Summary
Kv kanal dysfunktion är förknippad med hjärtarytmier. För att studera de molekylära mekanismer som leder till sådana arytmier vi använder en systematisk protokoll för isolering av förmaks-och ventrikulära kardiomyocyter från Kv kanal tillhörande möss subenhet knockout. Isolerade kardiomyocyter kan sedan omedelbart användas för cellulära elektrofysiologiska studier, biokemiska eller immunofluorescens (IF) analyser.
Abstract
KCNE gener kodar för en liten familj Kv kanal tillhörande subenheter som bildar heteromera komplex med Kv kanal alfa-subenheter att modifiera deras funktionella egenskaper. Mutationer i KCNE gener har hittats i patienter med hjärtarytmier såsom långt QT-syndrom och / eller förmaksflimmer. Emellertid förblir den exakta molekylära patofysiologi som leder till dessa sjukdomar svårfångade. I tidigare studier av elektrofysiologiska egenskaper av sjukdomen som orsakar mutationer i dessa gener har mestadels studerats i heterologa expressionssystem och vi kan inte vara säker på om de rapporterade effekterna kan direkt översättas till inhemska hjärtmuskelceller. I vårt laboratorium använder vi därför en annan strategi. Vi studerar direkt effekterna av KCNE gendeletion i isolerade hjärtmuskelceller från knockoutmöss av cellulär elektrofysiologi - en unik teknik som vi beskriver i detta nummer av Journal of visualiseras experiment. Hjärtana från Genetically modifierade KCNE möss snabbt ut och monteras på en Langendorff apparat genom aorta kanylering. Fri Ca 2 + i myokardiet är bunden av EGTA och dissociation av hjärtmyocyter uppnås därefter genom retrograd perfusion av kranskärlen med en specialiserad lågt Ca 2 +-buffert innehållande kollagenas. Atria, fri högra ventrikulära väggen och den vänstra ventrikeln kan sedan separeras genom mikrokirurgiska tekniker. Kalcium tillsätts sedan långsamt tillbaka till isolerade kardiomyocyter i en multipel steg innefattande tvättförfarandet. Förmaks-och ventrikulära kardiomyocyter av friskt utseende utan spontana kontraktioner därefter omedelbart underkastas elektrofysiologiska analyser av patch clamp-tekniken eller andra biokemiska analyser inom de första 6 timmarna efter isolering.
Protocol
1. Djurens Anestesi och organskörd
- Bedöva musen genom intraperitoneal (ip) injektion av Ketamin (200 mg / kg kroppsvikt) och xylazin (20 mg / kg kroppsvikt).
- Att anticoagulate injicera 250 IE heparin ip för att undvika blodproppar och trombosbildning.
- Vänta tills djup narkos uppnås, som kännetecknas av areflexi. För att kontrollera areflexi, testa kornealreflex genom att försiktigt trycka på hornhinnan eller testflygningen reflex av svansen klämma.
- Överför musen på operationsbordet och fixa det i ryggläge.
- Incise huden och bukväggen under xiphoid och utföra clamshell torakotomi: Förläng snittet på båda sidor längs kustnära bågen och därefter skära revben i den mediala axillarlinjen, avleda uppåt bröstkorgen.
- Öppna hjärtsäcken, hitta stora fartyg. Tryck försiktigt hjärta kaudalt att bättre visa aorta. Kläm fast aorta med pincett.
- Placera hjärtat i konkaviteten av ett par av s cissors och dissekera alla anslutande fartyg med en enda snitt. Se till att bevara en tillräckligt stor del av den stigande aorta för Langendorff kanylering.
- Överför utskurna hjärta omedelbart till en petriskål fylld med iskallt och pre-oxygenized lösning 1 (efter lösningar, se tabell 1).
2. Beredning av hjärta och Langendorff Perfusion
- Kanylera aortan med en 1.8F stålkanyl. Se till att undvika luftemboli.
- Fixera aorta på kanylen med en kirurgisk sutur och spola kranskärl med 1 ml lösning 1.
- Anslut kanyl med en Langendorff-apparat.
