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Neuroscience

ड्रोसोफिला वयस्क घ्राण शॉक प्रशिक्षण

doi: 10.3791/50107 Published: August 7, 2014

Summary

वयस्क ड्रोसोफिला साहचर्य स्मृति को मापने के लिए विधि वर्णित है. परख एक नकारात्मक सुदृढीकरण (बिजली के झटके) के साथ प्रस्तुत एक गंध सहयोगी और फिर स्मृति मापा जा करने की इजाजत दी, बाद में इस जानकारी को याद करने के लिए मक्खी की क्षमता पर आधारित है.

Abstract

ड्रोसोफिला इस प्रकार बहुत संज्ञानात्मक रोगों 1-7 में शामिल आणविक तंत्र की व्याख्या सहित, स्मृति की हमारी समझ की सुविधा, 40 साल के लिए शास्त्रीय कंडीशनिंग प्रयोगों में इस्तेमाल किया गया है. सीखने और स्मृति वयस्क प्लास्टिसिटी जीन 1-7 के योगदान को मापने के लिए neurodevelopmental जीन 8-10 के प्रभाव का अध्ययन करने के लार्वा में और मक्खियों में assayed किया जा सकता है. इसके अलावा, ड्रोसोफिला की कम उम्र उम्र से संबंधित स्मृति हानि 5,11-13 मध्यस्थता जीन का विश्लेषण की सुविधा. ड्रोसोफिला तंत्रिका तंत्र प्रतिभाग कि कई inducible प्रमोटरों की उपलब्धता जब और जहां ब्याज की एक जीन सामान्य स्मृति के साथ ही सुदृढीकरण संकेत 3,4,14,16 के विभिन्न पहलुओं की रिले के लिए आवश्यक है कि यह संभव निर्धारित करने के लिए बनाता है.

वयस्क ड्रोसोफिला में अध्ययन स्मृति का एक विस्तृत विश्लेषण के लिए अनुमति देता हैव्यवहार और शामिल circuitry और दीर्घकालिक स्मृति में 15 -17 की एक माप. वयस्क मंच की लंबाई स्मृति 3-6,11-13,15-21 पर उम्र बढ़ने और neurodegenerative रोग के प्रभाव का निर्धारण करने के अलावा, स्मृति की लंबी अवधि, आनुवंशिक व्यवहार, आहार और औषधीय जोड़तोड़ रह सकते हैं.

शास्त्रीय कंडीशनिंग जानवर ने एक दूसरे के साथ जुड़ा हो कि एक तटस्थ गंध क्यू (वातानुकूलित उत्तेजना, सीएस +) और एक सुदृढीकरण प्रोत्साहन, उदा., एक बिजली के झटके या सूक्रोज, (असुविधाजनक उत्तेजना, अमेरिका) के एक साथ प्रस्तुति, से प्रेरित है 1,16. एक दूसरे वातानुकूलित प्रोत्साहन (सीएस -) बाद में अमेरिका के बिना प्रस्तुत किया है. परीक्षण के चरण के दौरान, ड्रोसोफिला एक साथ सीएस + और ​​CS- odors के साथ प्रस्तुत कर रहे हैं. ड्रोसोफिला odors के बीच चयन करने के लिए समय प्रदान की जाती हैं, के बाद पशुओं के वितरण दर्ज की गई है. यह प्रक्रिया अलचढ़ाव प्रतिकूल या भूख बढ़ाने वाला कंडीशनिंग मज़बूती से वातानुकूलित उत्तेजनाओं से किसी के लिए सहज वरीयता द्वारा शुरू की एक पूर्वाग्रह के बिना मापा जा साहचर्य. विभिन्न नियंत्रण प्रयोगों भी सभी जीनोटाइप अकेले गंध और सुदृढीकरण के लिए सामान्य रूप से जवाब है कि क्या परीक्षण करने के लिए प्रदर्शन कर रहे हैं.

