Insan meme cerrahi ıskarta malzeme işlemek için bir yöntem tarif edilmiştir. Organoids şeklinde işlenmiş doku, süresiz olarak dondurulmuş ya da uzun süreli büyüme için kültür içinde yerleştirilmiş saklanabilir. Bu yöntem deneysel normal insan epitel hücre biyolojisi incelenmesi ve eksojen pertürbasyonların etkileri sağlar.
Deneysel normal insan meme epitel hücresi (HMEC) davranış incelenmesi ve nasıl normal hücrelerin anormal mülk edinme, in vitro kültür sistemleri ile sağlanabilir in vivo, biyoloji daha doğru modeli. Hücre farklılaşması incelemek için insan kaynaklı malzemenin kullanımı, yaşlanma, yaşlanma, ve ölümsüzleşme 1-2 insan ve yaygın olarak kullanılan, kemirgen hücreler arasındaki bu özellikler de çok önemli moleküler farklılıklar nedeniyle özellikle avantajlıdır. Normal ve anormal dokular büyük miktarda azalma mammoplasty ve mastektomi ameliyatları frekansa bağlı bulunması nedeniyle meme hücreleri uygun bir model sistem sunuyoruz.
Meme bezi çok sayıda farklı hücre türleri, örneğin, epitel, yağ, mezenkimal, endotelyal karmaşık bir karışım oluşur. Epitel hücreleri, laktasyon farklılaşmış meme fonksiyonu sorumludurve aynı zamanda insan meme kanserlerinin büyük çoğunluğunun kökeni vardır. Biz saf epitel bileşenleri içine yanı sıra mezenkimal hücreler 3 meme bezinin cerrahi ıskarta dokuları işlemek için yöntemler geliştirmişlerdir. Işlenmiş materyal süresiz dondurularak veya primer kültürü içine başlatılabilir. Cerrahi ıskarta malzeme laboratuara getirilerek elle epitel içeren dokuların için zenginleştirmek için disseke edilir. Disseke doku sonraki sindirim bazal membran epithelia gelen kollajenaz ve hyaluronidaz şeritler stromal malzeme kullanarak. Epitelyal ağacının çıkan küçük parçalar (organoids) sabit gözenek boyutu membranları üzerinde ardışık süzme ile sindirilmiş stroma ayrılabilir. Gözenek büyüklüğüne bağlı olarak, daha büyük bir fraksiyonu alveolar / duktal parçaları, daha küçük boşluklu kümeleri ya da stromal hücrelerin oluşan elde edilebilir. Kültürler dis gibi yerine organoids olarak başlatılan zaman biz üstün bir büyüme gözlemlediksociated tek hücre. Düşük stres indükleyici medya kullanarak kültür organoids Yerleştirme birden soy türleri (myoepitelyal luminal, progenitör) 4-5 belirteçleri normal HMEC uzun vadeli büyüme destekler. Hücrelerin yeterli sayıda yüksek üretim yöntemleri kullanılarak standart hücre gruplar, hem de sorgulama kullanılarak geniş deneysel inceleme izin verecek şekilde bir bireyin dokusundan elde edilebilir.
Kültürlü HMEC büyüme, farklılaşma, yaşlanma ve yaşlanma, ve nasıl bu normal süreçler ölümsüz ve malign transformasyon 4-15,16 sırasında değişmiş yöneten normal süreçleri araştıran çalışmaların geniş bir yelpazede istihdam edilmiştir. Ekstrasellüler matris malzemesi, diğer hücre tipleri ve / veya 3D kültür varlığında büyüme etkileri plastik 5,15 üzerinde büyüme ile mukayese edilebilir. Kültürlü HMEC, normal hücreler ile başlayarak, bu faktörleri incelemek için bir deneysel olarak çözülebilir bir sistem sağlamakinsan yaşlanması ve karsinogenez itmek veya önleyebilir.
Burada sunulan insan meme dokusu işleme yöntemi insan meme hücre tiplerinin heterojen karışımı saf meme epitel hücreleri elde sağlar. Sabit büyüklükte gözenekler aracılığıyla Filtrasyon sindirilmiş stromal matriks gelen meme bezinin çeşitli fraksiyonları (örneğin, duktal ve duktal-alveoler vs alveol) ayrılması sağlar. İzogenik meme fibroblastlar epitel hücreleri maç için elde edilebilir. Dondurulmuş sindirilen malzemenin 30 yıl boyunca iyi bir canlılık korudu. Bu yöntem, tüm ama çok fibröz meme dokuları üzerinde başarıyla çalışmış ve gerçekleştirmek için basit gelmiştir. Meme dokusu işleme Diğer varyasyonları olarak uygulanabilir, temiz veya ayrılmış olan epitelyal kesirler vermeyin var. Böyle M87A gibi düşük stres yaratıcı medya kültürü işlenmiş organoids Yerleştirme birden soy belirteçleri ile HMEC uzun vadeli büyüme sağlar. Plastik kültüre oylandı HMEC hala cins yeteneğini korumakvivo benzeri soy ilişkileri normal te 3D yapılar. Bu HMEC kültürler Normal HMEC davranış ve yaşlanması ve dönüşüm itmek veya inhibe edebilir faktörlerinin yüksek verimlilik dahil olmak üzere kapsamlı deneysel incelenmesi, için uygundur.
The authors have nothing to disclose.
MAL, JCG ve MRS NIA (R00AG033176 ve R01AG040081) tarafından ve Laboratuvar Yönlendirilmiş Araştırma ve Geliştirme, # DE-AC02-05CH11231 Enerji sözleşme ABD tarafından desteklenmektedir.
Glass Petri dish 15 cm | VWR | 89000-308 |
Scissors 6.5″ | VWR | 82027-594 |
Forceps 8″ | VWR | 82027-436 |
Scalpels disposable | Miltex | 4-411 |
Collagenase | SIGMA | C0130 |
Hyaluronidase | SIGMA | H3506 |
Insulin | SIGMA | I5500 |
DMSO | SIGMA | D8418 |
Pennicillin/Streptomycin | Life Technologies | 15140-122 |
Fungizone | Life Technologies | 15290-018 |
Polymixin B sulfate | Life Technologies | 21850-029 |
Fetal Bovine Serum | Life Technologies | 26140-087 |
Trypsin 0.05% 100 ml | Life Technologies | 25300-054 |
DMEM/F12 | Life Technologies | 11039-021 |
HulaMixer | Life Technologies | 159-20D |
Cell strainer 100 μm | BD Falcon | 352360 |
Cell strainer 40 μm | BD Falcon | 352340 |
Tubes 15 ml | Greiner bio-one | 188-261 |
Tubes 50 ml | Greiner bio-one | 227-261 |
TC dishes 10 cm | Greiner bio-one | 664-160 |
TC dishes 6 cm | Greiner bio-one | 628-160 |
Cryogenic vials | Nalgene | 5000-1020 |
Heamocytometer | Hauser Scientific | 1490 |
Centrifuge | Eppendorf model | 5702 |