- Se till att tiden från torakotomi till Langendorff kanylering inte överstiger 120 sekunder för att undvika förlängd ischemi / reperfusion skada på hjärtmuskeln.
- Perfundera hjärta med 10 ml av Ca 2 + fri lösning 2 (4 ml / min).
- Perfundera hjärta med kollagenaslösning 3 under 8 minuter (4 ml / min).
- Överför hjärtat i en förvärmd 100-mm Petri-skål innehållande låg Ca 2 + lösning 4.
- Ta försiktigt bort aorta och andra icke-hjärtvävnad med sax och kasta den.
- Separat förmak och kammare och fortsätta med varje kammare för sig. Hålla cellerna nedsänkta i lösning 4. Använd små volymer (mindre än 5 ml).
4. Ytterligare Dissociation av kardiomyocyter
- Atriella kardiomyocyter:
- Att individualisera förmaks hjärtmuskelceller överföra förmaken i en separat förvärmd 100-mm odlingsskål och dissociera vävnaden genom att försiktigt dra isär med fin pincett. Säkerställa en nästan fullständig dissociation av vävnaden.
- Använd en 1 ml pipett med en förstorad brand-polerad plast pipettspets för att suspendera cellerna i 1 ml lösning 5 under 5 min.
- Separera cellerna från skräp genom att använda en cell-filter (200 ^ m maskstorlek). <li> Tillsätt 5 ml lösning 5 till cellsuspensionen och centrifugera under 2 minuter vid 16 x g vid rumstemperatur.
- Följande steg drivs under en cellodling huva. Avlägsna supernatanten och åter-suspenderades pelleten i 5 ml lösning 6.
- Efter sedimentering genom tyngdkraften under 10 min i en 15 ml rör, centrifugera under 1 min vid 16 xg vid rumstemperatur. Avlägsna supernatanten. Återsuspendera celler beroende på mängden av dessa i 1-5 ml lösning 6.
- Dissekera vänstra ventrikulära regionen av intresse med fin pincett i 5 ml lösning 4.
- Suspendera cellerna genom att försiktigt pipettera tills det mesta av cellerna separeras. Överför cellen lösningen efter filtrering (200 | im maskstorlek) till en 50 ml rör, tillsätt en volym av 25 ml.
- Centrifugera i 2 min vid 16 xg vid rumstemperatur.
- Följande steg drivs under en cellodling huva. Avlägsna supernatanten, återsuspendera pelleten i 25 mllösning 6 och tillåta sedimentering av cellerna för 10 minuter.
- Räkna cellerna och avlägsna supernatanten, tillsätt 25 - 50 ml lösning 6 på cellerna.
5. Beredning av hjärtmuskelceller för Cellular elektrofysiologi, biokemiska eller IF studier
- För elektrofysiologi studier, hålla myocyter i lösning 6 i en 50 ml rör och inhiberar sedimentering.
- För biokemiska studier, t.ex. kalcium imaging, tallrik myocyter på lamininbelagda cellkultur skålen (slutlig koncentration 20 | ig / ml laminin i PBS).
- För immunofluorescensfärgning förbereda en cellplattan odlingsskål med täckglas och belades med laminin lösning (slutlig koncentration 50 | ig / ml laminin i PBS).
- Ta bort lösningen före plätering myocyter. Platta cellerna och kontrollera celldensiteten genom att använda ett mikroskop.
- Låt myocyter följer täckglas under 1 timme vid 37 ° C i 2% CO 2, avlägsna lösningenoch börja omedelbart med en standard färgningsprocedur protokollet.
- Inkubera med fixativ, t.ex. 4% PFA i PBS (pH 7,5) under 10 min vid rumstemperatur och följ med tre PBS tvättningssteg för 5 minuter vardera.
- Att permeabilisera cellerna och inhibera ospecifik antikroppsbindning inkubera myocyter med 10% serum, 0,3% Triton, 0,2% BSA i PBS under 30 minuter vid rumstemperatur.
- Inkubera med den primära antikroppen under 1 h vid 37 ° C och tvätta såsom beskrivits tidigare.
- Inkubera med den sekundära antikroppen under 1 h vid rumstemperatur. Att motfärga kärnan och α-aktinin använder DAPI och fluorokrom konjugerad falloidin (Alexa Fluor 488, Invitrogen).