Introduction

यहाँ प्रस्तुत विधि कुछ छोटे संशोधनों के साथ 1 टुली और क्विन द्वारा वर्णित है. मक्खियों पहले चरण में प्रशिक्षित किया जाता है, और प्रशिक्षित मक्खियों दूसरे चरण में परीक्षण कर रहे हैं: प्रयोग दो चरणों में किया जाता है. प्रशिक्षण के दौरान, मक्खियों का एक समूह एक साथ गंध को उजागर कर रहे हैं 1 (सीएस +) और एक प्रशिक्षण ट्यूब में एक बिजली के झटके (अमेरिका). एक बिजली के झटके के बिना - मक्खियों तो गंध 2 (सीएस) प्राप्त होता है. एक झटके के साथ एक विशेष गंध की यह एक बाँधना 1 चक्र प्रशिक्षण कहा जाता है, और सबसे अधिक बार उपयोग किया जाता है कि odors 4-methylcyclohexanol (एमसीएच) और 3 octanol (अक्टूबर) कर रहे हैं.

एक चक्र प्रशिक्षण अप करने के लिए 7 घंटे के लिए पता लगाया जा सकता है कि स्मृति की एक अस्थायी चरण के गठन की ओर जाता है; हालांकि, स्मृति आमतौर पर कहा जाता सीखने, अधिग्रहण या 2 मिनट स्मृति है क्या निर्धारित करने के लिए तुरंत परीक्षण किया है. 30 मिनट या 1 घंटे में मापा मेमोरी जबकि, के रूप में अल्पकालिक स्मृति में जाना जाता है3 घंटा स्मृति मध्यावधि स्मृति के रूप में जाना जाता है. प्रशिक्षण चक्र (स्थान दिया गया प्रशिक्षण) के बीच अंतराल के साथ दोहराए प्रशिक्षण चक्र के लिए मक्खियों का जोखिम CREB प्रतिलेखन निर्भर है और एक सप्ताह तक रहता है कि लंबे समय तक याद की एक समेकित फार्म की ओर जाता है. अंतराल (जमा प्रशिक्षण) के बिना प्रशिक्षण, आम तौर पर प्रशिक्षण 7,13,15-17,20,21 के 5 चक्रों के बाद 24 घंटा मापा जाता है दीर्घकालिक स्मृति के लिए इसी तरह जो संज्ञाहरण प्रतिरोधी स्मृति (एआरएम) के गठन की ओर जाता है.

इस दृष्टिकोण के साथ, स्मृति के इन विभिन्न चरणों पर विभिन्न जीन उत्परिवर्तन के प्रभाव को निर्धारित किया जा सकता है. सक्रिय या विशिष्ट न्यूरॉन्स के तंत्रिका गतिविधि को ब्लॉक करने के लिए प्रकाश या तापमान के प्रति संवेदनशील transgenes के प्रमोटर संचालित अभिव्यक्ति एक स्मृति अधिग्रहण, समेकन और पुनर्प्राप्ति 3,4,11,15,16,20 के लिए आवश्यक हैं जो न्यूरॉन्स की जांच करने के लिए अनुमति देता है, 22-24. इस च क्योंकि उम्र से संबंधित स्मृति हानि का अध्ययन करते समय 1 घंटा स्मृति आम तौर पर मापा जाता हैस्मृति की ORM 11-13 उम्र बढ़ने के प्रभाव को कमजोर दिखाई देता है. व्यवहार और आनुवंशिक नियंत्रण की एक पूरी श्रृंखला स्मृति प्रयोगों के साथ प्रदर्शन कर रहे हैं, उदाहरण के लिए, एक प्रदर्शन दोष क्योंकि एक केंद्रीय स्मृति दोष या सदमे या घ्राण क्यू 5 -7 संवेदन से मक्खी से बचाता है कि एक परिधीय संवेदी दोष की है कि यह निर्धारित करने के लिए 1 से 7, 25,26.

