているプラスチック上で培養されたHMEC生体のような系統関係における法線とteの3D構造。これらHMEC培養は通常HMEC行動や老化およびトランスフォーメーションを推進するまたは阻害する可能性のある要因についての高スループットなど、豊富な実験調査に適している。
The authors have nothing to disclose.
MALは、JCG、およびMRSはエネルギー契約の米国務省は、#DE-AC02-05CH11231、監督研究開発NIA(R00AG033176とR01AG040081)および研究所によってサポートされています。
Glass Petri dish 15 cm | VWR | 89000-308 |
Scissors 6.5″ | VWR | 82027-594 |
Forceps 8″ | VWR | 82027-436 |
Scalpels disposable | Miltex | 4-411 |
Collagenase | SIGMA | C0130 |
Hyaluronidase | SIGMA | H3506 |
Insulin | SIGMA | I5500 |
DMSO | SIGMA | D8418 |
Pennicillin/Streptomycin | Life Technologies | 15140-122 |
Fungizone | Life Technologies | 15290-018 |
Polymixin B sulfate | Life Technologies | 21850-029 |
Fetal Bovine Serum | Life Technologies | 26140-087 |
Trypsin 0.05% 100 ml | Life Technologies | 25300-054 |
DMEM/F12 | Life Technologies | 11039-021 |
HulaMixer | Life Technologies | 159-20D |
Cell strainer 100 μm | BD Falcon | 352360 |
Cell strainer 40 μm | BD Falcon | 352340 |
Tubes 15 ml | Greiner bio-one | 188-261 |
Tubes 50 ml | Greiner bio-one | 227-261 |
TC dishes 10 cm | Greiner bio-one | 664-160 |
TC dishes 6 cm | Greiner bio-one | 628-160 |
Cryogenic vials | Nalgene | 5000-1020 |
Heamocytometer | Hauser Scientific | 1490 |
Centrifuge | Eppendorf model | 5702 |