- Efter tvätt överföra glaset täckglas försiktigt på silanbehandlade objektglas och bädda celler i fluorescens monteringsmedium.
6. Cellulär Elektrofysiologi
- Utför helcells-patch-clamp inspelningar på freshly isolerade atriella och ventrikulära kardiomyocyter vid rumstemperatur.
- Överför friska visas hjärtmuskelceller i perfusionskammare fylld med en definierad volym av extracellulär badlösning. 117 mM NaCl, 4 mM KCl, 1 mM KH 2 PO 4, 4 mM NaHCOs 3, 1,7 mM MgClz 2, 3 mM CoCl 2, 10 mM HEPES, 10 mM glukos, och 0,02 mM tetrodotoxin (TTX), (pH 7,4) . Använd NaOH för pH-värde justering.
- Använd rätt utrustning patch clamp (dvs. IX71 inverterat mikroskop, en Multiclamp 700B förstärkare, en Digidata 1440A insamlingssystem och PC med pClamp10.3 programvara (Molecular Devices)).
- Använd patch pipetter med resistanser på 3-5 MQ när de fylls med intracellulär lösning innehållande 130 mM KCl, 2 mM MgCl2, 11 mM HEPES, 11 mM EGTA, 5 mM Na-2 ATP, 0,4 mM Na 2 GTP, 5 mM Na-2 CP och 4,9 mM CaClj 2 (pH 7,2). Använd KOH för pH värde justering.
- Evoke utåt K + strömmar during 4,5-sek spänningssteg att testa potentialer mellan -60 och +50 mV i 10-mV steg från en hållpotential av -70 mV efter en 20-ms förpuls till -40 mV.
- Kontrollera överslag är alltid <100 pA.
- För dissekering av olika K + strömmar använder specifika hämmare såsom 4-aminopyridin (4-AP, ICN Biomedicals, Irvine, CA, USA), Heteropodatoxin 2 (HpTx2, Alomone) eller tetraetylammonium (TEA, Sigma). Stamlösningar bör utarbetas i extracellulär bad lösning och appliceras direkt på närmast möjliga närhet av cellen via en mikrospets efter "baseline" inspelningar. Jämvikt bör tillåtas under 2-3 minuter innan "läkemedel" inspelningar.
- För analys normalisera aktuella amplituder i enskilda celler till cellstorlek (hel-cellmembranet kapacitans). Analysera data offline med pClamp10.3 programvara (Molecular Devices) eller jämförbar programvara.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Isolering av vuxna murina hjärtmuskelceller från genetiskt modifierade möss för att studera funktionen av specifika gener av intresse in vitro har blivit ett kraftfullt verktyg för att ytterligare förstå hjärtats patofysiologi. Denna metod används idag av endast en liten men ökande antal grundläggande laboratorier över hela världen. Däremot kan isolering av vuxna ventrikulära murina hjärtmuskelceller vara svårt och behöver göras grundligt och upprepade av erfarna händer. Figur 1 visar nyligen isolerade exemplifierande förmaks-och ventrikulära kardiomyocyter. För ventrikulära kardiomyocyter rekommenderar vi att bara använda stavformade, strimmig ventrikulära myocyter av friskt utseende utan spontana sammandragningar. Jämfört med ventrikulära myocyter, atriella myocyter är kortare och tunnare. Den karaktäristiska ränder och stav-form ventrikulära kardiomyocyter saknas hos vuxna förmaket murina hjärtmuskelceller. Avkastningen för ventrikulära kardiomyocyter isoleradefrån en intakt mus hjärta är 5x10 5 - 1x10 6. För atriella kardiomyocyter är betydligt mindre. Vi förväntar oss vanligen att isolera ca 5 - 25.000 atriala celler från en mus hjärta. När det väl isolerats kan kardiomyocyter underkastas olika in vitro-tekniker, inklusive elektrofysiologiska inspelningar (figur 1). Vi rekommenderar att använda isolerade hjärtmuskelceller inom de första 6 h efter isolering. Figur 1 visar exemplifierande Kv kanal utåt inspelningar (till höger) av förmaks-och ventrikulära kardiomyocyter framkallade av olika depolarisation steg med hela celler patch clamp teknik. Den karakteristiska formen av murin vuxen ventrikulär och atriell Kv kanal repolarizing strömmar kan ses över en viss tid kurs (här 4 sek, figur 1). Observera att strömamplituden är betydligt lägre i murina vuxna atriella kardiomyocyter jämfört med ventrikulära cardiomycytes.