Protocol

1 मक्खी तैयारी

  1. आनुवंशिक पृष्ठभूमि 26 के लिए नियंत्रित करने के लिए व्यवहार प्रयोगों से पहले कम से कम छह पीढ़ियों के लिए, सभी म्यूटेंट, Gal4 / यूएएस और ऐसे CSw- के रूप में एक wildtype तनाव के साथ अन्य लाइनों, outcross.
  2. विशिष्ट जोड़तोड़ एक अलग तापमान की आवश्यकता होती है जब तक 25 डिग्री सेल्सियस पर एक 0:12 घंटा प्रकाश अंधेरे चक्र के तहत एक मानक cornmeal, खमीर और गुड़ खाद्य आहार पर मक्खियों आगे बढ़ें.
    1. Transgene अभिव्यक्ति के प्रभाव का निर्धारण करने के लिए प्रयोग करें: 18 डिग्री सेल्सियस के विकास के माध्यम से Gal4 Gal80 टीएस (लक्ष्य सिस्टम) में transgenes की अभिव्यक्ति को रोकने और उसके बाद 1-2 दिनों के व्यवहार प्रयोग से पहले एक 30 डिग्री सेल्सियस इनक्यूबेटर मक्खियों स्थानांतरित करने के लिए. Transgene अभिव्यक्ति 3,4,6,7,14 के प्रभाव को निर्धारित करने के लिए 30 डिग्री सेल्सियस पर प्रयोग आचरण.
    2. न्यूरॉन्स को प्रोत्साहित करने के लिए गर्मी सक्रिय TRPA1 चैनल का उपयोग प्रयोगों के लिए: ज्ञात एक तापमान है, जो 23 डिग्री सेल्सियस, पर मक्खियों उठाएँएक निष्क्रिय चैनल को बनाए रखने, और फिर न्यूरॉन्स व्यक्त TRPA1 सक्रिय करने के लिए 30 डिग्री सेल्सियस पर एक व्यवहार के कमरे में शिफ्ट करने के लिए.
    3. अन्तर्ग्रथनी उत्पादन 11, 14,24 ब्लॉक करने के लिए संवेदनशील Shibire तापमान का उपयोग प्रयोगों के लिए: रियर 18 डिग्री सेल्सियस पर मक्खियों और 30 डिग्री सेल्सियस पर परीक्षण आचरण.
  3. प्रयोग से पहले मक्खियों 1-2 दिनों लीजिए और प्रकाश सीओ 2 संज्ञाहरण के तहत लगभग 25 के समूह में उन्हें गिनती. 0:12 घंटा प्रकाश के साथ एक पर्यावरण नियंत्रित कमरे में और 70% सापेक्ष आर्द्रता (विशिष्ट जोड़तोड़ एक अलग तापमान की आवश्यकता होती है जब तक) 25 डिग्री सेल्सियस पर मक्खियों भोजन शीशियों में हे / एन कम से कम (खमीर) के बिना स्टोर अंधेरे की स्थिति समय तक प्रयोग की.
    नोट: यह भंडारण मक्खियों ड्रोसोफिला सीखने के लिए इष्टतम स्थितियों था जो पर्यावरण की दृष्टि से नियंत्रित कक्ष में प्रदर्शन किया बाद में सीखने परीक्षण करने के लिए जलवायु के अनुकूल बनाना करने के लिए अनुमति देता है और, महत्वपूर्ण बात, किसी भी दैनिक पर्यावरण को हटाव्यवहार phenotype प्रभावित हो सकता है कि पर्यावरण विविधताओं.

प्रयोग से पहले 2 की तैयारी

  1. एक कस्टम बनाया Perspex टी भूलभुलैया में प्रयोगों (चित्रा 1) प्रदर्शन करना.
  2. नियमित रूप से एक airtight मुहर प्रयोग के दौरान प्राप्त किया जाता है कि यह सुनिश्चित करने के लिए ट्यूब फिटिंग की जाँच करें. यदि आवश्यक हो, टी भूलभुलैया के अंदर डिब्बों को सील कि हे अंगूठी बदल जाते हैं.
  3. प्रशिक्षण ट्यूब के अंदर कस्टम बनाया तांबा ग्रिड रखें. जाँच करें और नियमित रूप से इन ग्रिडों को साफ, और ऑक्सीकरण अगर जगह. एक बिजली उत्तेजक से जुड़े एक स्विच बॉक्स को चलाने कि मगरमच्छ क्लिप के माध्यम से तारों को तांबे ग्रिड संलग्न. तंत्र आवश्यक झटका देते है कि यह सुनिश्चित करने के लिए एक वाल्टमीटर का प्रयोग करें.
  4. किसी भी हवाई रिसाव से बचने के लिए कसकर भूलभुलैया धारण करने के लिए जी clamps का उपयोग करें.
  5. एक हवाई पंप को चलाता है ट्यूबिंग के लिए टी भूलभुलैया अटैच, अनुमति देने के लिए odors को मक्खियों भर में खींचा और बाद में टी भूलभुलैया से हटा दिया जाना चाहिए. हल्के हवा बनाए रखें~ 2 एल / मिनट में प्रवाह

