一个方法来处理人类乳腺外科丢弃的材料。加工组织,在组织体的形式,可以存储无限期冻结或放置在文化的长期增长。此方法使正常的人类上皮细胞生物学,实验考试和外生扰动的影响。
实验检验的正常人类乳腺上皮细胞(HMEC)的行为,与正常细胞如何获得异常的属性,可促进体外培养系统,能够更准确地在体内的生物学模型。研究细胞分化,衰老,衰老和永生化人源性材料的使用是特别有利的,因为许多重要的分子差异,在这些属性之间的人,通常利用老鼠细胞1-2。乳腺细胞中存在一个简单的模型系统,因为正常和异常组织提供了大量的频率减少隆乳术和乳房切除术的手术。
乳腺由许多不同的细胞类型, 如上皮细胞,脂肪间质,血管内皮一个复杂的混合。上皮细胞是负责的乳腺泌乳功能的差异化,绝大多数的人类乳腺癌的起源。我们已开发的方法来处理进入纯上皮组件以及间充质细胞3乳腺手术丢弃组织。处理后的材料可以被无限期冷冻保存,或开始进入小学文化。外科丢弃材料被运送到实验室,手动解剖丰富上皮含组织。随后的解剖组织的消化利用胶原酶,透明质酸酶带基质材料的上皮细胞基底膜。将所得小片的上皮树(类器官)消化的基质是可以分开的,通过顺序固定孔径的膜过滤。取决于孔径大小,可以得到较大的导管/肺泡件,较小的牙槽簇,或基质细胞组成的馏分。我们观察到卓越的增长,当文化作为组织体发起的,而不是显示sociated单细胞。放置在低应力诱导培养基培养的组织体支持长期增长的正常HMEC标记多个系类型(肌上皮,管腔,祖)4-5。从一个个体的组织,可以得到足够数量的细胞,以允许广泛的实验检验,使用标准化的细胞批次,以及使用高通量的方式的讯问。
培养HMEC已在各种正常的生长,分化,衰老,衰老,以及如何改变这些正常的过程不朽的和恶性转化过程中4-15,16过程的研究。在细胞外基质材料,以及其他类型的细胞,和/或三维培养的存在下生长的影响,可以进行比较与生长在塑料5,15。培养HMEC,与正常细胞开始,提供了一个实验听话的系统检查的因素可能会推动或阻止人类衰老和癌变。
人类乳腺组织的处理方法能够获得的异构混合类型的细胞在人乳腺癌的的纯乳腺上皮细胞。过滤通过固定大小的孔,允许不同的馏分的乳腺分离( 例如 ,导管和导管肺泡与肺泡)从消化的基质矩阵。等基因乳腺成纤维细胞可以得到相匹配的上皮细胞。冷冻消化的物质,保留了良好的生存能力超过30年。此方法已成功地工作,但在所有的乳腺组织的纤维状,是简单的执行。其他乳腺组织处理的变化,存在不提供是可行的,清洁,或分离的上皮馏分。配售文化低应力诱导培养基,如M87A加工类器官可以长期增长的HMEC多个谱系标记。 HMEC已培养在塑料上仍然保留的能力,属TE三维结构与正常的在体内像天堂关系。这些的HMEC文化是适合广泛的实验研究,包括高吞吐量,正常的的HMEC行为和因素,可能推动或抑制衰老和改造。
The authors have nothing to disclose.
MAL,JCG,和黄所支持的的NIA(R00AG033176和R01AG040081)的实验室指导研究和发展,美国能源部能源合同#DE-AC02-05CH11231。
Glass Petri dish 15 cm | VWR | 89000-308 |
Scissors 6.5″ | VWR | 82027-594 |
Forceps 8″ | VWR | 82027-436 |
Scalpels disposable | Miltex | 4-411 |
Collagenase | SIGMA | C0130 |
Hyaluronidase | SIGMA | H3506 |
Insulin | SIGMA | I5500 |
DMSO | SIGMA | D8418 |
Pennicillin/Streptomycin | Life Technologies | 15140-122 |
Fungizone | Life Technologies | 15290-018 |
Polymixin B sulfate | Life Technologies | 21850-029 |
Fetal Bovine Serum | Life Technologies | 26140-087 |
Trypsin 0.05% 100 ml | Life Technologies | 25300-054 |
DMEM/F12 | Life Technologies | 11039-021 |
HulaMixer | Life Technologies | 159-20D |
Cell strainer 100 μm | BD Falcon | 352360 |
Cell strainer 40 μm | BD Falcon | 352340 |
Tubes 15 ml | Greiner bio-one | 188-261 |
Tubes 50 ml | Greiner bio-one | 227-261 |
TC dishes 10 cm | Greiner bio-one | 664-160 |
TC dishes 6 cm | Greiner bio-one | 628-160 |
Cryogenic vials | Nalgene | 5000-1020 |
Heamocytometer | Hauser Scientific | 1490 |
Centrifuge | Eppendorf model | 5702 |