| Lösning | Innehåll (i mm, om inte annat anges) |
| 1 | 117 NaCI, 4 KCl, 10 HEPES, 1 KH 2 4 PO, 4 NaHCOs 3, 1,7 MgClz 2, 10 Glukos |
| 2 | 117 NaCI, 4 KCl, 10 HEPES, 1 KH 2 PO 4, 4 NaHCOs 3, 1,7 MgClz 2, 10 Glukos + 229,5 iM EGTA |
| 3 | 117 NaCI, 4 KCl, 10 HEPES, 1 KH 2 PO 4, 4 NaHCOs 3, 1,7 MgClz 2, 10 Glukos, CaCl2 0,1 + 0,8 g / L kollagenas typ 2 (300 U / L) * |
| 4 | 117 NaCI, 4 KCl, 10 HEPES, 1 KH 2 PO 4, 4 NaHCOs 3, 1,7 MgClz 2, 10 Glukos, CaCl2 0,2 + 0,8 g / L kollagenas typ 2 (300 U / l) * + BSA (1 g / L) |
| 5 | 117 NaCI, 4 KCl, 10 HEPES, 1 KH 2 4, 4 NaHCOs 3, 1,7 MgClz 2, 10 Glukos, CaCl2 0,5 + BSA (1 g / L) |
| 6 | 117 NaCI, 4 KCl, 10 HEPES, 1 KH 2 PO 4, 4 NaHCOs 3, 1,7 MgClz 2, 10 Glukos, CaCl2 1,0 + BSA (1 g / L) |
Tabell 1. Isolering lösningar. Jämvikt under 10 minuter med karbogen (95% O 2, 5% CO 2), vid 37 ° C pH = 7,4 (NaOH). * Aktivitet kan bero på batchnummer, så tidigare testning av kollagenasaktivitet rekommenderas.
Figur 1 Övre vänster:. Föredömligt ventrikulär cardiomyocyte färgas med DAPI (kärnor, blå) och Alexa Mjöl 488 Phalloidin (α-aktinin, grön) Uppe till höger:. Exempel spår av helcells patch clampinspelning Nedre vänster:.. Exempel atriell cardiomyocyte färgas med DAPI (kärnor, blå) och fluorokrom konjugerad Phalloidin (α-aktinin, grön) Nedre högra: Exempel spår av helcell patch-clamp inspelning.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Med den ökande utvecklingen av genetiskt modifierade musstammar för att studera hjärtats funktion och hjärt patologi relaterad till gendeletion finns också ett ökat intresse för specialiserade metoder för att studera effekterna av specifika gendeletion in vitro. I vårt laboratorium studeras roller en familj av Kv kanal kompletterande subenheter på hjärtats repolarisering. De KCNE generna består en familj av 5 gener (KCNE1-5) som spelar en viktig roll i människans ventrikulär och atriell repolarisering 11, 15. KCNEs är enkla transmembrandomän Kv kanal underordnade subenheter som inte kan passera några kalium strömmar på egen hand, men de kan bilda komplex med Kv kanal alfa-subenheter och modulera deras funktionella egenskaper såsom slussning, konduktans, farmakologi och människohandel i cellen betydligt. Mutationer och gemensamma polymorfismer i KCNE2 till exempel associeras med ärvda och förvärvade former oF långt QT-syndrom (LQTS) 1, 16.