3 गंध dilutions

  1. मक्खियों दोनों odors के लिए एक समान वरीयता दिखाने कि इस तरह की सांद्रता में दो अलग odors का प्रयोग करें. खनिज तेल 7,13 में पतला: 4-methylcyclohexanol (1:67) और 3 octanol (100 1) का प्रयोग करें.
    नोट: ध्यान से प्रयोगशाला द्वारा अलग अलग होंगे जो इन सांद्रता निर्धारित करते हैं. उदाहरण के लिए दूसरों दोनों odors 24 के लिए 01:10 का उपयोग करें. अन्य आमतौर पर इस्तेमाल किया odors एथिल एसीटेट और आईएसओ amyl एसीटेट शामिल हैं.
  2. पिपेट इस प्रकार एक गंध पंख को मक्खियों उजागर हवा कप में गंध पर तैयार करने की अनुमति देता है कि एक छिद्रित शीर्ष के साथ एक प्लास्टिक ट्यूब द्वारा कवर एक गंध ब्लॉक में रखा एक कस्टम बनाया गंध कप में पतला गंध के 30 μl.

4 प्रशिक्षण प्रोटोकॉल (आंकड़े 1 और 2)

  1. वयस्क घ्राण झटका कंडीशनिंग के लिए, एक मंद लाल बत्ती के तहत सभी प्रयोगों (यानी., लाल एलईडी), शोधकर्ता देखने के लिए अनुमति देता है जो प्रदर्शन लेकिन FL रोकताइस प्रकार दृश्य आदानों के लिए विरोध के रूप में मक्खियों घ्राण पर ध्यान केंद्रित करने की अनुमति देता है, देखने से वाई.
  2. प्रशिक्षण ट्यूब में मक्खियों का परिचय और फिर टी भूलभुलैया के लिए देते हैं और उन्हें 90 सेकंड के लिए ट्यूब और airflow के लिए अनुकूल करने के लिए अनुमति देते हैं.
  3. 60 सेकंड की कुल अवधि के लिए (3.75 सेकंड के अंतर नाड़ी अंतराल के साथ बारह 1.25 सेकंड दालों से मिलकर) एक 60 वी सदमे के साथ पहली गंध (4 methylcyclohexanol, मातृ एवं शिशु स्वास्थ्य) वर्तमान.
  4. एक गंध या आघात के बिना एक 30 सेकंड शेष अवधि के साथ आघात का पालन करें.
  5. एक सदमे के बिना 60 सेकंड के लिए दूसरा गंध (3-octanol, अक्टूबर) प्रस्तुत करते हैं.
  6. एक गंध या आघात के बिना एक 30 सेकंड शेष अवधि के साथ आघात का पालन करें.
  7. इस तरह के एक पुराने माउस चटाई के रूप में एक नरम सतह पर टी भूलभुलैया के नीचे पीटने धीरे उसकी तरफ से टी भूलभुलैया मोड़ और टी भूलभुलैया के केंद्रीय कक्ष में प्रशिक्षण कक्ष से मक्खियों ले जाएँ. 90 सेकंड के लिए केंद्रीय कक्ष में मक्खियों बनाए रखें.
  8. बो में चुनाव ट्यूब फिटतंत्र के ttom टी भूलभुलैया बनाने के लिए.
  9. सीखने को मापने वे दोनों एक साथ odors से अवगत कराया गया, जहां टी भूलभुलैया का चुनाव मुद्दे पर मक्खियों कदम है और एक दिशा में ले जाने के लिए. 120 सेकंड के लिए एक परीक्षण अवधि का संचालन.
  10. जाल जिससे अप केंद्रीय कक्ष फिसलने चुनाव ट्यूबों के सिरों को अवरुद्ध करके चुनाव ट्यूबों में मक्खियों. टी भूलभुलैया में से प्रत्येक के हाथ में है और खाद्य शीशियों और गिनती में केंद्रीय डिब्बे में मक्खियों लीजिए.
  11. , स्मृति उपाय प्रशिक्षण (4.6) के बाद मक्खियों इकट्ठा करने और खमीर के बिना भोजन शीशियों को टी भूलभुलैया से उन्हें स्थानांतरित करने के लिए. स्टोर (परिचय देखें) ब्याज की स्मृति चरण निर्धारित करने के लिए आवश्यक शेष समय के लिए 25 डिग्री सेल्सियस पर अंधेरे और 70% आर्द्रता में मक्खियों. चरण 4.7 में के रूप में टी भूलभुलैया के लिए मक्खियों reintroduce.
  12. दीर्घकालिक स्मृति के लिए, मक्खियों के कई बैचों एक साथ प्रशिक्षित करने की अनुमति देता है जो एक कस्टम बनाया भूलभुलैया का उपयोग करें. एक 15 मिनट के अंतर चक्र अंतराल (स्पा के साथ प्रशिक्षण के 5 चक्रों प्रशासनCED) या एक अंतर चक्र अंतराल के बिना (जमा). परीक्षण जब तक अंधेरे में 18 डिग्री सेल्सियस पर मक्खियों और 70% नमी बनाए रखें. परीक्षण से पहले, 25 डिग्री सेल्सियस के लिए मक्खियों कदम है और उन्हें कम से कम 1 घंटे के लिए जलवायु के अनुकूल बनाना करने के लिए अनुमति देते हैं. दीर्घकालिक स्मृति प्रशिक्षण के बाद 24 घंटे का आकलन करें.
  13. व्यवहार प्रयोगों के बाद, गर्म पानी और बिना गंध साबुन के साथ गंध कप साफ. 10 μl sigmacote साथ सूखने के बाद, कोट कप. एक माइक्रोवेव ओवन में हीटिंग द्वारा sigmacote सूखी. कभी कभी गर्म पानी और बिना गंध साबुन के साथ कड़ा ट्यूब और गंध ब्लॉक टी भूलभुलैया साफ.