Pionjärarbete i isolering och elektrofysiologiska karakterisering av olika Kv-subenheter kanal alfa och deras bidrag till råtta, men också mus ventrikulär och atriell repolarisering har gjorts av den grupp av Dr Nerbonne vid Washington University i St Louis i 1990-talet 3, 5, 7. Emellertid är betydligt mindre känt om bidrag Kv kanal accessoriska subenheter till förmaks-och ventrikulära repolarisering inom gnagare myokardiet. KCNEs har huvudsakligen studerats i heterologa expressionssystem såsom CHO-celler och Xenopus laevis oocyter. Med hjälp av dessa metoder KCNE subenheter har visat sig vara mycket promiskuös att bilda heteromera komplex Kv kanal identifierar en rad olika Kv-subenheter kanal alfa som potentiella partners för KCNEs 10. Däremot kan vi inte vara säkra på om dessa specifika heteromer Kv kanal komplementXES förekommer också i inhemska kardiomyocyter eller om de observerade heteromera KCNE Kv kanal alfa-subenhet partnerskap är heterologa uttryck artefakter 1. Vi antog därför isolering teknik och Kv kanal protokoll inspelning från Nerbonne laboratoriet och ändrat dem som anges i protokollet i den här artikeln för att dissekera de olika Kv-kanaler i murin repolarisering, som kontrolleras av KCNE gener. Med hjälp av denna metod fann vi nyligen att Kv-kanalen tillhörande subenhet KCNE2 styr två distinkta Kv strömmar i murina ventrikulära hjärtmuskeln (jag Kslow, 1 och jag, f). Genom tillämpning av specifika inhibitorer för olika kaliumkanaler kunde vi visa att strykningen av murina KCNE2 genen orsakar en betydande minskning av både Kv1.5 och Kv4.2 strömmar 14. Reglering av Kv1.5 med KCNE2 var inte tidigare känd, wheReas reglering av Kv4.2 med KCNE2 har redan visats in vitro av heterologa uttryck studier 20.
Förmaksflimmer (AF) är den vanligaste ihållande arytmi i klinisk praxis och förknippas med betydande morbiditet och mortalitet 4. Mutationer i alla olika KCNEs har nyligen satts i samband med AF hos människor. Nyligen har två icke-synonyma mutationer finns i KCNE1 hos patienter med förmaksflimmer som inte fanns i kontrollgruppen (Olesen et al., 2012). Mekanistiskt identifierade heterologa uttryck studier en vinst-of-funktion effekt KCNQ1 strömmar som den sannolika underliggande mekanismen. Dessutom har nyligen visades det att KCNE1 - / - möss lider spontana episoder av paroxysmala AF 17. I en studie som utvärderar 28 obesläktade kinesiska familjer med ensamstående AF Yang et al. identifierat en mutation i KCNE2,vilket resulterade i en arginin-till-cystein substitution (R27C). Funktionell analys av den mutanta kanalen i heterologa expressionssystem studier avslöjade en förstärkning-av-funktion effekt på KCNQ1 kanaler (I Ks) 18. Emellertid kan KCNE2 bilda också komplex med en rad andra Kv kanal α-subenheter innefattande Kv1.5, som också har varit inblandad i AF. Vi har nyligen visat att KCNE2 kan modulera Kv1.5 strömmar i murina ventrikeln leder till en förlängning av det ventrikulära APD hos möss 15. Därför kan störningar i förmaket Kv1.5 strömmar genom KCNE2 dysfunktion representerar också den underliggande arytmogena mekanismen för AF i vår KCNE2 - / - musmodell och / eller hos patienter hyser mutation i KCNE2 lider AF. Mutationer i KCNE3 var också nyligen identifierats i en patient med familjär AF 8. Elektrofysiologiska inspelningar visade en steg omtatet aktivitet av Kv4.3/KCNE3 och Kv11.1/KCNE3 genererade strömmar av mutationen, vilket ger känslighet för mutation transportörer att snabbare hjärtats aktionspotential repolarisering och därmed sårbarhet för inåtgående wavelets i förmaken. Den KCNE3 V17M missense-mutation hade dock ingen effekt KCNE3/KCNQ1 strömmar trots att KCNE3 bildar funktionella komplex med KCNQ1 i myokardiet. Vidare KCNE3 nyligen visat sig vara upp regleras i en befolkningsgrupp med valvulär AF stöder hypotesen att KCNE3 spelar en roll inte bara i familjär AF, men också valvulär AF 6. Nyligen har en enstaka nukleotidpolymorfism (G / T) som identifieras i KCNE4 resulterar i en glutaminsyra (Glu, E) / asparaginsyra (Asp, D) substitution vid position 145 av KCNE4 peptid 19. Efterföljande funktionsanalys av denna polymorfism avslöjade att KCNE4 polymorfismutövar effekten av "förstärkning av funktion" på KCNQ1 kanalerna 9. Återigen var dessa studier genomförs i heterologa expressionssystem och experimentella bevis från infödda hjärtmuskelceller saknas fortfarande. På senare tid har en isolerad icke-familjär fall av AF med en missens (L65F) mutation identifierats i en dansk kohort av 158 patienter med förmaksflimmer 12. Vidare har en polymorfism i KCNE5 (C97T) identifierats inom samma studiepopulationen, vilket var förenat med en högre risk för att utveckla AF 13. Interaktion av både mutant β-subenheter (KCNE2 och KCNE5) med KCNQ1 kanalen gav en vinst-of-funktion effekt med ökad IKS strömmar. KCNQ1 α-subenheten av IKs kanal kan associeras med någon av de fem tillbehör β-subenheter (KCNE1-5). Därför KCNQ1 verkar vara en trolig kandidat α-subenheten partner när du söker efter en molekylär underlag in patogenesen av KCNE-associerad AF. Med tanke på uttalade promiskuitet av KCNE subenheter andra molekylära mål är möjliga och därför tänker specifikt undersöka dessa möjliga KCNE / Kv alfa-subenheten interaktioner. Studier i vårt laboratorium är därför också närvarande syftar till att klarlägga mekanismerna bakom KCNE-associerad AF utnyttjar tekniken vi beskriver i denna artikel - Isolering av murina atriella kardiomyocyter och efterföljande in vitro elektrofysiologiska inspelningar med tillämpning av specifika inhibitorer till olika Kv subenheter kanal alfa och biokemiska analyser av inhemska hjärtmuskelceller från KCNEx knockoutmöss.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Vi har inget att lämna ut.
Acknowledgments
Detta arbete har finansierats med bidrag från Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG), Fritz-Thyssen-Stiftung och Charité / MDC.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Tetrodotoxin | Alomone | ||
| 4-aminopyridine | ICN Biomedicals | ||
| Heteropodatoxin 2 | Alomone | ||
| Tetraethylammonium | Sigma Chemicals | ||
| Collagenase Type 2 | Worthington |
References
- Abbott, G. W., Goldstein, S. A., Sesti, F. Do all voltage-gated potassium channels use MiRPs? Circ. Res. 88, 981-983 (2001).
- Abbott, G. W., Sesti, F., Splawski, I., Buck, M. E., Lehmann, M. H., Timothy, K. W., Keating, M. T., Goldstein, S. A. MiRP1 forms IKr potassium channels with HERG and is associated with cardiac arrhythmia. Cell. 97, 175-187 (1999).
- Barry, D. M., Trimmer, J. S., Merlie, J. P., Nerbonne, J. M. Differential expression of voltage-gated K+ channel subunits in adult rat heart. Relation to functional K+ channels? Circ. Res. 77, 361-369 (1995).
- Benjamin, E. J., Wolf, P. A., D'Agostino, R. B., Silbershatz, H., Kannel, W. B., Levy, D. Impact of atrial fibrillation on the risk of death: the Framingham Heart Study. Circulation. 98, 946-952 (1998).
- Bou-Abboud, E., Nerbonne, J. M. Molecular correlates of the calcium-independent, depolarization-activated K+ currents in rat atrial myocytes. J. Physiol. 517 (Pt 2), 407-420 (1999).
- Gaborit, N., Steenman, M., Lamirault, G., Le, M. N., Le, B. S., Lande, G., Leger, J., Charpentier, F., Christ, T., Dobrev, D., Escande, D., Nattel, S., Demolombe, S. Human atrial ion channel and transporter subunit gene-expression remodeling associated with valvular heart disease and atrial fibrillation. Circulation. 112, 471-481 (2005).