प्रदर्शन सूचकांक के 5 गणना: मक्खियों 'स्मृति का एक उपाय

  1. शून्य से मक्खियों (सीएस की कुल संख्या से विभाजित सदमे बनती गंध (सीएस +) चुनने मक्खियों की संख्या - सदमे बनती गंध (सीएस) से बचने मक्खियों की संख्या के रूप में हर हालत के लिए प्रदर्शन सूचकांक (पीआई) की गणना - + सीएस +) 1.
    पेrformance सूचकांक (पीआई) = (# सीएस - मक्खियों - # सीएस + मक्खियों) / (# कुल मक्खियों)
  2. मातृ एवं शिशु स्वास्थ्य सदमे बनती गंध और अक्टूबर सदमे बनती गंध थी जिसमें से एक था जिसमें प्रयोग की गड़बड़ी के औसत से प्रयोग के अंतिम गड़बड़ी की गणना. यह एक गंध के लिए एक उच्च प्राथमिकता वाले मक्खियों के किसी भी पूर्वाग्रह को हटा.

6 ज्ञानेन्द्रिय नियंत्रण

  1. टी भूलभुलैया 6,7,17 ​​में ~ 40-50 मक्खियों शुरू करने से गंध तीक्ष्णता प्रदर्शन करना.
  2. 90 सेकंड के बाद, चुनाव मुद्दे पर मक्खियों ले जाते हैं, और शुद्ध odors और हवा के बीच चयन करने के लिए उन्हें 2 मिनट अनुमति देते हैं.
  3. लीजिए और मक्खियों गिनती. परीक्षण में भाग लिया है कि उन द्वारा गंध चुना है कि मक्खियों की कुल संख्या से विभाजित करके परिहार प्रतिशत की गणना.
  4. सदमे जेट 6,7,17 ​​के लिए, सदमे चेंबर में मक्खियों परिचय.
  5. बाकी के 90 सेकंड के बाद, मक्खियों एक समान करने से बच सकते हैं, जिसमें से एक 60 वी डीसी बिजली के झटके, प्रशासनएक सदमे के बिना ट्यूब.
  6. मक्खियों का चयन करने के लिए 2 मिनट की अनुमति दें; इकट्ठा करने और मक्खियों गिनती. प्रयोग में मक्खियों की कुल संख्या से सदमे ट्यूब भागने से सदमे से बचा कि मक्खियों की संख्या से भाग दिया झटका परिहार प्रतिशत की गणना. बिजली के झटके से बच गया है कि उन के कुल में केंद्रीय कक्ष में रहते हैं कि मक्खियों को शामिल करें.