- Guo, W., Xu, H., London, B., Nerbonne, J. M. Molecular basis of transient outward K+ current diversity in mouse ventricular myocytes. J. Physiol. 521 (Pt 3), 587-599 (1999).
- Lundby, A., Ravn, L. S., Svendsen, J. H., Hauns, S., Olesen, S. P., Schmitt, N. KCNE3 mutation V17M identified in a patient with lone atrial fibrillation. Cell Physiol. Biochem. 21, 47-54 (2008).
- Ma, K. J., Li, N., Teng, S. Y., Zhang, Y. H., Sun, Q., Gu, D. F., Pu, J. L. Modulation of KCNQ1 current by atrial fibrillation-associated KCNE4 (145E/D) gene polymorphism. Chin Med. J. (Engl.). 120, 150-154 (2007).
- McCrossan, Z. A., Abbott, G. W. The MinK-related peptides. Neuropharmacology. 47, 787-821 (2004).
- Pongs, O., Schwarz, J. R. Ancillary subunits associated with voltage-dependent K+ channels. Physiol. Rev. 90, 755-796 (2010).
- Ravn, L. S., Aizawa, Y., Pollevick, G. D., Hofman-Bang, J., Cordeiro, J. M., Dixen, U., Jensen, G., Wu, Y., Burashnikov, E., Haunso, S., Guerchicoff, A., Hu, D., Svendsen, J. H., Christiansen, M., Antzelevitch, C. Gain of function in IKs secondary to a mutation in KCNE5 associated with atrial fibrillation. Heart Rhythm. 5, 427-435 (2008).
- Ravn, L. S., Hofman-Bang, J., Dixen, U., Larsen, S. O., Jensen, G., Haunso, S., Svendsen, J. H., Christiansen, M. Relation of 97T polymorphism in KCNE5 to risk of atrial fibrillation. Am. J. Cardiol. 96, 405-407 (2005).
- Roepke, T. K., Abbott, G. W. Pharmacogenetics and cardiac ion channels. Vascul. Pharmacol. 44, 90-106 (2006).
- Roepke, T. K., Kontogeorgis, A., Ovanez, C., Xu, X., Young, J. B., Purtell, K., Goldstein, P. A., Christini, D. J., Peters, N. S., Akar, F. G., Gutstein, D. E., Lerner, D. J., Abbott, G. W. Targeted deletion of kcne2 impairs ventricular repolarization via disruption of I(K,slow1) and I(to,f). FASEB J. 22, 3648-3660 (2008).
- Sesti, F., Abbott, G. W., Wei, J., Murray, K. T., Saksena, S., Schwartz, P. J., Priori, S. G., Roden, D. M., George, A. L., Goldstein, S. A. A common polymorphism associated with antibiotic-induced cardiac arrhythmia. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 97, 10613-10618 (2000).
- Temple, J., Frias, P., Rottman, J., Yang, T., Wu, Y., Verheijck, E. E., Zhang, W., Siprachanh, C., Kanki, H., Atkinson, J. B., King, P., Anderson, M. E., Kupershmidt, S., Roden, D. M. Atrial fibrillation in KCNE1-null mice. Circ. Res. 97, 62-69 (2005).
- Yang, Y., Xia, M., Jin, Q., Bendahhou, S., Shi, J., Chen, Y., Liang, B., Lin, J., Liu, Y., Liu, B., et al. Identification of a KCNE2 gain-of-function mutation in patients with familial atrial fibrillation. Am. J. Hum. Genet. 75, 899-905 (2004).
- Zeng, Z. Y., Pu, J. L., Tan, C., Teng, S. Y., Chen, J. H., Su, S. Y., Zhou, X. Y., Zhang, S., Li, Y. S., Wang, F. Z., et al. [The association of single nucleotide polymorphism of slow delayed rectifier K+ channel genes with atrial fibrillation in Han nationality Chinese]. Zhonghua Xin. Xue. Guan. Bing. Za Zhi. 33, 987-991 (2005).
- Zhang, M., Jiang, M., Tseng, G. N. minK-related peptide 1 associates with Kv4.2 and modulates its gating function: potential role as beta subunit of cardiac transient outward channel? Circ. Circ. Res. 88, 1012-1019 (2001).