Representative Results

प्रदर्शन सूचकांक (पीआई) स्मृति का एक उपाय के रूप में कार्य करता है. तालिका 1 पीआई के एक प्रतिनिधि गणना दिखाता है.

मातृ एवं शिशु स्वास्थ्य के झटके के साथ रखा 3 अक्टूबर के झटके के साथ रखा
(अक्टूबर ट्यूब में) मातृ एवं शिशु स्वास्थ्य से बचने मक्खियों 80 =
(मातृ एवं शिशु स्वास्थ्य ट्यूब में) मातृ एवं शिशु स्वास्थ्य को प्राथमिकता मक्खियों 20 =
पीआई 1 - (80-20) / 80 + 20)
= 0.6
(मातृ एवं शिशु स्वास्थ्य ट्यूब में) अक्टूबर से बचने मक्खियों 75 =
(अक्टूबर ट्यूब में) अक्टूबर पसंद मक्खियों 25 =
पीआई 2 = (75-25) / (25 75)
= 0.5
प्रयोग = (0.6 + 0.5) की गड़बड़ी /2=0.55

तालिका 1 उदाहरण डेटा का उपयोग कर प्रदर्शन सूचकांक का एक प्रतिनिधि गणना. विभिन्न प्रयोगों के लिए प्रदर्शन सूचकांक स्मृति प्रभाव स्पष्ट करने के लिए तुलना की जा सकती. इस तरह एक बारतुलना गुआंगज़ौ एस wildtype वयस्क मक्खियों (WT) और कुंद 1 मक्खियों उत्परिवर्ती वयस्क सीखने के साथ प्रदर्शन प्रयोगों की एक श्रृंखला से परिणाम होता है जो चित्रा 3 में दिखाया गया है. 10 PIs का मतलब मतलब की मानक त्रुटि (SEM) का प्रतिनिधित्व त्रुटि सलाखों के साथ, प्रदान की जाती है. इन परिणामों कुंद मक्खियों wildtype की तुलना में सीखने में एक कमी है कि शो का प्रदर्शन.

चित्रा 1
चित्रा 1 वयस्क प्रयोगात्मक सेट अप. मक्खियों प्रशिक्षित और एक टी भूलभुलैया में जांच की जाती है. प्रशिक्षण बिजली के झटके के बिना एक दूसरे गंध बी द्वारा पीछा बिजली के झटके के साथ एक गंध एक पेश करना शामिल है. मध्य कक्ष में एक आराम की अवधि के बाद मक्खियों एक साथ odors दोनों के साथ प्रस्तुत कर रहे हैं. मक्खियों फंस रहे हैंदो ट्यूबों में एकत्र करने और सीखने / स्मृति स्कोर प्राप्त करने के लिए गिना और.

चित्रा 2
चित्रा 2 वयस्क प्रशिक्षण प्रोटोकॉल. मक्खियों दो चरणों में प्रशिक्षण दिया जाता है. मक्खियों 60 सेकंड के लिए एक गंध बिजली के झटके (अमेरिका) के साथ जोड़ा (सीएस +) प्राप्त जहां पहला कदम. अगले चरण में मक्खियों बिजली के झटके के बिना एक दूसरे गंध (CS-) प्राप्त होता है. मक्खियों तो वे सीएस + और CS- के बीच अपनी पसंद के लिए जांच की जाती है, जिसके बाद 90 सेकंड के लिए आराम करने के लिए अनुमति दी जाती है.

चित्रा 3
चित्रा 3 वयस्क ड्रोसोफिला में कुंद और wildtype सीखने दिखा एक प्रतिनिधि ग्राफ. कुंद मक्खियों प्रशिक्षण की एक सत्र के बाद परीक्षण किया गया. कुंद मक्खियों डब्ल्यूटी (n = 10) की तुलना में सीखने में कमी दिखाते हैं.

Discussion

यहाँ प्रस्तुत ड्रोसोफिला वयस्क घ्राण झटका सीखने परख दीर्घकालिक स्मृति 15-17 सहित स्मृति के विभिन्न चरणों, अंतर्निहित आणविक तंत्र का विश्लेषण की अनुमति देता है. के रूप में अच्छी तरह से circadian लय 18, सो 19, आहार 20,21, वार्धक्य 11-13, neurodegenerative रोग 5 और दवा उपचार स्मृति पर 5,6,19 के प्रभाव का निर्धारण करने के रूप में.

कई शक्तिशाली दृष्टिकोण हाल ही में मक्खियों 3,4,7,11,16,27 में घ्राण स्मृति मध्यस्थता कि तंत्रिका सर्किट के कार्यात्मक इमेजिंग के लिए विकसित किया गया है. ये optogenetic तकनीक ड्रोसोफिला 14,16 में उपलब्ध विभिन्न प्रमोटरों के विशाल प्रदर्शनों की सूची का उपयोग करें. इन प्रमोटरों स्मृति निशान पर विशिष्ट जीन उत्परिवर्तन के प्रभाव का अध्ययन करने के लिए स्मृति न्यूरॉन्स 16,27 में आनुवंशिक रूप से इनकोडिंग कैल्शियम और शिविर संवाददाताओं से व्यक्त करने के लिए उपयोग किया जाता है.

गुवयस्कों में सशर्त प्रमोटरों और म्यूटेशन की ई उपयोग स्मृति 3,4,6,7,13,14 में एक जीन उत्पाद के बाद की विकासात्मक भूमिका का अध्ययन की अनुमति देता है. इमेजिंग और व्यवहार दृष्टिकोण को प्रोत्साहित या आगे उनके कार्य को स्पष्ट करने के लिए स्मृति सर्किट 11,14,16,22-24 में विभिन्न न्यूरॉन्स को बाधित करने के लिए प्रकाश और ऊष्मा सक्रिय चैनल के साथ जोड़ा जा सकता है. इसके अलावा, मशरूम शरीर स्मृति न्यूरॉन्स ड्रोसोफिला घ्राण स्मृति 29 मॉडल का उपयोग किया जा रहा है पूरे सेल पैच दबाना रिकॉर्डिंग 28, और गणितीय और कम्प्यूटेशनल तकनीकों के लिए पहुंच रहे हैं.

यहां पेश साहचर्य स्मृति प्रोटोकॉल के विभिन्न रूपों के साथ संयुक्त इन प्रयोगात्मक अग्रिम,, उम्र बढ़ने और रोग, ड्रोसोफिला, दंड, प्रेरणा, लत इनाम के जवाब में होते हैं कि साहचर्य स्मृति में molecular- और सर्किट स्तर के परिवर्तन के मॉडल के लिए इस्तेमाल किया जा करने की अनुमति 5,6,11-13,16,30-31.

Disclosures

लेखकों का खुलासा करने के लिए कुछ भी नहीं है.

Acknowledgments

हम उड़ तनाव के लिए ब्लूमिंगटन शेयर केन्द्रों को स्वीकार करते हैं. इस काम बीबीएसआरसी (बी बी / G008973 / 1) से अनुसंधान अनुदान द्वारा समर्थित किया गया.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
3-Octanol Sigma 218405
4-Methyl cyclohexanol Sigma 15309-5
Benzaldehyde Sigma 418099
Mineral oil Fluka BP2629-1
Hexyl acetate Sigma 108154
Fructose Sigma F0127
Agarose Bioline BIO-41025

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<em>ड्रोसोफिला</em> वयस्क घ्राण शॉक प्रशिक्षण
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Malik, B. R., Hodge, J. J. L. Drosophila Adult Olfactory Shock Learning. J. Vis. Exp. (90), e50107, doi:10.3791/50107 (2014).More

Malik, B. R., Hodge, J. J. L. Drosophila Adult Olfactory Shock Learning. J. Vis. Exp. (90), e50107, doi:10.3791/50107 (2014).

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